蓮子心對不穩定型心絞痛患者血清基質金屬蛋白酶水平及生存質量的影響*

朱紅俊　蘇偉　龔少愚　高楓　周春剛　陸曙

（南京中醫藥大學無錫附屬醫院，江蘇無錫214001）

·研究報告·

蓮子心對不穩定型心絞痛患者血清基質金屬蛋白酶水平及生存質量的影響*

朱紅俊蘇偉△龔少愚高楓周春剛陸曙

（南京中醫藥大學無錫附屬醫院，江蘇無錫214001）

目的觀察蓮子心對不穩定型心絞痛（UAP）患者的血清基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）及基質金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）水平和生存質量的影響。方法研究共計納入UAP患者120例以及健康人30例（正常組），其中UAP患者隨機分為兩組各60例，兩組均進行標準化基礎治療，其中治療組加用蓮子心顆粒劑，療程3周。治療前后檢測血清MMP-9和TIMP-1水平變化；并采用西雅圖心絞痛量表（SAQ）進行生活質量評價。結果與正常組相比，治療前治療組和對照組的血清MMP-9、TIMP-1水平均明顯增高（P＜0.001），但治療組和對照組間差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后，治療組和對照組血清MMP-9及TIMP-1水平均明顯下降（P＜0.001）；且治療組血清MMP-9及TIMP-1水平均明顯低于對照組（P＜0.05或P＜0.01）。治療后，對照組和治療組均可使SAQ評分升高（P＜0.01），但是治療后治療組AS、AF、TS評分明顯高于對照組（P＜0.01）。結論蓮子心可在標準治療基礎上，降低UAP患者患者血清MMP-9、TIMP-1水平，從而改善生存質量。

不穩定型心絞痛蓮子心基質金屬蛋白酶-9基質金屬蛋白酶抑制因子-1生存質量

不穩定型心絞痛（UAP）在中醫學中多歸于“胸痹”“真心痛”等范疇，《周慎齋遺書·心痛》則明確提出了“心痛有屬心火者”，因此，清熱解毒法治療冠心病心絞痛等在臨床逐步被重視。筆者采用清熱泄濁補腎方治療冠心病患者，可以明顯改善血管內皮功能指標，并提高患者生存質量［1］。蓮子心具有“清心去熱”（《大明一練志》）、“瀉心，堅腎”（《醫林纂要》）的作用，切合UAP的熱邪致病機。前期筆者采用蓮子心對UAP患者進行干預，發現其可以調節血清基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）及基質金屬蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）表達水平，從而改善SAQ生存質量評分［2］。本文則從血清學角度，進一步探討了蓮子心對UAP患者的血清MMP-9、TIMP-1水平以及生存質量的影響。

1　資料與方法

1.1病例選擇UAP的診斷標準參照WHO缺血性心臟病的命名與診斷標準［3］。納入標準：年齡50～80歲；滿足UAP診斷標準；且冠狀動脈造影術發現至少

1支血管或至少1處血管狹窄超過60%。排除標準：精神病患者；妊娠或哺乳期婦女及過敏體質者；急性心肌梗死、重度心律失常、重度心衰者；動脈粥樣硬化閉塞或主動脈瘤患者；懷疑或確有酒精/藥物濫用病史者；經檢查證實合并有心、腦、肺、肝、腎和造血系統等嚴重原發疾病者；伴發其他可能妨礙其入組或影響其生存的嚴重疾病者。

1.2臨床資料選取120例南京中醫藥大學無錫附屬醫院心血管病科2007年10月至2011年12月住院患者。均符合上述病例選擇標準。本研究經本院倫理委員會的批準同意，并嚴格遵守《赫爾辛基宣言》倫理學要求。按照隨機數字表法分為兩組，各60例。其中治療組男性30例，女性30例；年齡56～77歲，平均（71.35±8.70）歲；病程2 h至28年，平均（8.73±11.12）年。對照組男性27例，女性33例；年齡54～78歲，平均（71.65±9.93）歲；病程1 h至40年，平均（8.91± 13.62）年。兩組臨床資料差異均無統計學意義（P＞0.05）。同時，匹配年齡性別后，從本院在職及退休職工中納入30例健康人作為正常對照組（簡稱正常組）。本研究取得了所有志愿者的知情同意。

1.3治療方法兩組均給予西醫常規治療，包括硝酸酯類藥物如單硝酸異山梨酯片（魯南貝特制藥有限公司，20 mg，每日2次）、硝酸異山梨酯片（南京白敬宇制藥有限責任公司，5～10 mg，每天3次）、硝酸甘油（廣州白云山明興制藥有限公司，每日5～20 mg，根據病情調整），他汀類調脂藥物如阿托伐他汀鈣片（輝瑞制藥有限公司，10～20 mg，每日1次）、氟伐他汀鈉膠囊（北京諾華制藥有限公司，40 mg，每晚1次）、阿司匹林（拜耳醫藥有限公司，100～300 mg，每日1次）、低分子肝素鈣（Sanofi Winthrop，0.4 mL，每12小時1次），血管緊張素轉換酶抑制劑如貝那普利片（北京諾華制藥有限公司，10 mg，每日1次）、培哚普利片（Les Laboratoires Servier Industrie，4 mg，每日1次）等，無禁忌證時使用β受體阻滯劑如美托洛爾片（阿斯利康制藥有限公司，6.25～100 mg，每日2次）、比索洛爾片（默克有限公司，2.5～5 mg，每日1次）等，均為全程長期使用。兩組間常規治療所用藥物的品種、劑量、療程差異無統計學意義。治療組另口服蓮子心顆粒劑（天江制藥廠），每次3 g，每日2次。兩組均以3周為1療程。治療1個療程。

1.4觀察指標于入院24 h內凌晨空腹抽取靜脈血2 mL，慢慢注入無菌干燥帶塞試管中，即刻送實驗室，室溫下血液自然凝固20 min后，以2000 r/min離心15 min，收集上清。如有沉淀形成，應再次離心。分離血清后統一編號，-70℃冰箱保存。治療3周后重復上述過程。血清MMP-9和TIMP-1水平的檢測采用酶聯免疫標記測定（ELISA），試劑盒由上海西唐生物公司提供。實驗方法及步驟嚴格按照說明書進行。生存質量評分采用西雅圖心絞痛量表（SAQ）進行評分，由課題組專職副主任醫師于入院即刻及治療3周后進行評估，所有評分均采用統一的紙質SAQ量表進行評分，評分內容包括軀體活動受限程度（PL）、心絞痛穩定狀態（AS）、心絞痛發作情況（AF）、治療滿意程度（TS）以及疾病認識程度（DP）。

1.5統計學處理采用SPSS16.0統計軟件處理。計量資料以（±s）表示。療效分析組間比較采用兩獨立樣本的雙側student-t檢驗，組內治療前后比較采用配對樣本的雙側student-t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

表1　各組血清MMP-9、TIMP-1水平比較（μg/L，±s）

表1　各組血清MMP-9、TIMP-1水平比較（μg/L，±s）

與正常組比較，▼P＜0.01；與本組治療前比較，*P＜0.01；與對照組治療后比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別n 時間MMP-9TIMP-1正常組30治療組60治療前114.12±62.9022.13±11.62治療前920.26±95.77▼91.99±10.68▼對照組60治療后114.13±7.52*22.14±1.38*治療前944.16±95.48▼96.27±16.76▼治療后227.05±10.25*△△26.33±0.71*△

2.1各組患者血清MMP-9及TIMP-1水平比較見表1。治療前治療組和對照組的血清MMP-9、TIMP-1水平均高于正常組（P＜0.01）；治療組和對照組之間血清MMP-9、TIMP-1水平差異無統計學意義（P＞0.05）。治療后治療組、對照組血清MMP-9、TIMP-1水平均較治療前降低（P＜0.01），組間差異有統計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。

2.2兩組患者生存質量比較見表2。治療前，兩組SAQ各項評分（PL、AS、AF、TS、DP）相當（P＞0.05）。治療后，對照組和治療組SAQ評分均較治療前升高（P＜0.01），治療組AS、AF、TS評分明顯高于對照組（P＜0.01）。

表2　各組生存質量SAQ評分比較（分，±s）

表2　各組生存質量SAQ評分比較（分，±s）

組別時間PLASAF TSDP治療組治療前（n=60）治療后對照組治療前22.39±7.7232.62±10.7437.67±8.23 68.45±14.46*87.67±10.45*△△84.62±14.19*△△22.14±6.1331.76±8.1638.38±9.17 36.14±5.1559.87±14.65 85.71±13.75*△△71.13±16.79*35.47±7.3757.68±13.91（n=60）治療后64.9±14.51*75.25±13.09*72.72±12.97*69.28±12.67*70.91±15.75*

3　討論

UAP實質上是一個慢性炎癥的急性惡化過程。在動脈粥樣硬化斑塊從穩定向不穩定狀態轉化的過中，炎癥起著至關重要的作用［4］，基質金屬蛋白酶（MMPs）是重要的炎癥因子之一，在UA的發病過程中起著重要作用，它可損害血管內皮功能，影響動脈粥樣硬化斑塊的穩定性，如MMP-9可促進血管中膜平滑肌細胞遷移、增殖［5］。而對冠心病心絞痛患者而言，血管內皮功能下降可導致患者SAQ評分下降，兩者有密切關系［1］。而且，血管內皮細胞受到損害時，會分泌多種炎癥因子，誘導內皮細胞分泌MMP-2和MMP-9降解基底膜，MMP-9可促進血管中膜平滑肌細胞遷移、增殖，促使動脈粥樣硬化斑塊形成，繼而斑塊內的炎性細胞又進一步釋放大量的MMP-9［6］，進一步促進纖維原降解，從而導致臨床事件的發生。TIMP-1則是活性MMP-9特異性抑制物，可與活化的MMP-9形成1∶1的復合物，阻斷MMP-9與底物結合，從而抑制其活性，減少基質膠原的降解。

筆者前期研究發現，UAP患者外周血MMP-9 mRNA表達水平是明顯增高的；且MMP-9 mRNA的表達與生存質量SAQ評分中PL、AF、TS的相關系數分別為-0.178、-0.204、-0.434，呈明顯負相關，具有統計學差異［2］，證實了MMP-9表達對UAP患者生存質量有影響。而蓮子心則可以調節MMP-9、TIMP-1基因表達水平，從而改善UAP患者的SAQ生存質量評分［2］。但是基因表達和下游蛋白產物的表達關系是非線性的。本研究從MMP-9基因表達改變是否能導致下游效應蛋白改變而影響生存質量入手。結果顯示，UAP患者的血清MMP-9和TIMP-1水平也是明顯高于正常組的，提示對于UAP患者，還存在血清MMP-9和TMIP-1水平升高的病理過程，從而影響了UAP患者的血管內皮功能。而本課題組前期研究已經證實，冠心病患者血管內皮功能指標內皮素-1和一氧化氮水平的改變與SAQ生活質量積分是顯著相關的［1］。這從另外一個角度佐證了本文的研究結果是和文獻相一致的。

現代研究也發現，火邪可熏蒸痰濕、瘀血，從而化生濁邪，導致動脈硬化相關疾病的發生、發展［7］。因此，清熱解毒法治療冠心病、心絞痛等在臨床已經逐步被重視并運用，取得良好的臨床效果。研究證實，采用清熱泄濁補腎方法治療冠心病患者，可以明顯改善血管內皮功能指標，降低內皮素-1水平，提高一氧化氮水平［1］；并且抑制內皮炎癥反應指標，降低炎癥因子白介素6的水平［8］；并提高冠心病患者SAQ評分，改善了冠心病患者的生存質量［1，8］。

本研究中采用的干預藥物蓮子心，具有“瀉心，堅腎”（《醫林纂要》）、“清心去熱”（《大明一練志》）的作用，與中醫典籍記載及現代研究證實的胸痹心痛病熱邪致病的病機相吻合。其主要成分蓮心堿、異蓮心堿和甲基蓮心堿等。研究證實，對于二腎一夾腎血管性高血壓大鼠，蓮心堿可以提高心肌肌漿網Ca2+-ATP酶（SERCA）的活力的作用［9］。具有“清心、瀉心”作用的蓮子心治療血管疾病具備現代藥理學基礎。此前，筆者采用蓮子心對UAP患者進行干預研究也證實，對于UAP患者，蓮子心可在標準治療基礎上，通過進一步降低MMP-9 mRNA表達水平及M/Tr比值、提高TIMP-1 mRNA表達水平，從而進一步改善UAP患者的生存質量SAQ評分，特別是提高AS、AF、TS 3項的評分［2］。因此，采用蓮子心“清心去熱”，可以干預UAP患者熱邪致病的中醫病機，并抑制炎癥反應，提高部分生存質量指標。

而相對于mRNA表達，MMP-9及TIMP-1的血清水平與血管內皮功能及炎癥反應之間的關系可能更為密切。本研究結果則顯示，對于UAP患者，治療組和對照組均可以明顯降低血清MMP-9及TIMP-1水平，差異有統計學意義（P＜0.01）。SAQ評分也證實，治療組和對照組均可以提高UAP患者生存質量，減輕UAP患者軀體活動受限程度，降低心絞痛發作次數，提高心絞痛穩定狀態治療效果，以及疾病認識程度；但是，加用蓮子心的治療組AS、AF、TS均值升高更明顯。

因此，本研究可以證實蓮子心可在標準治療基礎上，降低UAP患者MMP-9及TIMP-1水平，從而改善生存質量。

［1］Hongjun Zhu，Shu Lu，Wei Su，et al.Effect of Liandouqingmai Recipe on life quality and vascular endothelial injury in patients with coronary heart disease［J］.J Tradit Chin Med，2012，32（4）：529-533.

［2］蘇偉，龔少愚，高楓，等.蓮子心對不穩定心絞痛患者生活［3］International Heart Association/International Col lege of Cardiology and the Named Standardization Joint Task Team of WHO.Naming and diagnostic criteria of ischemic heart disease［J］.Chin J Cardiol，1981，9：75-76.

質量及基質金屬蛋白酶-9和基質金屬蛋白酶抑制因子-1 mRNA表達水平的影響［J］.中華中醫藥雜志，2014，29（8）：2640-2644.

［4］Shah PK.Mechanisms of plaque vulnerability and rupture［J］. J Am Coll Cardiol 2003，41（4 Suppl S）：15S-22S.

［5］Cho A，Reidy MA.Matrix metalloproteinase-9 is necessary for the regulation of smooth muscle cell replication and migration after arterial injury［J］.Circ Res，2002，91（9）：845-851.

［6］Shu J，Ren N，Du JB，et al.Increased levels of interleukin-6 and matrix metalloproteinase-9 are of cardiac origin in acute coronary syndrome［J］.Scand Cardiovasc J，2007，41（3）：149-154.

［7］朱紅俊，陸曙.動脈粥樣硬化痰瘀化濁論［J］.中國中醫急癥，2009，18（1）：70，100.

［8］Hongjun Zhu，Shu Lu，Wei Su，et al.Effect of Liandouqingmai recipe on quality of life and inflammatory reactions of patients with coronary heart disease［J］.J Tradit Chin Med，2014，34（5）：539-543.

［9］陸曙，龔少愚，張志斌.蓮心堿對高血壓大鼠左室肥厚及心肌肌漿網鈣泵活力的影響［J］.江蘇中醫藥，2006，27（2）：59-60.

The Effects of Plumula Nelumbinis on the Levels of Matrix Metalloproteinase-9 and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1 and Life Quality in Patients with Unstable Angina

ZHU Hongjun，SU Wei，GONG Shaoyu，et al.Wuxi Hospital Affiliated to Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu，Nanjing 214001，China

Objective：To observe the effects of Plumula nelumbinis on the levels of Matrix Metalloproteinase-9（MMP-9）and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-1（TIMP-1）and life quality in patients with unstable angina. Methods：120 patients with unstable angina were randomly divided into the treatment group（n=60）and the standard treatment group（the control group，n=60）.A normal group of 30 healthy persons was additionally set up. The treatment group and the control group both received standard treatment，and the treatment group was added Plumula nelumbinis.The course of treatment lasted for 3 weeks.Changes in levels of MMP-9 and TIMP-1 were measured and Seatle Angina Questionnaire（SAQ）was adopted in studying life quality before and after treatment. Results：Before treatment，compared with the normal group，the average levels of MMP-9 and TIMP-1in the other two groups increased obviously（P＜0.001），but there was no significant difference in the average levels of MMP-9 and TIMP-1 in the control group and the treatment group（P＞0.05）.After treatment，there was an obvious drop in the average levels of MMP-9 and TIMP-1in the control group and the treatment group（P＜0.001），and that of the treatment group was lower than that of the control group（P＜0.01 or P＜0.05）.There was no significant difference in the scores of SAQ（PL，AS，AF，TS，DP）between two group before treatment（P＞0.05）.After treatment，the scores of SAQ（PL，AS，AF，TS，DP）were higher than before treatment（P＜0.01），but the scores of SAQ（AS，AF，TS）in the treat group were obviously higher than that of the control groups（P＜0.01）.Conclusion：Plumula nelumbinis can decline the levels of MMP-9 and TIMP-1 and raise scores of SAQ in patients with unstable angina on the basis of standard treatment，so as to improve the quality of life.

Unstable angina；Plumula nelumbinis；Matrix Metalloproteinase-9；Tissue inhibitor of Metalloproteinase-1；Life quality

R541.4

A

1004-745X（2015）11-1923-04

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.11.013

2015-08-08）

·研究報告·

江蘇省自然科學基金面上項目（BK2008117）

（電子郵箱：z7h6j@163.com）