探討酶聯免疫吸附試驗在包蟲病診斷中的應用價值

王文碧

四川省阿壩藏族羌族自治州疾病預防控制中心，四川阿壩 624000

包蟲病（hydatidosis），又稱棘球蝴病（echinococcosis），呈全球性分布，屬于人畜共患疾病。包蟲病主要流行于畜牧地區，在我國此病多發于四川西部、青海、寧夏、新疆、西藏、甘肅、內蒙、陜西等地[1]，包蟲可以在人體內存活數年，患者的臨床表現與包蟲的寄生部位、囊腫大小密切相關且不盡相同。機體免疫應答反應是包蟲病感染早期的主要應激反應，免疫學診斷可以為該病的早期診斷提供重要診斷指標[2]。該文中將以該院2014年1月—2014年12月期間收集的150份人血清樣本作為該組研究的檢測對象，分別采用ELISA與DIGFA對血清進行包蟲病檢測，其中包括感染包蟲病患者、疑似包蟲病感染者以及健康人群血清各50份，對比兩種檢測方法在包蟲病臨床診斷中的敏感度與特異性，以探討酶聯免疫吸附試驗在包蟲病診斷中的應用價值，為今后的臨床工作提供思路,現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

分別采用酶聯免疫吸附試驗 （ELISA）與滴金免疫滲濾法（DIGFA）對該院采集的150份血清進行檢測，其中包括感染包蟲病患者（感染組）、疑似包蟲病感染者（疑似組）以及健康人群（健康組）血清各50份。感染組中，男性29例，女性21例；年齡6～67歲，平均（43.64±4.49）歲。疑似組中，男性 27例，女性 23例；年齡8～62歲，平均（41.47±5.15）歲。健康組中，男性 27例，女性 23例；年齡 8～66歲，平均（42.53±5.41）歲。3組人員均來自同一牧區，且在性別、年齡方面差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 試劑 ①DIGFA-檢測：試劑盒采用包蟲病金標快速診斷（DIGFA-kit）試劑盒（批號 20011015）；小牛血清（批號 100419）；鼠抗人聯辣根過氧化物酶抗體［IgG（H+L）］（批號：KL12737640）；②ELISA檢測：包蟲lgG抗體診斷試劑盒（批號20031109）。

1.2.2 檢測方法 ①DIGFA-檢測：將血液樣本經A液稀釋后（1:5），加100 μL于反應板的小孔中，滲入后加B液3滴，滲入后加C液3滴，滲入后加B液3滴，3 min后即可對結果進行評定；檢測結果評定標準由中國新疆包蟲病臨床研究所[3]提供：肉眼觀察以C點（+）為單房包蟲病（細粒棘球蝴病）；D點（+）為多房包蟲病（泡球蝴病）。

②ELISA檢測：將待檢血液樣本經稀釋液稀釋后（1:100）按常規ELISA法操作[4]；計算樣本與陰性對照的A值之比（S/N）≥3.0為陽性，S/N ＜3.0，為陰性。

1.3 統計方法

應用 SPSS 15.0軟件分析數據，計數資料采用百分比（%）表示，數據對比采取χ2檢驗，P＞0.05表示差異有統計學意義，

2 結果

DIGFA法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為 96%（48/50）、特異度為 100%（50/50）；ELISA 法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為100%（50/50）、特異度為100%（50/50）；DIGFA與ELISA法檢測結果符合率為 91.67%，兩組在特異性抗體的敏感度 （χ2=0.141，P=0.24）與特異度 （χ2=0.203，P=0.17）方面差異無統計學意義(P＞0.05)，見表 1。

表1 兩種檢測方法結果對比分析[n（%）]

3 討論

包中病是指由細粒棘球絳蟲（單房棘球絳蟲）的幼蟲，即細粒棘球蝴（cystic echinococcosis，CE）和多房棘球絳蟲（泡性棘球絳蟲）幼蟲，即泡球蝴（alveococcosis，AE）所導致的寄生蟲病的統稱[5]。臨床中根據寄生蟲蟲種的不同將包蟲病分為囊型包蟲病（cysticechinococcosis，CE， 單房型包蟲病）、 泡型包蟲病（alveolar echinococcosis，AE，多房型包蟲病）以及混合型包蟲病3種，混合型包蟲病是由伏氏棘球絳蟲或少節棘球絳蟲的幼蟲共同致病，在我國尚未見此類病例。CE和AE都屬于食源性疾病，終宿主以犬、狼、狐等食肉動物為主，蟲卵會隨宿主糞便排出體外，被人類誤食后即會感染包蟲病。牧區一般均為山區，而且全年氣候干旱少雨，生活區域內犬、狼、狐等動物的糞便密度高，污染源眾多，因此是包蟲病的主要流行區，個別村落人群包蟲病的感染率可高達28.83%[6]，嚴重影響當地居民的身體健康。

現階段臨床中針對包蟲病的檢測與診斷以腹部超聲檢測與血清學檢測為主，腹部超聲檢測可以直觀地顯示包蟲的存在，而且對于被機體的免疫系統消滅包蟲病后出現的吸收癱痕或鈣化灶等具有良好的鑒定價值[7]，但是由于包蟲病的潛伏期較長，且以慢性損傷為主，早期感染并無明顯的癥狀與體征，因此超聲檢查對包蟲病的早期篩查效果非常有限。

近年來，血清學檢測方法以其操作簡便、敏感性高、特異性強、成本低廉等優勢在臨床中的應用程度越來越高，其經常與超聲檢測、B超檢測等聯合應用，已經成為包蟲病臨床篩查與診斷的重要手段之一。

DIGFA法最早主要用于HIV抗體的檢測，其工作原理主要是利用微孔濾膜的垂直滲透濃縮，使標本中的抗包蟲病特異性抗體與N·C膜包被的抗原快速形成抗原抗體復合物[8]，然后加入膠體金標記的抗體，由于膠體金肉眼可見，因此陽性反應會在膜上呈現紅色斑點，陰性反應則不形成紅色斑點。DIGFA法操作簡便、速度快，對環境與設備的要求較低，因此近年來在其他傳染病的免疫檢測中的應用程度越來越高。

ELISA法在包蟲病早期診斷中的應用主要是由于機體在包蟲抗原的刺激下會產生IgM抗體，IgG替代IgM并成為抗包蟲特異性免疫球蛋白的主要組成部分，導致IgM抗體水平下降，IgG濃度在體內持續升高。ELISA與DIGFA法相比，對環境、操作人員技術以及設備等要求較高，因此對其推廣有所局限。

該研究中，DIGFA法在包蟲病患者血清檢測中的特異性抗體的敏感度為96%、特異度為100%；ELISA法的敏感度為100%、特異度為100%；DIGFA與ELISA法檢測結果符合率為91.67%，兩組在特異性抗體的敏感度（χ2=0.141，P=0.24）與特異度（χ2=0.203，P=0.17）方面，差異無統計學意義，與歐仕穎等[9]研究相符。

綜上所述，DIGFA法與ELISA法在包蟲病臨床診斷中的敏感度與特異性均較高，其中ELISA法的敏感度更高，但是對檢測時間、操作技能以及設備的要求較高，不適合作為現場流調使用。

[1]黃菱,李正直,李燕兵,等.兩種特異抗體檢測與B超診斷在包蟲病流行病學調查中的應用[J].寧夏醫科犬學學報,2012,34（6）：557-560.

[2]Feng X，H.wen,z zhang,et al.Dot immunogold filtration assay(DIGFA)w ith multiple native antigens for rapid serodignosis of human cystic and alveolar echinococcosis[J].Acta Tropica,2010,113（2）：114-120.

[3]李宗吉,趙巍,王婭娜,等.細粒棘球蚴重組抗原mMDH用于囊型包蟲病血清學診斷的初步研究[J].寧夏醫科大學學報,2012,33（3）：216-218.

[4]鄭云太.采用B型超聲波、酶聯免疫吸附試驗診斷包蟲病探討[J].中華流行病學雜志,2014,11（25）：1005.

[5]Yang YR,Craig PS,Vuitton DA,et al.Serological prevalence of echinococcosis and risk factors for infection among children in rural communities of southern Ningxia,China[J].Trop Med Int Health,2008,13（8）：1086-1094.

[6]劉海青,趙延梅,吳獻洪,等.青海省治多縣人群包蟲病血清流行病學調查[J].現代預防醫學雜志,2009,36（2）：366.

[7]Yang YR,Craig PS,Ito A,et al.A correlative study of ultrasound with serology in an area in China coendemic for human alveolar and vystic echinococcosis[J].Trop Med Int Health,2007,12（5）：637-646.

[8] Rausch RL,Wilson JF,Schantz PM,et al.Spontaneous death of Echinococcus multilocularis:cases diagnosed serologically (by Em2 Elisa)and clinical signifocance[J].The American Journal of Tropical Medicine and Hyginene,1987(36)：576-585.

[9]歐仕穎,余長芳.用DIGFA，ELISA兩種免疫診斷方法檢測包蟲病的綜合評價[J].現代檢驗醫學雜志,2011,26（5）：121-123.