EGFR、Kras、BRAF在食管鱗癌組織中的表達及相關性

賀春語 胡曉娜 王雯 劉如 劉勁松 吳小源 王建華

(1.鄭州大學附屬腫瘤醫院 放療中心 河南 鄭州 450008;2.河南省中醫學院三附院 醫學影像科 河南 鄭州 450008)

表皮生長因子受體(epithelial growth factor receptor，EGFR)在眾多實體瘤中過高表達，與腫瘤的發生、發展密切相關［1］。EGFR 的過度激活通過下游多條信號傳導通路，可促進腫瘤細胞的轉化、分裂、增殖，其中最重要的是Ras/Raf/MEK/ERK/MARP 信號通路［2］。鼠類肉瘤濾過性毒菌致癌同源體B1(v－ Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1，BRAF)是一種癌基因，位于MARP 通道入口處，受上游Ras 蛋白激酶的調控［3］。一般情況下，當原癌基因轉變為癌基主要通過高表達或表達功能異常的蛋白參與細胞的惡性轉化。本文采用免疫組化SP 法對食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)組織中EGFR、Kras、BRAF 蛋白進行檢測，探討其臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 收集河南省腫瘤醫院2007年1月至2009年8月臨床資料完整的ESCC 病例116例及其石蠟包埋組織(手術標本100例、胃鏡活檢病理組織16例)，其中男74例，女42例;年齡32～76 歲，中位年齡58 歲;高、中、低分化分別為28、50、38例。采用2009年AJCC 食管癌TNM 分期標準分期，T1、T2、T3、T4期分別為26、30、46、14例，N0、N1、N2、N3期分別為52、34、21、9例，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分別為12、42、48、14例。選20例癌旁正常組織做對照。所有患者未接受過胸部放療、化療及其他抗腫瘤治療。

1.2 方法 116例石蠟包埋的存檔組織塊，每例重新制備厚4 μm 連續切片，貼在涂有防脫膠的載玻片上脫蠟，然后用SP 法進行EGFR、Kras 及BRAF 免疫組化標記，免疫組化標記嚴格按照SP 試劑盒說明書的步驟進行。

1.3 結果判定 EGFR、Kras 及BRAF 均以細胞漿/胞膜內出現棕黃色細顆粒為陽性細胞。免疫組織化學染色以細胞質內出現特異性染色深淺來進行評分:0 分為無色，1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3 分為棕褐色;再依據染色細胞所占百分比評分:陽性細胞數＜10%為0 分，10%～25%為1 分，26%～50%為2 分，51%～75%為3 分，76%～100%為4 分。兩項乘積即為該例免疫組織化學得分:(－)0 分;(+)1～2 分;(+ +)3～4 分;(+ + +)5～6 分。其中，(+ )和(+ +)定為弱陽性，(+ + + )定為強陽性。

1.4 統計學方法 應用SPSS 17.0 統計軟件包進行統計分析，不同臨床病理特征間同一指標比較采用t檢驗或χ2檢驗，各指標相關性采用Spearman 等級相關分析;檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 EGFR、Kras、BRAF 在ESCC 中表達 116例患者的ESCC 組織和20例癌旁正常組織中均檢測出3 種蛋白的陽性表達，EGFR、Kras、BRAF 陽性表達率在ESCC 中表達分別為70.7%、31.0%和49.1%，均高于癌旁正常組織，其中EGFR、BRAF 在兩者中表達差異有統計學意義(P ＜0.05)，而Kras 表達差異無統計學意義(P ＞0.05)，見表1。

2.2 EGFR、Kras、BRAF 的表達與ESCC 臨床病理特征的關系 EGFR、Kras、BRAF 在ESCC 中的表達與性別、年齡無關(P ＞0.05)，EGFR 表達與分化、淋巴結轉移、TNM 分期有關(P ＜0.05)，而與浸潤深度無關(P ＞0.05)。BRAF 表達與浸潤深度及分期有關(P ＜0.05)，與分化程度及淋巴結轉移無關(P ＞0.05)。而Kras 在ESCC 中表達與分化、浸潤深度、淋巴結轉移及分期無關(P ＞0.05)。見表2。

表1 EGFR、Kras、BRAF 在ESCC 及其癌旁正常組織中的表達

表2 EGFR、Kras、BRAF 在ESCC 中的表達及與臨床病理特征的關系

2.3 ESCC 組織中EGFR 與Kras、BRAF 蛋白表達的相關性分析 EGFR 與Kras 在ESCC 中均陽性表達25例，無明顯相關性。而EGFR 與BRAF 表達呈正相關，相關系數r=0.542，P ＜0.05，見表3。

表3 EGFR 與Kras、BRAF 表達的相關性

3 討論

我國是食管癌高發國家，其年發病患者數占世界總發病患者數的60%，雖然隨著新型化療藥物的出現和治療手段的改進，療效已有明顯提高，但5年生存率仍不足20%［4］。分子靶向藥物為腫瘤治療提供了新途徑，以EGFR 為靶點的研究最為廣泛。EGFR 屬I 型跨膜酪氨酸激酶生長因子受體，在正常的生理狀態下，EGFR 是細胞生長調節因子，介導細胞生長、增殖、分化等生命現象。EGFR 過表達后，與相應配體結合可激活細胞核內轉導因子，加速細胞的惡性轉化。研究顯示30%～90%的食管癌患者存在EGFR 過表達，正常食管上皮基底細胞和間質細胞僅見低表達。常佳等［5］報道87例食管鱗癌中EGFR 陽性表達率明顯高于癌旁組織，與組織學分級、浸潤深度、淋巴結轉移和TNM 分期有關。本研究顯示116例食管癌組織中EGFR 的表達率為70.7%(82/116)，癌旁正常組織表達率為35% (7/20)，兩者差異有統計學意義(P ＜0.05)，表明EGFR 的高表達與食管癌發生密切相關。隨著食管癌分化程度、淋巴結轉移及TNM 分期的增加，EGFR 蛋白表達的陽性率也隨之增加，提示EGFR有促進食管癌生長與轉移的作用。

Kras 基因編碼21kDa 鳥苷酸結合蛋白，有3 種密切相關的Ras 蛋白，即Kras、Hras、Nras 構成小分子GTP 酶的Ras 超家族成員，它們可作為分子開關，傳遞細胞外信號，從而引發一系列基本的細胞過程，包括增殖、存活和分化。當前Ras 蛋白的生化模型提示，Ras以GDP 結合的非活化形式存在，當與GTP 結合則被啟動，Kras 的啟動將進一步激活Ras－Raf－MEK－ERK這條信號通路，導致細胞的異常增生，促使腫瘤形成。Kras 的突變已被證實與多種腫瘤密切相關［6］。本研究發現kras 的陽性表達率在食管癌組織中雖高于癌旁組織，但差異無統計學意義(P ＞0.05)。Kras 表達與臨床分期、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移無關(P 均＞0.05)，其在食管癌發生發展中的作用有待進一步研究。

BRAF 是Ras－Raf－MEK－ERK 信號轉導通路重要的轉導因子，它主要通過絲裂原活化蛋白激酶通路中的絲/蘇氨酸蛋白激酶發揮作用，此酶將細胞表面受體和Ras 蛋白通過MEK 和ERK 與核內的轉錄因子相連接，啟動多種因子參與調控細胞內多種生物學事件，如細胞生長、分化以及凋亡等。生長調節因子介導細胞生長、增殖、分化等生命現象［7］。EGFR 與相應配體結合后，可激活細胞核內轉導因子，促進細胞增殖，加速細胞的惡性轉化。本研究食管癌組織中BRAF 的表達遠高于癌旁正常組織(P ＜0.05)，隨食管浸潤深度程度和TNM 分期的增加而升高，提示BRAF 過表達可能促進食管癌的發生發展。

EGFR 靶向藥物在食管癌治療中取得重要進展，但報道并不一致［8－9］。本研究發現，食管鱗癌組織中EGFR 與BRAF 蛋白表達呈正相關，與Kras表達無關，提示我們需進一步深入研究，闡明EGFR靶向藥物作用機制，聯合檢測EGFR 及BRAF 蛋白有助于食管癌的早期診斷，可對有效治療方案的選擇提供新的依據。

［1］ 馮靜，張燕，王瑜玲，等.EGFR 與黏附分子家族間交叉信號通路在腫瘤發生中作用的研究進展［J］.山東醫藥，2014，(22):93－95.

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