腸桿菌科細菌ESBLs和AmpC酶檢測及耐藥性分析

武曉敏

(濮陽市人民醫院 檢驗科 河南 濮陽 457000)

隨著臨床用藥技術水平的不斷進步發展，以及人們對健康重視程度的不斷提高，臨床治療中，為了滿足患者的健康需求，抗菌藥物的使用越來越多，這也導致細菌耐藥性不斷增加，其中最具代表的是腸桿菌科細菌ESBLs 和AmpC 酶菌耐藥性情況明顯增加，增加臨床控制以及治療難度［1－2］。本次研究重點對腸桿菌進行檢測并分析耐藥性，指導臨床用藥。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 統計濮陽市人民醫院2012年4月至2014年6月收治的40 例患者標本培養的120 株腸桿菌，菌種類型:克雷伯菌32 株，耶爾森菌7 株，沙雷菌12 株，變形菌6 株，大腸埃希菌58 株，其他5 株。所有菌種均經微生物鑒定儀器以及相應配套身鑒定卡確認。

1.2 檢測方法 所抽取菌株的ESBLs 菌表型由雙紙片確診試驗檢測，AmpC 酶菌則由雙紙片氯唑西林增效試驗檢測，統計檢出率，并實施藥敏試驗，對比分析產酶菌以及非產酶菌的試驗結果。

ESBLs 菌檢測方法:雙紙片確診試驗檢測，首先根據紙片擴散法表型篩選，之后經確證試驗進行檢測，篩選時若發現頭孢他啶抑菌環直徑小于22 mm，頭孢噻肟抑菌環直徑小于27 mm，則表明菌株中有可能產ESBLs。確證試驗即在上述藥物基礎上增加克拉維酸，與未放入克拉維酸的抑菌環進行對比，若增加值大于5 mm，則表明產ESBLs。

AmpC 酶菌檢測:由雙紙片氯唑西林增效試驗檢測抽取菌株，先根據紙片擴散法表型篩選，并采用改良后的Hodge 試驗確證。初次進行篩選時，統計頭孢西丁抑菌環直徑小于18 mm，則表明菌株中有可能產AmpC 酶菌，再次經確證試驗后，頭孢西丁抑菌環變化值大于2 mm，則可明確產AmpC 酶菌。

氯唑西林增效試驗檢測AmpC 酶，采用滅菌蒸餾水分別將氯唑西林制成4、6、8、12 μg/μl 的溶液，采用微量加樣器，從中取出20 μl 的氯唑西林溶液，分別將其加在標準ATM、CRO、CTX、CAZ 藥敏紙片中心，分別制成240、200、160、120、80 μg 氯唑西林的復合紙片中，放于超凈臺中晾干后，－20°C 冰箱中留作保存。盡量將標準藥敏紙片放在接種好的同一M2H 平皿上，盡量保證復合紙與相應標準藥敏紙片對同一受試菌株抑菌環等具有可比性。若含有氯唑西林復合紙片的抑菌環直徑大于相應的標準紙片抑菌環直徑5 mm，判定為陽性，相反則判定為陰性。

1.3 統計學處理 采用SPSS 13.0 統計學軟件進行數據處理分析，定量資料以(±s)表示，組間比較采用t 檢驗，定性資料的組間比較采用χ2檢驗，P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 AmpC 酶與ESBLs 酶的檢出率 120 株腸桿菌中，ESBLs 菌60 株，檢出率為50.0%，AmpC 酶菌54株，檢出率為45.0%。單產ESBLs 菌38 株，所占比例為31.7%，單產AmpC 酶菌32 株，所占比例為26.7%;產ESBLs 菌與AmpC 酶菌23 株，所占比例為19.2%;不產ESBLs 菌與AmpC 酶菌28 株，所占比例為23.3%。見表1。

表1 120 株腸桿菌科細菌AmpC 酶與ESBLs酶的檢出率(%)

2.2 藥敏試驗結果 單產ESBLs 菌、單產AmpC 酶菌，產ESBLs +AmpC 酶菌對阿米卡星、氨曲南、頭孢噻肟、氨芐西林耐藥率與非產酶菌的耐藥性相比，差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表2。

2.3 分析受檢菌的多重耐藥性 120 株受檢菌的4重耐藥率為57.1%，8 重耐藥率為47.5%，單產AmpC酶菌多重耐藥率與非產酶菌率對比，差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表3。

表2 不同菌株藥敏試驗結果［n(%)］

表3 單產AmpC 酶菌多重耐藥率與非產酶菌率對比

3 討論

當前臨床關于細菌耐藥性的研究中，重點內容之一為β－內酰胺酶所產生的耐藥性。β－內酰胺酶類為臨床常用的抗菌藥物，對其有最大威脅性的是C 類頭孢菌素酶超廣譜β－內酰胺酶(可簡稱為ESBLs)、AmpC β－內酰胺酶(可簡稱為AmpC 酶)［3］。AmpC酶主要是由不動桿菌、腸桿菌、銅綠假單胞菌等革蘭陰性桿菌所產生的一類β－內酰胺酶，是對β－內酰胺酶抗生素產生耐藥性的主要原因［4］。ESBLs 為β－內旋氨酶，可對單環內酰胺類抗生素、頭孢霉素類抗生素等進行水解，且經由不同菌株進行轉移以及傳播。本次研究中，120 株受檢菌ESBLs 菌檢出率為50.0%，AmpC 酶菌檢出率為45.0%。同時產ESBLs 菌與AmpC 酶菌所占比例為19.2%。腸桿菌屬細菌AmpC酶檢出率最高，為54.1%，之后依次為克雷伯菌屬、大腸埃希菌屬，分別為43.1%、41.0%。由藥敏結果可見，受檢菌對從一代到三代的頭孢菌素存在不同程度的耐藥，其中產AmpC 酶與ESBLs 菌的耐藥率明顯高于非產酶菌，分析AmpC 酶與ESBLs 菌產生的原因是導致受檢菌出現耐藥性的主要原因。臨床研究表明，一些長期住院、惡性腫瘤以及病情嚴重患者常會存在生產酶的酶株，這些酶株常在有免疫缺陷或常使用免疫抑制劑患者中被檢出［5］。本次研究表明，單產ESBLs 菌、單產AmpC 酶菌，產ESBLs +AmpC 酶菌對阿米卡星、氨曲南、頭孢噻肟、氨芐西林耐藥率明顯高于非產酶菌的耐藥性(P ＜0.05)。單產AmpC 酶與ESBLs 的4 重耐藥性率與8 重耐藥率明顯高于非產酶菌(P ＜0.05)。分析細菌產生多重耐藥性原因可能是因為生成AmpC 酶。因此臨床建議采用碳青霉烯類抗菌藥物，同時產AmpC 酶與ESBLs 細菌而導致的感染，也可根據藥敏結果選擇采用阿米卡星、頭孢噻肟/氨曲南等抗菌藥物對患者進行治療。

綜上所述，臨床在應用抗生素防治感染時，應注意規范用藥，以降低耐藥性，提高臨床治療效果。

［1］盧文波，何立忠，汪一萍.腸桿菌科細菌ESBLs 和AmpC 酶檢測及耐藥性分析［J］.中國衛生檢驗雜志，2010，11(2):361－361.

［2］邵海楓，王錦娜，嚴亞惠，等.增加頭孢吡肟、頭孢吡肟－克拉維酸的雙紙片試驗在腸桿菌科細菌中檢測ESBLs 的探討［J］.中國感染與化療雜志，2006，6(6):402－406.

［3］周華，李光輝，陳佰義，等.中國產超廣譜β－內酰胺酶腸桿菌科細菌感染應對策略專家共識［J］.中華醫學雜志，2014，22(24):1847－1848.

［4］吳多榮，卓超，黃會，等.海南地區多重耐藥腸桿菌科細菌產NDM－1 酶現狀調查［J］.臨床檢驗雜志，2014，32(7):553－554.

［5］黃麗，高曉坤，張宏.腸桿菌科細菌質粒介導喹諾酮類耐藥基因的檢測［J］.中國感染與化療雜志，2014，14(4):286－290.