花豇豆中黃酮的提取工藝研究

劉茜(廣東環境保護工程職業學院，廣東 佛山 528216)

0 引言

食用豆類不僅是重要的糧食資源之一，還含有多種生物活性物質，其中含有多種維生素，礦物質以及黃酮類化合物[1]。

天然抗氧化劑普遍取自天然可以食用的原料中[2-6]，由于天然抗氧化劑具有安全，無毒等優點而引起人們的關注。尋找高效，天然抗氧化劑符合現代人的健康需要，極具開發價值。

黃酮類化合物是植物界廣泛存在的成分之一，常作為植物藥的有效成分存在，廣泛存在于植物的次級代謝產物中，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血壓、調節內分泌等多種功能，還可有效清除羥自由基等活性氧組分，是一類具有廣泛開發前景的天然抗氧化劑[7]。

浸提法是黃酮類化合物提取中較常用的一種提取法。浸提法主要依據各種黃酮類化合物的極性、溶解性不同，從而使其分離出，是黃酮類化合物的一種初級分離法。

1 實驗部分

1.1 材料與試劑

材料：花豇豆(市售)

試劑：95% 乙醇(開封市芳晶化學試劑有限公司)；FeSO4·7H2O(天津市凱通化學試劑有限公司)；30%過氧化氫(天津市永大化學試劑開發中心)；水楊酸(天津市博迪化工股份有限公司)；以上試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

新苗電熱恒溫鼓風干燥箱(上海新苗醫療器械制造有限公司)；KM 快速研磨機(湘潭湘儀儀器有限公司)；8411 電動振篩機(湘潭湘儀儀器有限公司)；電子分析天平(上海越平科學儀器有限公司)；數星HH-2 恒溫水浴鍋(金壇市杰瑞爾電器有限公司)；SHZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)；UV-754 型紫外可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司)。

1.3 黃酮的提取

1.3.1 花豇豆的預處理

將花豇豆用自來水洗凈，然后用蒸餾水洗3 遍，平鋪于不銹鋼托盤上，自然晾干，用粉磨機將花豇豆粉碎，然后過40 目篩，將粉末至于烘箱內于40℃下干燥5h，置于棕色試劑瓶中避光保存。

1.3.2 乙醇濃度對提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，分別加入40mL 的40%，50%，60%，70%，80%，95%的乙醇溶液，料液比為1∶20。置于回流裝置中回流45min，設置水浴溫度為80℃。冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測定其羥自由基清除率。

1.3.3 料液比對提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，分別加入20mL，40mL，60mL，80mL，100mL 的60%乙醇溶液，即料液比為：1∶10，1∶20，1∶30，1∶40，1∶50。置于回流裝置中回流45min，設置水浴溫度為80℃。冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測定其羥自由基清除率。

1.3.4 水浴溫度對提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，加入60mL60%乙醇溶液，置于回流裝置中回流45min，設置水浴溫度為60℃，70℃，80℃，90℃，95℃，冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測定其羥自由基清除率。

1.3.5 浸提時間對提取率的影響

稱取花豇豆粉末2.000g，放于150mL 的圓底燒瓶中，加入60mL60%乙醇溶液，置于回流裝置中回流15min，45min，75min，105min，135min，設置水浴溫度為70℃，冷卻后減壓抽濾，移取上層清液測定其羥自由基清除率。

1.4 羥自由基清除實驗

實驗體系中，過氧化氫在亞鐵離子作用下生成羥自由基，向體系中加入水楊酸捕捉羥自由基，同時產生在可見光區有特征吸收的紫色產物。在反應體系中加入抗氧化物質，與水楊酸競爭捕捉羥自由基，使生成的紫色產物減少，溶液的吸光度發生改變。通過比較實驗組與空白組反應溶液吸光度的變化評價受試物的抗氧化活性[8]。

黃酮提取液清除羥自由基(·OH)實驗在試管中依次加入0.5mL 水楊酸-乙醇溶液(9.1mmol/L)，0.5mL 的黃酮提取液，0.5mLFe2+溶液(9mmol/L)，3.5mL 蒸餾水，最后加入5.0mLH2O2(88mmol/L)啟動反應，搖勻后于510nm 處測定吸光度A1；取0.5mL 的蒸餾水代替Fe2+溶液所測得的吸光度為A2；取0.5mL 蒸餾水代替黃酮提取液所測得的吸光度為A3，均重復5 次，按下式[18]計算羥自由基(·OH)的清除率P(%)。

式中：A1為樣品的吸光度值；A2為對照體系的吸光度值；A3為空白組的吸光度值。

2 實驗數據記錄與處理

2.1 單因素實驗

2.1.1 乙醇濃度的影響

表1 不同濃度乙醇反應后提取液的吸光度與羥自由基清除率關系

由表1 可看出，乙醇濃度為60%時，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.2 料液比的影響

表2 不同料液比反應后提取液的吸光度與羥自由基清除率關系

由表2 可看出，當料液比為1∶30 時，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.3 水浴溫度的影響

表3 不同水浴溫度反應后提取液的吸光度與羥自由基清除率的關系

由表3 可看出，當溫度為70℃時，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

2.1.4 浸提時間的影響

表4 不同浸提時間反應后提取液的吸光度與羥自由基清除率的關系

由表4 可看出，當回流時間為75min 時，羥自由基清除率最高，其黃酮提取率最高。

3 結語

在本實驗設置的4 個影響因素下，確定了花豇豆粉末提取黃酮的最佳提取工藝：乙醇的體積分數為60%；料液比為1∶30；提取溫度為70℃；提取時間為75min 時，提取液中所含黃酮對羥自由基(·OH)具有較好的清除作用。使用該種方法來提取花豇豆中黃酮，對黃酮的提取和加工具有重要意義，為花豇豆加工企業進行了合理的深加工提供技術參考。

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