乙型肝炎病毒DNA與血清標志物的檢測結(jié)果分析

武曉敏

(濮陽市人民醫(yī)院 檢驗科 河南 濮陽 457000)

慢性乙型病毒性肝炎臨床表現(xiàn)為乏力、惡心、腹脹、肝區(qū)疼痛、畏食等癥狀。病情呈進展性，若未取得及時準確治療，極易誘發(fā)全身各個系統(tǒng)疾病，如肝源性糖尿病、脂肪肝、肝硬化等。乙肝屬于傳染性強的慢性疾病，HBV DNA 陽性是HBV 感染、復(fù)制和傳染最為直接有力的參考依據(jù)［1］。目前常用ELISA 檢測HBV 血清中HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBc 等。近年來，醫(yī)院在臨床診斷時不再局限于一種方法，常聯(lián)合FQ－PCR檢測HBV DNA，靈敏度高，檢出率高。現(xiàn)筆者以340份乙肝病毒血清作為研究對象，分析其關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究材料 340 份乙肝病毒血清來源于2012年4月至2014年7月于濮陽市人民醫(yī)院就診的乙肝患者，均符合病毒性肝炎相關(guān)診斷標準;其中男性217例，女性123例;年齡20～60 歲，平均年齡(45.6±3.7)歲，病程2～11 a，平均病程(7.8±3.1)a。其中300例為慢性乙型肝炎患者，40例為乙型肝炎肝硬化患者;所有患者接受FQ－PCR 檢測及ELISA 檢測前均未服用任何抗病毒藥物治療。

1.2 納入標準 未合并嚴重肝臟疾病，無肝臟惡性腫瘤;精神正常，依從性良好，無人格障礙;無腎功能異常、心、腦等器質(zhì)性疾病;排除妊娠期、哺乳期患者。均并簽署了研究知情同意書。

1.3 研究方法 采用實時熒光定量－聚合酶鏈反應(yīng)(FQ－ PCR)檢測HBV DNA，酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測HBV 血清標志物(HBVM)，并根據(jù)HBVM 測定分為A、B、C、D 5 組，A 組44例，HBsAg、HBeAg 均(+);B 組75例，HBsAg、HBeAg、HBcAb 均(+);C 組68例，HBsAg、HBcAb 均(+);D 組115例，HBsAg、HBeAb、HBcAb 均(+);E 組38例，全陰或HBsAb 單項(+)。ELISA 檢測試劑盒以及配套試劑由上海科華生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，酶標儀為博賽1210 酶標儀，F(xiàn)Q－ PCR定量檢測儀器為美國ABI7000，由深圳匹基生物工程股份有限公司提供試劑。HBV DNA 和HNVM 檢測均按照儀器和試劑盒操作說明書進行檢測。HBV DNA 通過電腦計算出初始拷貝數(shù)定量結(jié)果判定，陽性:≥1 ×103拷貝/ml;陰性:＜1 ×103拷貝/ml［2］。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，定性資料的組間比較采用χ2檢驗，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBVM 間HBV DNA 陽性率對比 A、B、C組檢測HBV DNA 陽性率分別為97.7%、88.0%、51.5%顯著高于D 組的39.1%(P ＜0.05)，A、B 組檢測陽性率分別為97.7%、88.0%高于C 組的51.5%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)，A 組陽性率為97.7%稍高于B 組的88.0%，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P ＞0.05)，E 組未檢測到HBV DNA 陽性。見表1。

表1 不同HBVM 間HBV DNA 陽性率對比(n，%)

2.2 HBV DNA 陽性和陰性血清中HBsAg 檢出率189 份HBV DNA 陽性中，HBsAg 陽性率100.0%(189/189);151 份HBV DNA 陰性標本中HBsAg 陽性率87.4%(132/151)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。

2.3 HBV DNA 與HBVM 相關(guān)性研究 HBV DNA與HBsAg 相關(guān)系數(shù)r =0.221，P ＞0.05，無明顯相關(guān)性;HBV DNA 與HBeAg 相關(guān)系數(shù)為r = 0.59，P ＜0.05，HBV DNA 與HBeAg 呈正相關(guān);與抗HBs、抗HBC、抗HBe 無相關(guān)性。

3 討論

對乙肝患者HBV 血清標志物(HBVM)實施ELISA 檢測，該檢測方式可將人體對HBV 的免疫反應(yīng)狀態(tài)進行體現(xiàn)，并能夠提供HBV 存在的間接證據(jù)［3］。另外HBV DNA 陽性是HBV 感染、復(fù)制及傳染性最為直接和可靠的證據(jù)，通過對血清HBV DNA 實施FQ－PCR 檢測，可反映出HBV 感染后活動復(fù)制的情況。

此次研究中對收集的340例乙肝病毒患者的血清標本分別進行ELISA 檢測與FQ－PCR 檢測兩種方式的測定，結(jié)果顯示A 組對HBV DNA 檢出陽性率明顯高于其他4 組(P ＜0.05)，而且在189 份HBV DNA 陽性中標本中HBsAg 的陽性率是100.0%，而其余為HBsAb 樣本或為半全陰標本中，HHBV DNA 均為陰性，由此可見，在HBVM 檢測中，HBsAg 是HBV 感染靈敏的血清標志物，若HBsAg 為陰性，基本可以判斷HBV 未感染。當HBV 感染后，HBsAg 標本中HBc 陽性率較高，則說明抗HBc 是HBV 感染敏感物，但無法區(qū)分是目前感染或是既往感染。

HBV DNA 是HBV 感染的分子生物學(xué)標記，可反映出機體病毒復(fù)制，是HBV 活動性感染特異性標志。而此次研究中，C 組和D 組HBV DNA 陽性率檢出率較低，或許是與HBV 低水平復(fù)制相關(guān)，同時也說明HBV DNA 無法反映病程進展和感染情況。在此次研究中，HBV DNA 與HBsAg、HBeAg 相關(guān)性明顯，與抗HBs、抗HBC、抗HBe 無相關(guān)性。血清標志物能夠反映病毒表達水平，也可以間接反映病毒復(fù)制情況，在判斷乙肝病因、病情進展及預(yù)后上起到無法替代的作用。但血清標志物無法判斷機體是否現(xiàn)在存在傳染性病毒顆粒，而對HBV DNA 的檢測即可反應(yīng)出病毒傳染性的強弱［4］。總的來說，HBV DNA 可以反映HBV 復(fù)制狀況和傳染性，但不同患者、不同發(fā)病時間及不同類型表現(xiàn)也不相同;血清學(xué)指標在判斷和分析乙肝病因、進展及預(yù)后方面起到的顯著作用明顯優(yōu)于HBV DNA［5］。然而無法確定是否存在傳染性病毒顆粒，而HBV DNA在此方面的作用則是血清學(xué)指標無法比擬的。因此，HBVM 檢測是臨床診斷HBV 不可或缺的檢測方法，HBV DNA 有完整病毒顆粒復(fù)制，具有傳染性，通過聯(lián)合HBV DNA 和HBVM 檢測，可明顯提高其檢出率。

在HBV DNA 及HBVM 檢測中臨床采用FQ－PCR 定量技術(shù)檢測，即融合熒光技術(shù)、探針雜交技術(shù)，通過閉管檢測方法和檢測熒光信號［6］，對HBV DNA定量檢測，可避免常規(guī)PCR 法產(chǎn)生的交叉污染及無法定量的缺點。通常以FQ－PCR 定量技術(shù)檢測作為補充血清學(xué)檢測的方法，可早期診斷乙型肝炎，并有效判斷疾病傳染性。

綜上所述，HBsAg 對HBV 感染的靈敏度較高;采用FQ－PCR 定量方式進行HBV DNA 檢測可作為血清學(xué)方法的補充，對乙肝診斷有重要價值;可判斷和分析乙肝病因、進展及預(yù)后，檢測患者機體內(nèi)是否存在傳染性病毒顆粒，臨床應(yīng)用價值高。

［1］ 郭輝，閔娟，葉健忠.乙型肝炎病毒DNA 與血清免疫標志物的關(guān)系分析［J］.華中醫(yī)學(xué)雜志，2007，31(3):207－209.

［2］ 王智華，張樂之，吳淑梅，等.HBV DNA 與HBV 血清學(xué)指標及pre－S1 抗原相關(guān)性［J］.臨床檢驗雜志，2005，23(5):386.

［3］ 唐芳玫.乙型肝炎病毒DNA 與血清標志物的關(guān)系［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2010，7(1):28－29.

［4］ 梅小平，李健，曾躍，等.乙型肝炎病毒HBV DNA 與臨床分析［J］.中華肝病雜志，2004，22(5):313.

［5］ 何萍，胡如華，楊莉瓊，等.乙型肝炎網(wǎng)對模式與乙型肝炎核酸檢測結(jié)的相關(guān)性分析［J］.中國醫(yī)療前沿，2008，3(12):45.

［6］ 羅德生.熒光定量PCR 技術(shù)及其臨床應(yīng)用［J］.中國誤診學(xué)雜志，2004，4(3):365.