融水小型豬F1代的血常規、血生化與電解質指標

劉 科，施赫赫，，陳 淦，鄺少松，劉盛來，劉運忠，鐘志勇，郭金彪，耿慶山，唐小江

(1．廣東省醫學實驗動物中心，佛山 528248;2．廣東貝格生物科技有限公司，佛山 510642;3．廣州醫藥工業研究總院，廣州 510240;4．佛山科技學院，佛山 528231;5．廣東省醫學科學院，廣州 510060)

1 材料和方法

1.1 動物來源

F1代普通級融水小型豬85頭，其中4月齡測定85頭，雌性43頭、雄性42頭;12月齡豬測定36頭，雌雄各半。由廣東貝格生物科技有限公司(廣東省醫學實驗動物中心小型豬研究基地)提供，實驗動物及實驗操作經過廣東省醫學實驗動物中心倫理委員會批準。

1.2 動物飼養條件

飼養環境為普通級，濕簾通風系統和局部保溫燈控制舍內溫濕度，夏天溫度控制在28℃ ～30℃，冬天溫度控制在16℃ ～20℃。每天定時定量飼喂全價顆粒料，上下午各一次，自由飲水。

1.3 主要儀器

德國賽多利斯電子分析天平(BS223S)，上海安亭科學儀器廠生產的低速大容量離心機(TDL-5-A)，日本光電公司生產的全自動血球計數儀(CelltacE MEK-7222K)和意大利愛康公司生產的全自動血液生化分析儀(ECHO)，用激光計數法檢驗。

1.4 方法

1.4.1 血樣采集

采血前禁食12 h，3%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，前腔靜脈取血，每只動物采血量為5 mL，用于血液生理生化指標的測定。

1.4.2 血常規、血生化與電解質指標的檢測

使用真空采血管(EDTAK2抗凝劑)取4 mL全血，以全自動血球計數儀測定白細胞數(WBC)、中性粒細胞數(NE)、淋巴細胞數(LY)、單核細胞數(MO)、嗜酸粒細胞數(EO)、嗜堿粒細胞數(BA)、中性粒細胞比例(NE%)、淋巴細胞比例(LY%)、單核細胞比例(MO%)、嗜酸性粒細胞比例(EO%)、嗜堿性粒細胞比例(BA%)、紅細胞數(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細胞比積(HCT)、平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細胞容積分布寬度(RDW)、血小板數(PLT)、血小板壓積(PCT)、平均血小板體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)22項血常規指標。

使用真空采血管(促凝劑)取1 mL非抗凝血，離心分離血清，以全自動生化分析儀檢測丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血清球蛋白(GLOB)、白蛋白/球蛋白(A/G)、總膽紅素(TBIL)、葡萄糖(GLU)、尿素氮(BUN)、肌酐(CR)、膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、磷(P5+)、鈣(Ca2+)、鉀(K+)、鈉(Na+)、氯(Cl－)等 22 項血生化、電解質指標。

1.4.3 統計方法

實驗數據采用SPSS 21.0統計軟件進行處理。所有測定值均以平均數(ˉx)和標準差(SD)表示，采用t檢驗，P ＜0.05作為差異顯著性界值，P＜0.01作為差異極顯著性界值。

2 結果

2.1 血常規

融水小型豬血常規指標測定結果見表1。同月齡雄性與雌性相比，血常規指標僅RDW有顯著性差異(P＜0.05)。同性別12月齡與4月齡比較，雌性和雄性血常規 WBC、LY、MO、LY%、MO%、RDW、PLT指標均顯著降低(P ＜ 0.05)，NE、EO、NE%、EO%、MCV、MCH、MPV、HCT 指標均顯著升高(P ＜0.05);雌性的HGB、RBC指標顯著升高(P ＜0.05)，其他指標差異不顯著(P ＞0.05)。

表1 融水小型豬4月齡、12月齡血常規指標Tab．1 The blood parameters of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth-old and 12thmonth-old

表2 4月齡、12月齡融水小型豬血生化、電解質指標Tab．2 The blood biochemical and electrolyte indices of Rongshui miniature pigs in the 4thmonth and 12thmonth

2.2 血生化與電解質

相同月齡的不同性別之間大部分指標差異較小，且大部分差別均在1個標準差之內(表2)。但是，相同性別的不同月齡之間的差異非常明顯:在ALT、AST、ALP、CK、LDH 等 5 個酶學指標中，除雌性的CK、LDH差異無顯著性外，12月齡雌性和雄性均顯著低于4月齡(P＜0.05);在蛋白質代謝的4項指標，12月齡的總蛋白增加而白球比下降(P ＜ 0.01);在脂質代謝的 CHOL，TG，HDL-C，LDL-C等4個指標中，除雄性CHOL下降一個標準差，其他指標均變化不大。12月齡的TBIL、BUN均下降，而CR上升最為顯著(P ＜0.01)，雌性GLU下降顯著(P＜0.01)。電解質表現為血Ca2+上升，而血K+下降。

3 討論

血常規、血清生化和電解質指標是病理學、生理學等研究中的重要參考依據［2］。本研究對4月齡及12月齡融水小型豬的血常規、血生化和電解質指標的測定，反映了幼年與成年融水小型豬的生理生化狀態。由于影響動物實驗效果的因素包括動物因素、飼養環境和營養因素、動物實驗技術環節因素［3］，本研究在同一環境下、使用相同的飼料，采用同一種進行采血方法，并使用相同的檢測儀器進行分析。

結果表明，相同月齡時，兩性別的血常規指標、血生化和電解質的大部分指標差異不大，但不同月齡之間的部分指標差異明顯。隨著月齡的增加，融水小型豬的血常規指標中，白細胞數、淋巴細胞比例、血小板數下降，血紅蛋白含量升高，而紅細胞數變化不大。吳曙光等［4］對貴州小型豬研究也表明，在不同月齡段多數血液生化指標有顯著差異(P＜0.05)。血生化指標中的5個酶(ALT、AST、ALP、CK、LDH)12月齡均下降;反應蛋白代謝功能的總蛋白上升，而白球比下降，提示細胞免疫增強;反應脂質代謝的4個指標差異很小，提示融水小型豬可能適合用于復制脂質代謝紊亂如高血脂癥疾病模型。肌酐(CR)是反應腎功能的指標，總膽紅素(TBIL)是反應膽汁代謝的指標，融水小型豬不同性別之間的差異很小，但12月齡的BUN和TBIL顯著低于4月齡，這與人的情況非常相似。血清電解質的性別差異很小，12月齡的血鈣升高而血鉀下降，但變化均在1個標準差范圍內。

融水小型豬是否適合作為人類疾病動物模型呢?為便于比較，我們參考國內外文獻［5－10］，制作了表3和表4。表3可見，成年融水小型豬的白細胞數與哥廷根豬類似，比較接近人類，而4月齡融水小型豬的白細胞較高，與中國農大小型豬、西藏小型豬、五指山小型接近;在紅細胞數方面，融水小型豬比另外4種小型豬均小，更接近人類。血紅蛋白和血小板則與其他小型豬、比格犬和大鼠接近，在人類正常值范圍內。

從表4可見，成年融水小型豬的絕大部分生化與電解質指標與人類正常值范圍非常接近。其中22項生化、電解質指標中，有11.5項(AST、ALT、TP、ALB、A/G、BUN、CHOL、TG、雄性的 GLU、K+、Na+、Cl－)在人類正常值范圍，占52.3%;另外7.5項指標(ALP、GLOB、TBIL、CR、HDL-C、LDH-C、雌性的GLU、Ca2+)非常接近人類正常值范圍，占34.1%;兩者合計達86.4%(1922)。另外3項指標(CK、LDH、P5+)也在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內。而哥廷根小型豬雖然大部分指標也在或接近人類正常值范圍，占64.7%(1117)，3項指標(ALT、LDH、P5+)在人類正常值范圍最大值的2.5倍以內，但有三項指標CK、TBIL、CR分別超過人類正常值范圍最大值10倍、20倍、500倍以上，且其標準差特別大，不適合作為涉及心(CK)、肝(TBIL)、腎(CR)等相關指標的疾病模型。中國農大小型豬的大部分指標也在或接近人類正常值范圍，占 66.7%(1218)，5 項指標(ALT、ALP、P5+，K+、雌性的AST、LDH-C)在人類正常值范圍限值2倍以內，但CK超過人類正常值范圍限值5倍以上，且檢測除了雄性AST外，4個心肌酶均不在人類正常值范圍。我們獲得的西藏小型豬和五指山小型豬檢測項目較少，大部分指標也在或接近人類正常值范圍，但反映CK、GLU遠低于人類。

總之，從本文獲得的資料看，融水小型豬的血常規、血生化和電解質指標多數接近人類，數據標準差小，且月齡變化與人類相似，部分指標顯著優于哥廷根等小型豬，提示融水小型豬具備培育成實驗用小型豬的優越條件。

表3 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血常規指標比較Tab．3 Comparison of blood parameters among Rongshui miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

表4 融水小型豬與其他小型豬、犬、大鼠、人的血液生化指標比較Tab．4 Comparison of blood biochemical indices among Beige miniature pigs，dog，rat，human and other minipigs

［1］ 袁進，顧為望．小型豬作為人類疾病動物模型在生物醫學研究中的應用［J］．動物醫學進展，2011，32(2):108 －111．

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［5］ http://minipigs．dk．

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