DC—CIK技術聯合奧沙利鉑、吉西他濱化療治療進展期中央型非小細胞肺癌的臨床研究

宿濛　秦寶麗

[摘 要] 目的：探討樹突狀細胞（dendritic cells，DC）并細胞因子誘導的殺傷細胞（cytokine induced killers，CIK）聯合培養體內回輸技術聯合奧沙利鉑（L-OHP）、吉西他濱（GEM）化療治療進展期中央型非小細胞癌肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）的近遠期臨床療效。方法：研究入選2010年7月-2011年12月間收治的78例進展期中央型NSCLC患者為研究對象，據隨機數字分為觀察組（40例）和對照組（38例），對照組給予L-OHP+GEM 4周期化療方案，觀察組在此基礎上于化療間隙給予DC-CIK細胞回輸治療，對比兩組近期療效、毒副反應并2年生存率。結果：治療結束2個月后，觀察組KPS評分（79.2±5.7）明顯高于對照組（76.5±5.3） （t=2.164 P=0.034）。觀察組近期總有效率（72.5%）、臨床總獲益率（90.0%）均高于對照組水平（52.6%、78.9%），但差異無統計學意義（χ2=3.294 P=0.070、χ2=1.829 P=0.176）。兩組毒副反應類型及發生率相近，差異均無統計學意義（P>0.05）。治療結束后隨訪24個月，觀察組平均生存時間（19.4±0.9）月 vs.（17.2±1.0）月、2年生存率（57.5%vs.39.5%）均高于對照組，平均生存時間差異有統計學意義（t=10.223 P<0.001）。Log-rank檢驗顯示兩組生存時間分布差異無統計學意義（χ2=2.810 P=0.094）。結論：DC-CIK技術聯合化療較之姑息性化療治療進展期中央型NSCLC能在不增加毒副反應基礎上，提高患者生活質量與療效，并有延長患者生存時間，提高遠期生存率趨勢。

[關鍵詞] 非小細胞肺癌；中心型肺癌；樹突狀細胞；細胞因子誘導的殺傷細胞；生存率

中圖分類號：R734.2 文獻標識碼：A 文章編號：2095-5200（2015）02-031-04

DOI：10.11876/mimt201502011

非小細胞癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌發病率的70%-80%，進展期中央型肺癌因解剖因素很少有切除可能，主要依賴姑息性化療或放療治療。而放療可增加化療藥物毒性，化療又可加重放療帶來的放射性損傷，無論是化療還是放療臨床有效率仍不盡如人意[1]。癌癥發生與發展與機體免疫功能密切相關，機體免疫監視功能受損則無法識別和清除惡變[2]。近年過繼免疫生物療法逐步應用于癌癥治療，該療法通過將細胞因子誘導殺傷細胞（cytokine induced killer cell，CIK）回輸患者體內 來增強機體細胞免疫功能，殺傷腫瘤細胞。其中，以樹突狀細胞（dendritic cell，DC）、CIK細胞聯合培養回輸體內抗腫瘤活性最強[3]。筆者近年來采用DC-CIK技術聯合化療治療進展期中央型NSCLC，并進行了隨機對照隨訪研究，結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 資料來源

本院2010年7月-2011年12月間收治78例進展期中央型NSCLC患者為研究對象。入組標準：經穿刺病理檢查確診為中心型肺癌，國際抗癌聯盟TNM分級Ⅲ期或以上，Karnofsky（KPS）評分60分以上，既往未接受放化療治療者且預計生存期6個月以上者。排除標準：治療前凝血功能、肝腎功能異常者，治療方案不耐受者，失訪病例。78例患者中男42例，女36例，年齡4469歲，平均（57.2±5.5）歲；腺癌33例、鱗癌22例、鱗腺癌15例、肉瘤樣癌8例。78例患者據入組順序按照電腦產生隨機數字分為觀察組（40例）、對照組（38例），兩組患者入組基礎信息對比組間差異無統計學意義。

1.2 治療方案

患者治療方案均獲得本人知情同意，并爭得醫院醫學倫理委員會批準。兩組化療方案為L-OPH（5mg/支，賽諾菲（杭州）制藥有限公司生產，批準文號：國藥準字J20130004）130mg/m2加5% GS 500mL靜脈3h內滴注，第1d。GEM（200mg/支，法國禮來有限公司生產，注冊證號H20100300） 1200mg/m2 加0.9% NS 150mL靜滴30min第1d，第8d。每28d為1化療周期，連續化療4個周期。觀察組在此基礎上給予DC-CIK生物免疫療法[4]。具體為：化療前1d通過細胞分離機與淋巴細胞分離液獲取患者本人外周血單個核細胞。DC細胞培養：經淋巴細胞分離液密度梯度離心獲得外周血單個核細胞，經RPMI1640培養液洗滌，置于BTN 無血清培養基中混懸，在 37℃、5% CO2培養箱中培養 4 h后加入GM-CSF（1000 U/mL）和I L-4 （ 5000 U/mL） 繼續培養，每隔2d換液1 次，第5 d加入TNF-α （500U/mL）誘導成熟DC。CIK細胞培養：分離后淋巴細胞加入重組人IFN-γ（1 000 U/mL）和10%AB 型人血清RPMI1640培養液，24 h后加入小鼠抗人CD3單抗（100 ng/mL）、IL-2（1000 U/mL），以后隔天半量換液維持培養。DC-CIK 細胞聯合培養：收獲第7dDC 細胞及CIK 細胞按按1∶5計數混合培養3d，隔天補加IL-2（1000 U/mL）培養液。在化療周期間隔第2、4、6、8、10d，將DC-CIK細胞用100mL0.9% NS液回輸體內，每次回輸細胞4～5×109個，5次為1療程，使用4個療程。治療過程中出現胃腸道反應、骨髓抑制、肝腎功損害等對癥處理。

1.3 觀察指標

近期臨床療效判定[5]：治療結束2個月后復查胸部CT據WHO實體瘤客觀療效標準判定近期化療效果。總有效例數=CR數+PR數，臨床獲益例數=CR數+PR數+SD數。

毒副反應：每個治療周期常規監測臨床生化指標并記錄藥物毒性反應，參照NCI-CTCAE（National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events） 3.0版標準評價治療期間藥物毒副反應。

生存率：自治療結束后隨訪24個月，計算生存期、生存率，生存期以到死亡或隨訪結束為止。

1.4 統計學方法

數據由Epidata軟件建立數據庫并用SPSS19.0軟件進行統計學分析，組間定量資料平均數用x±s表示，定量數據比較采用t檢驗，構成比數據比較采用χ2檢驗或fisher精確概率法，等級數據比較采用Wilcoxon-W秩和檢驗，生存時間計算采用Kaplan-Meier法，α取雙側檢驗，P<0.05視為差別有統計學意義。

2 結果

2.1 近期療效

治療結束2個月后，患者胸痛、胸悶癥狀不同程度好轉；觀察組生活質量得分（KPS評分）明顯高于對照組（P<0.05），兩組近期療效構成不同（P<0.05），觀察組總有效率、臨床總獲益率均高于對照組水平，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2 毒副反應

兩組治療期間毒副反應見表2。經對癥支持，兩組均無因毒副反應退出病例；兩組毒副反應類型及發生率相近，差異均無統計學意義（P>0.05）。

2.3 生存率分析

治療結束后隨訪24個月，觀察組平均生存時間、中位生存時間、1年及2年生存率均高于對照組，其中平均生存時間差異有統計學意義（P<0.05），見表3；Log-rank檢驗顯示兩組總體生存時間分布差異無統計學意義（χ2=2.810 P=0.094），見圖1。

3 討論

Ⅲ期中心性NSCLC治療主要依賴于化療或放療。以鉑類藥物為核心，聯合吉西他濱、長春瑞濱、多西他賽、足葉乙甙等藥物組合方案是治療進展期NSCLC一線方案[6]。筆者選用O-LHP+GEM中，O-LHP是第三代鉑類化合物，通過與DNA結合形成鉑化加合物，抑制腫瘤細胞DNA合成及修復。GEM為核苷酸還原酶抑制劑，主要作用于細胞周期中DNA合成期，促進DNA鏈斷裂，抑制DNA合成及通過細胞毒作用促進癌細胞凋亡[7]。文獻報道O-LHP+GEM姑息性化療治療晚期NSCLC有效率也僅為46.2-57.2%[8]，本研究為52.6%。近年研究表明T淋巴細胞、NK細胞在免疫監視、殺傷腫瘤細胞方面具有關鍵作用，惡性腫瘤患者普遍免疫功能低下，加之放化療帶來骨髓抑制會加重患者免疫抑制，因此機體主動免疫抗腫瘤作用嚴重減弱[9]。因此，一種新治療手段—過繼性細胞免疫治療 （adoptive cell Immunotherapy，ACI） 逐步成為臨床繼手術、放療、化療后第4種治療手段。ACI是指將自身或同種異體免疫細胞在體外通過其他細胞因子激活并擴增，將達到一定數量免疫細胞回輸患者體內，在不損傷機體免疫系統結構和功能前提下，增強細胞免疫功能，殺傷腫瘤細胞[10]。本研究即通過隨機對照研究，探討過繼免疫生物療法對肺癌療效。

ACI療法中，CIK 細胞是迄今為止已知最具腫瘤殺傷活性細胞毒性T細胞。CIK細胞是人外周血單個核細胞在體外經多種細胞因子刺激后獲得一群異質性細胞，該細胞表面可以表達 CD3 和 CD56 這2種膜蛋白分子，兼有T淋巴細胞溶瘤活性和NK細胞非MHC限制性殺瘤特點。CIK細胞體外培養細胞表型發生變化，其細胞毒活性與增值能力大為增強，且對人體骨髓干細胞和造血祖細胞幾乎沒有毒性，因而在腫瘤生物治療上表現出強大優勢。CIK細胞進人體內活化后可以分泌IL-2、IL-6、TNF-a等多種細胞因子，此類因子可直接發揮細胞毒作用，并可誘導癌細胞表達Fas和FasL細胞表面分子，加速細胞凋亡。體外實驗表明CIK細胞能誘導并加速人肺癌細胞株A549早期凋亡[11]。CIK細胞在體內受到其他因子刺激后，可以將胞漿顆粒釋放到胞外，而促進癌細胞裂解[12]。DC細胞是目前功能最強專職抗原提呈細胞，成熟DC可通過Ⅱ型組織相容性抗原等途徑呈遞腫瘤抗原，誘導特異性免疫反應，抵制腫瘤細胞免疫逃逸。它既可有效誘導靜止T細胞增殖，也可促進細胞毒性T淋巴細胞和輔助性T淋巴細胞生成[13]。將具有腫瘤抗原提呈能力DC細胞與細胞毒效應CIK細胞聯合培養，理論上可明顯提高CIK細胞毒活性。體外抗腫瘤研究表明DC-CIK細胞聯合培養較CIK細胞表達更高水平CD3+/CD56+、CD3+/CD8+比例，患者免疫水平顯著提高[14]。

劉芳等[15]報道CIK細胞回輸聯合培美曲塞二鈉兩周期化療方案治療晚期NSCLC，總體有效率（69.7% vs.32.1%）遠高于單藥培美曲塞二鈉化療組。鄭林靜等[16]通過DC-CIK培養回輸聯合酪氨酸激酶抑制劑治療晚期肺癌，總體有效率達86.9%（40/46）。本研究中筆者在L-OHP+GEM姑息化療基礎上聯合采用DC-CIK技術治療中心型NSCLC，療結束2個月后，觀察組生活質量評分明顯高于對照組，且臨床總有效率、總獲益率分別較之對照組提高了近20個、12個百分點，與上述結果相近；觀察組平均生存時間較對照組延長了2個月，2年生存率提高了18個百分點，說明伴隨患者體內免疫狀態改善，化療療效與預后均有所改善。除發熱外兩組毒副反應類型及發生率相近，觀察組發熱發生率（22.5%）高于對照組（10.5%）水平，可能與細胞離心分離時清洗不徹底或與患者過敏有關，但發熱癥狀多數較輕，均表現為一過性，未影響到序貫治療。

綜上所述，DC-CIK技術聯合化療較之姑息性化療治療進展期中央型NSCLC能在不增加毒副反應基礎上，提高患者生活質量與療效，并有延長患者生存時間，提高遠期生存率趨勢。

參 考 文 獻

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