體外右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響*

曾漣 陽麗云

體外右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響*

曾漣①陽麗云①

目的：探討體外右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響。方法：將MGC-803胃癌細胞隨機分為六組，右美托咪定組（A1、A2、A3、A4、A5組）和對照組（C組），右美托咪定組各組的右美托咪定終濃度分別為1000、100、10、1、0.1 ng/mL，通過MTT實驗檢測各組OD值，并計算增殖率。結果：右美托咪定組各組OD值及增殖率與C組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。結論：體外右美托咪定對MGC-803胃癌細胞的增殖無明顯影響。

右美托咪定； MGC-803胃癌細胞株； 增殖

胃癌是我國常見惡性腫瘤之一，胃癌基本居惡性腫瘤發病率及死亡率的前3位［1］。胃癌患者的預后除了與胃癌分型、胃癌分期等疾病本身的因素相關外，與手術、化療、放療等處理因素及患者自身的心理因素也密切相關。手術是胃癌患者的主要治療方式，手術中各個環節都可能對患者的預后產生重要影響。麻醉作為手術中的重要環節，麻醉目前的任務已不僅僅是配合外科醫生完成手術過程，保證患者術中生命體征平穩，麻醉對患者預后的影響已逐步成為目前麻醉學關注的方向及研究的熱點。目前已有阿片類藥物通過影響細胞免疫及體液免疫對腫瘤患者的預后產生影響的相關文獻報道，也有關于吸入麻醉藥物對細胞免疫應答影響的相關研究。右美托咪定是一種高選擇性α2受體激動劑，對α2腎上腺素受體的選擇性是α1受體的1620倍，1985年研制成功，1999年美國食品及藥物管理局（US Food and Drug Administration，FDA）批準將其應用于重癥監護病房短于24 h的鎮靜，2009年才批準在全身麻醉的手術患者應用于氣管插管和機械通氣時的鎮靜等方面，作為一種新型藥物，其臨床應用時間很短，到目前為止右美托咪定應用于全麻患者也只有6年，目前對右美托咪定的研究多側重于其臨床作用效果，而對于其對腫瘤生長影響及腫瘤患者愈后的國內外研究都非常少。因此本課題擬從細胞水平初步研究右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響，探討胃癌患者應用右美托咪定的安全性，為進一步的臨床研究及應用奠定基礎，現具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗細胞：MGC-803胃癌細胞株購自中國科學院細胞庫。主要試劑和儀器：含酚紅高糖DMEM培養基（Hyclone，美國），胎牛血清（四季青，中國），右美托咪定（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，中國），MTT粉末（Sigma，美國），二甲基亞砜（Sigma，美國），倒置相差顯微鏡（Olympus，日本），酶標儀（Thermo，美國）。

1.2 方法

1.2.1 細胞培養 將MGC-803胃癌細胞用完全培養基（加入10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL鏈霉素的含酚紅高糖DMEM培養基）培養，置于溫度為37 ℃、5% CO2細胞培養箱中，隔天換液1次，注意觀察細胞生長情況，并注意觀察細胞有無感染（感染的細胞不適合進一步實驗），當細胞達80%～90%融合時傳代，用0.25%胰蛋白酶消化，并置于倒置相差顯微鏡下觀察，當細胞形態變圓、細胞之間連接松解時，立即加入完全培養基終止消化，然后用吸管輕輕吹打培養瓶瓶底，使細胞從培養瓶瓶底脫落，收集細胞至離心管中，以1500 r/min的速度離心3 min使細胞沉淀于離心管底部，棄掉上清液，將細胞用新鮮的完全培養基重懸，以1∶2的比例傳代。

1.2.2 細胞增殖的檢測 采用噻唑藍（MTT）法。MTT全稱為3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，其商品名為噻唑藍。檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490 nm波長處測定其光吸收值，在一定細胞數范圍內，吸光度值與細胞數成正比。將對數生長期的MGC-803胃癌細胞消化離心后棄掉舊的培養基，加入新鮮完全培養基，用吸管吹打將其吹散制成細胞懸液，用細胞計數板在倒置相差顯微鏡下計數細胞個數，調整為3×104/mL的密度接種于96孔板，每孔200 μL（邊緣孔用無菌磷酸緩沖鹽溶液填充，每孔200 μL，以避免96孔板周圍孔的揮發效應）。設置C組（對照組）、右美托咪定組（A1、A2、A3、A4、A5組）和調零組（為只加培養基不加細胞組，在分析實驗結果時用實驗組的OD值減去調零組的OD值，以去除培養基等對OD值的影響）。置于37 ℃、5%CO2細胞培養箱中繼續培養24 h后，用無菌1 mL注射器小心吸除舊的培養基。C組在完全培養基中加入生理鹽水，A1、A2、A3、A4、A5組在完全培養基中加入等體積的用生理鹽水稀釋好的右美托咪定溶液，使右美托咪定終濃度分別為1000、100、10、1、0.1 ng/mL，調零組為無細胞組只加完全培養基，每組設6個復孔，放入細胞培養箱中繼續培養。對于72 h時間點組，在48 h時按上述步驟更換培養基，以滿足細胞對各營養成分的需求。分別于右美托咪定作用MGC-803胃癌細胞24、48、72 h 3個時間點，各孔加入MTT（5 mg/mL）溶液20 μL（盡量避光操作），繼續將細胞置于37 ℃、5% CO2細胞培養箱中繼續培養4 h（以使活細胞有充足的時間將MTT還原為甲瓚）。4 h后，用1 mL注射器小心吸除舊的培養液，注意輕柔操作，避免吸到培養孔底部的結晶物，然后加入200 μL二甲基亞砜，隨后將細胞培養板放置于搖床上振蕩10 min，使結晶物充分溶解，采用酶標儀在492 nm波長下測定各組吸光度值（optical density，OD值）。實驗按上述步驟重復3次。細胞增殖率（%）=右美托咪定組OD/對照組OD×100%。

1.3 統計學處理 所得數據采用SPSS 16.0統計學軟件進行處理，計量資料采用（±s）表示，比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用SNK法，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

右美托咪定作用于MGC-803胃癌細胞24、48、72 h，右美托咪定各組OD值及增殖率與對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響（±s）

表1 右美托咪定對MGC-803胃癌細胞增殖的影響（±s）

48 h組別24 h 72 h OD值增殖率（%）OD值增殖率（%）OD值增殖率（%）C組1.163±0.065100.00±5.581.494±0.156 100.00±10.441.694±0.342100.00±20.19 A1組1.115±0.111 95.87±9.541.515±0.105101.41±7.031.988±0.213117.36±12.57 A2組1.148±0.084 98.71±7.221.397±0.217 93.51±14.521.709±0.318100.89±18.77 A3組1.212±0.058104.21±4.991.482±0.145 99.20±9.711.927±0.356113.75±21.02 A4組1.101±0.104 94.67±8.941.591±0.137106.49±9.171.650±0.261 97.40±15.41 A5組1.210±0.077104.04±6.621.407±0.111 94.18±7.431.630±0.230 96.22±13.58

3 討論

右美托咪定是一種高選擇性α2受體激動劑，臨床應用時間較短，直到2009年才批準用于行全身麻醉的手術患者氣管插管和機械通氣時的鎮靜等方面［2］。由于其具有產生類似自然睡眠、易喚醒、呼吸抑制作用弱、提高血流動力學穩定性、減少手術應激反應、減少阿片類和麻醉藥物用量等優勢，目前常用于減少術后躁動，術前患者、重癥患者及其他患者有創操作時的鎮靜，局部麻醉輔助用藥，清醒插管及術后鎮痛等方面［3-13］。并且近期有研究表明其有神經保護、心臟保護、減少寒戰及降低譫妄發生率的作用［14］。右美托咪定的藥理特點顯示其分布半衰期約為6 min，清除半衰期約2 h，主要在肝臟進行生物轉化由腎臟排出體外。臨床觀察及研究表明右美托咪定的藥代動力學特征在不同的年齡及性別組并未表現出明顯的差異。但是隨著右美托咪定輸注時間的延長，右美托咪定的持續輸注半衰期顯著延長。由此可見隨著用藥時間延長，右美托咪定有可能對機體產生較長時間的影響。由于右美托咪定臨床應用的諸多優勢，臨床上應用右美托咪定越來越廣泛。而隨著人口老齡化，人們對自身健康關注度、重視度的提高及醫療水平的提高，早期發現及早期手術的患者也逐步增多，因此右美托咪定應用于癌癥患者的機會也必然日益增多。

由于右美托咪定臨床應用時間較短，其應用于癌癥患者的安全性的研究目前較少。Bruzzone等［15］通過在小鼠皮下移植鼠MC4-L5乳腺癌細胞，以建立小鼠乳腺癌模型，并分別予以輸注右美托咪0.05 mg/（kg·d），可樂定0.1 mg/（kg·d）和等量的生理鹽水，與輸注生理鹽水組對比，發現右美托咪定和可樂定具有促進鼠乳腺癌細胞株MC4-L5增殖的作用。有研究發現右美托咪定通過改變膠原結構促進乳腺癌進展［16］。徐興國等［17］研究發現全麻期間持續靜脈輸注右美托咪定可有效抑制胃癌根治術患者圍術期的應激反應，減少細胞免疫功能的抑制，有利于胃癌根治術患者的術后康復。該研究認為右美托咪定通過影響機體免疫功能間接影響胃癌患者的術后康復，本研究通過右美托咪定直接作用于胃癌細胞從細胞水平研究右美托咪定對胃癌細胞增殖的影響，以探討右美托咪定是否會對胃癌細胞生長產生直接的影響。本研究設置1000、100、10、1、0.1 ng/mL 5個不同濃度右美托咪定組作用于MGC-803胃癌細胞，研究右美托咪定與MGC-803胃癌細胞的量效關系，研究結果顯示右美托咪定不同濃度組OD值及增殖率與對照組比較差異均無統計學意義（P＞0.05）。由此本研究認為不同濃度右美托咪定對MGC-803胃癌細胞的增殖無明顯影響。本研究同時還設置了24、48、72 h 3個不同時間點，觀察右美托咪定作用不同時間對MGC-803胃癌細胞的增殖是否產生影響，用以研究右美托咪定與MGC-803胃癌細胞的時效關系，研究結果顯示右美托咪定組各時間OD值及增殖率與對照組比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。因此，本實驗研究結果顯示，右美托咪定在體外對MGC-803胃癌細胞的增殖未表現出明顯影響。Bruzzone等［15-16］的研究結果顯示右美托咪定可促進乳腺癌細胞增長，本實驗研究結果與其實驗結果比較提示，右美托咪定對于不同類型的腫瘤細胞可能會產生不一樣的影響，對不同細胞不同組織類型的腫瘤患者的預后可能會產生不一樣的影響，其對腫瘤細胞產生影響的機制目前還不是很明確，有可能通過作用不同的受體引發不同的分子機制產生不同的影響。而對于體內作用，右美托咪定的作用可能更加復雜，有可能通過對免疫系統及細胞基質等影響間接對胃癌患者的預后產生影響。因此右美托咪定在不同類型腫瘤細胞及其在體內對腫瘤細胞產生的影響，是下一步研究的方向。

綜上所述，本研究結果顯示在體外右美托咪定對MGC-803胃癌細胞的增殖無明顯影響，表明右美托咪定可能不通過直接作用于MGC-803胃癌細胞對其生長產生影響，但是其作用于人體體內是否通過其他途徑影響腫瘤的生長目前還不清楚，因此右美托咪定應用于胃癌患者的安全性還有待于進一步的臨床觀察和深入研究。

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Effects of Dexmedetomidine on the Proliferation of MGC-803 Gastric Cancer Cell Lines in Vitro

ZENG Lian，YANG Li-yun.//Medical Innovation of China，2015，12（36）：001-004

Objective：To investigate the effects of Dexmedetomidine on the proliferation of MGC-803 gastric cancer cell lines in vitro.Method：The gastric cancer cells were randomly divided into six groups，the Dexmedetomidine groups（group A1，A2，A3，A4，A5） and the control group（group C）.The final concentration of Dexmedetomidine in the five Dexmedetomidine groups were 1000，100，10，1，0.1 ng/mL respectively.MTT method was used to test the optical density value and the proliferation rate was calculated.Result：There was no statistically significant difference between the Dexmedetomidine groups and the control group in the optical density value and the proliferation rate（P＞0.05）. Conclusion：Dexmedetomidine has no significant effect on the proliferation of MGC-803 gastric cancer cell lines in vitro.

Dexmedetomidine； MGC-803 gastric cancer cell lines； Proliferation

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.36.001

2015-09-21） （本文編輯：王利）

廣西壯族自治區衛生廳自籌經費科研課題（Z2013008）

①廣西醫科大學第一附屬醫院 廣西 南寧 530021

曾漣

First-author’s address：The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530021，China