循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性研究

伍 勇 翁成蔭 方喜生 曹小飛 李寶秀 毛海波 劉 霞 關(guān)明媚 劉國龍

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，廣東廣州 510180

循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性研究

伍 勇 翁成蔭 方喜生 曹小飛 李寶秀 毛海波 劉 霞 關(guān)明媚 劉國龍▲

廣州醫(yī)科大學(xué)附屬廣州市第一人民醫(yī)院腫瘤科，廣東廣州 510180

目的 分析外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，探討其臨床意義。方法 采用萊爾生物循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測技術(shù)檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞在63例初治鼻咽癌和20例正常人中的表達(dá)情況，分析循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)差異及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。 結(jié)果 鼻咽癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為55.6%，而正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為0，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=19.213，P＜0.05）。在M0期和M1期患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率分別為48.1%和90.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.746，P＜0.05）。在EBV-DNA陰性的鼻咽癌患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為45.5%，而在EBV-DNA陽性的患者中陽性率為78.9%，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.029，P＜0.05）。性別、年齡、病理類型、T分期、N分期、總分期和VCA-IgA不同的各組中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論 循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌轉(zhuǎn)移和EBV-DNA密切相關(guān)，可用于鼻咽癌病情的評價。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞；鼻咽癌；臨床病理參數(shù)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTC）是指由腫瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞[1]。近年來研究表明，循環(huán)腫瘤細(xì)胞有助于腫瘤轉(zhuǎn)移灶的形成[2]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞在血液循環(huán)中的比例極低，每108～109個外周血細(xì)胞中才可能有1個[3]。在肺癌[4]、乳腺癌[5]、結(jié)直腸癌[6]、胃癌[7]、胰腺癌[8]等實體腫瘤中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞已被發(fā)現(xiàn)對腫瘤的輔助診斷、療效評價、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移監(jiān)測和預(yù)后判斷等有積極的臨床指導(dǎo)意義[9]。但循環(huán)腫瘤細(xì)胞在鼻咽癌患者中的表達(dá)情況及其臨床病理關(guān)系報道少見。因此，本研究旨在分析外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料

將廣州市第一人民醫(yī)院腫瘤科2013～2014年收治的63例鼻咽癌患者納入研究，其中男47例，女16例，年齡26 ～ 77歲，平均51歲，病理類型為分化型非角化性癌者6例，未分化型非角化性癌者57例。臨床分期采用鼻咽癌2008分期標(biāo)準(zhǔn)[10]，Ⅰ期1例，Ⅱ期7例，Ⅲ期21例，Ⅳa期23例，Ⅳb期11例。經(jīng)患者知情同意后，在治療前檢測其循環(huán)腫瘤細(xì)胞，同時檢測EB病毒DNA（EBV-DNA）和衣殼抗原IgA（viral capsid antigen-IgA，VCA-IgA）。Ⅰ期患者接受根治性放療，Ⅱ-Ⅳa期患者接受根治性的聯(lián)合鉑類的同期放化療（鼻咽部和頸部陽性淋巴結(jié)劑量70Gy/7周；頸部陰性淋巴結(jié)給予預(yù)防量50Gy/5周）。Ⅳb期患者接受順鉑聯(lián)合5-氟尿嘧啶為主的姑息性化療，如轉(zhuǎn)移灶完全緩解則接受根治性放療。另選擇性別與年齡構(gòu)成與上述63例患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義的20例正常人作為對照，檢測循環(huán)腫瘤細(xì)胞。

1.2循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測方法

采用萊爾生物循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測技術(shù)[11]。應(yīng)用真空采血管采集肘正中靜脈血，為防止靜脈穿刺過程中上皮細(xì)胞污染，前2mL血不采集，采集此后的3.2mL靜脈血于ACD抗凝管中。采集的血液在48h內(nèi)去除血漿，裂解液去除紅細(xì)胞，磁珠孵育混勻去除白細(xì)胞，分離液分離富集腫瘤細(xì)胞。使用CD45抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光檢測，8號著絲粒探針進(jìn)行熒光原位雜交。在熒光顯微鏡下計數(shù)，二倍體信號或CD45陽性為正常細(xì)胞，大于等于三倍體且CD45陰性為異常細(xì)胞。根據(jù)試劑盒的說明書，≥2個異常細(xì)胞判斷為循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。各組資料的比較采用x2檢驗和Fisher's精確概率檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1鼻咽癌與正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的表達(dá)差異

鼻咽癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為55.6%，而正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為0，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=19.213，P＜0.05）。

2.2循環(huán)腫瘤細(xì)胞與性別、年齡、病理類型及分期的關(guān)系

在M0期和M1期患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率分別為48.1%和90.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.746，P＜0.05）。性別、年齡、病理類型、T分期、N分期和總分期不同的各組中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.3循環(huán)腫瘤細(xì)胞與EBV-DNA、VCA-IgA的關(guān)系

在EBV-DNA陰性的鼻咽癌患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為45.5%，而在EBV-DNA陽性的患者中陽性率為78.9%，兩者差異有顯著性意義（x2=6.029，P＜0.05）。VCA-IgA陰性和陽性的患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。在VCA-IgA中位值4.17處將患者分為VCAIgA≤4.17組和VCA-IgA＞4.17組，兩組間循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1　循環(huán)腫瘤細(xì)胞與性別、年齡、病理類型及分期的關(guān)系

表2　循環(huán)腫瘤細(xì)胞與EBV-DNA、VCA-IgA的關(guān)系

3　討論

臨床分期是評價腫瘤的基本方法，但主要依靠影像學(xué)。近年來，隨著分子靶向治療的興起，越來越多的分子標(biāo)記物被用來對腫瘤進(jìn)行療效預(yù)測和預(yù)后評價[12]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞來自腫瘤原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶，具有和腫瘤一樣的生物學(xué)特性，逐漸成為腫瘤的輔助評價指標(biāo)[13]。監(jiān)測外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞值變化，可評價化療方案療效[14]。同時，由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞易于獲取，不需要進(jìn)行腫瘤活檢，可用于檢測腫瘤的基因狀態(tài)，指導(dǎo)靶向治療，被稱為“液體活檢”[15]。

在本研究中，鼻咽癌患者中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為55.6%，而正常人中循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為0，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=19.213，P＜0.05）。這說明本研究使用的循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測方法有較好的特異性，在正常人中檢測不到。蔡清清等應(yīng)用改良免疫磁珠富集聯(lián)合免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測鼻咽癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞，20例正常人的外周血中未檢測到CK8/18，63例鼻咽癌患者的外周血檢測到CK8/18，陽性率為82.9%（63/76，P＜0.05）[16]。此結(jié)果與本研究類似，陽性率有差異在于檢測方法不同。本研究的檢測方法使用磁珠富集腫瘤細(xì)胞，并結(jié)合了免疫熒光染色和熒光原位雜交兩種技術(shù)，不受上皮標(biāo)志物表達(dá)所限，可提高循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢出的敏感性和特異性。

本研究發(fā)現(xiàn)，在M0期和M1期患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率分別為48.1%和90.9%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=6.746，P＜0.05）。由于循環(huán)腫瘤細(xì)胞是脫落進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞，因此極易隨著血液循環(huán)進(jìn)入其他器官，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移。在乳腺癌患者中發(fā)現(xiàn)，循環(huán)腫瘤細(xì)胞可以早期預(yù)測腫瘤的轉(zhuǎn)移[17]。肝細(xì)胞癌患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量與腫瘤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有關(guān)，循環(huán)腫瘤細(xì)胞的數(shù)量≥5時，可能腫瘤更具轉(zhuǎn)移傾向，預(yù)后更差，患者生存期更短[18]。因此，在循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性的鼻咽癌患者中，應(yīng)高度懷疑腫瘤轉(zhuǎn)移的可能性，完善其他器官的相關(guān)檢查，并考慮加強(qiáng)化療力度。

本研究還發(fā)現(xiàn)，在EBV-DNA陰性的鼻咽癌患者中，循環(huán)腫瘤細(xì)胞陽性率為45.5%，而在EBVDNA陽性的患者中陽性率為78.9%，兩者差異有顯著性意義（x2=6.029，P＜0.05）。EB病毒感染與鼻咽癌關(guān)系密切。EBV-DNA可用于鼻咽癌的早期診斷和分期，并可監(jiān)測鼻咽癌的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，同VCAIgA相比，具有更高的敏感性和特異性[19]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞和EBV-DNA相關(guān)，提示循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌的病程進(jìn)展密切相關(guān)，對鼻咽癌的診斷和復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移監(jiān)測具有臨床價值。

綜上所述，循環(huán)腫瘤細(xì)胞與鼻咽癌轉(zhuǎn)移和EBV-DNA密切相關(guān)，可用于鼻咽癌病情的評價。由于鼻咽癌患者生存期較長，對于循環(huán)腫瘤細(xì)胞的預(yù)后預(yù)測價值還有待以后隨訪進(jìn)一步驗證。

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Correlation of circulating tumor cells with clinicopathological parameters in patients with nasopharyngeal carcinoma

WU Yong WENG Chengyin FANG Xisheng CAO Xiaofei LI Baoxiu MAO Haibo LIU Xia GUAN Mingmei LIU Guolong
Department of Oncology,Guangzhou Medical University Affiliated Guangzhou First People's Hospital,Guangzhou 510180,China

Objective To analyze the correlation of circulating tumor cells(CTCs)with clinicopathological parameters in patients with nasopharyngeal carcinoma(NPC),and explore its clinical significance. Methods CTCs were detected in 63 non-treated NPC patients and 20 normal people using CyttelBio CTC detection technology.The differential expression of CTCs and relationship between CTCs and clinicopathological parameters were analyzed. Results The positive rate of CTCs in NPC patients was 55.6%,while it is 0 in normal people,and the difference was statistically significant(x2=19.213，P＜ 0.05).In M0 and M1 NPC patients,the positive rate of CTCs was 48.1% and 90.9% respectively,with significant difference (x2=6.746，P＜ 0.05).In NPC patients with negativeEBV-DNA,the positive rate of CTCs was 45.5%,while in patients withpositive EBV-DNA,the rate was 78.9%,and the difference was statistically significant(x2=6.029，P＜ 0.05).In groups with differentgender,age,histological type,T stage,N stage,overall stage or VCA-IgA,the positive rates of CTCs had no significant difference. Conclusion CTCs are closely correlated with NPC metastasis and EBV-DNA,and can be used to evaluate NPC.

Circulating tumor cells;Nasopharyngeal carcinoma;Clinicopathological parameters

R739.63

A

2095-0616（2015）09-17-04

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（2015-04-10）