粳米米湯止瀉物質基礎及其機制＊

楊麗萍，胡 瑤，蘇 芯，盛艷梅

成都醫學院 藥學院（成都 610083）

米湯古稱米飲，主要含淀粉、蛋白質、脂肪等營養成分，長年實踐表明，米湯性味甘平，能益氣、養陰、潤燥，具有一定止瀉作用［1－3］。本課題組前期對粳米、秈米、小米米湯止瀉作用對比研究，發現不同來源米湯的止瀉活性存在明顯差異，尤以粳米米湯的止瀉作用最顯著［4］。本次研究擬進一步探討粳米米湯止瀉的主要物質基礎及其可能機制。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

粳米（成都清河米業有限責任公司，許可證號：QS510101020479）；番瀉葉溶液（稱取番瀉葉15g，加水適量，煮沸約10min，收集濾液，采用減壓濃縮方式得到溶液，定容至50mL備用）；甲硫酸新斯的明注射液（上海信誼金朱藥業有限公司，批號：130403）；陽性藥鹽酸洛哌丁胺膠囊（西安楊森制藥有限公司，批號：131015425）；Na試劑盒和K試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20141010）。

1.2 實驗動物

健康成年ICR小鼠，清潔級，雌雄各半，體質量20～25g，由四川省醫學科學院·四川省人民醫院實驗動物研究所提供，合格證號：SCXK（川）2013～15。

1.3 主要儀器

酶標儀（Biotek Powerwave XS2）、離心機（北京醫用離心機廠）、旋轉蒸發儀、水浴鍋和烘箱等。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品提取制備［5－6］1）粳米米湯的制備：稱取粳米100g，分別加入蒸餾水1 000mL，大火燒開轉小火熬制30min，濾掉剩余米渣，即得相應的米湯原液。2）直鏈淀粉溶液的制備：取20g粳米，粉碎成細粉，加160mL蒸餾水，在65℃下磁力攪拌1h，以3 000r/min離心15min，離心半徑12cm，傾出上清液，剩余沉淀加120mL蒸餾水洗滌，再置65℃下磁力攪拌0.5h，同法離心，傾出上清液，將兩次所得上層溶液合并，即得直鏈淀粉溶液。3）支鏈淀粉溶液的制備：將第2次提取直鏈淀粉離心后的沉淀，加水200mL，加熱煮沸，分散均勻，并加水稀釋定容至250mL，即得支鏈淀粉溶液。4）樣品溶液的配制：分別取上述3種溶液適量，采用干燥失重法測定其固形物含量分別為：C1＝2.2%、C2＝4.5%和C3＝2.8%。以固形物含量最低C1為參照，加水稀釋其余兩種溶液，使3者固形物含量一致，備用。

1.4.2 小鼠急性腹瀉模型制備及處理［7－9］60只小鼠隨機分為5組：直鏈淀粉組、支鏈淀粉組、粳米米湯組、陽性對照組和模型對照組，每組12只。實驗前小鼠禁食不禁水12h。各米湯組以米湯溶液（0.4mL/只）灌胃，模型對照組予等體積蒸餾水。給藥30min后，各組均以番瀉葉劑（0.4mL/只）灌胃，隨后將小鼠單只置于漏空的籠中，下墊濾紙。觀察并記錄小鼠稀便次數，以稀便次數表示腹瀉程度，每小時換紙1次，連續觀察5h。

1.4.3 小鼠慢性腹瀉模型制備及處理［10－11］60只小鼠，每組10只。50只模型組小鼠以番瀉葉劑（0.4mL/只）灌胃，10只正常對照組小鼠予同體積蒸餾水，連續8d；造模第8天將造模小鼠按1.4.2項方法分組給藥1次，30min后以番瀉葉劑（0.4mL/只）灌胃，觀察記錄各組小鼠稀便次數，連續觀察4h。之后連續6天，藥物組予受試藥物（0.4mL/只）灌胃，正常對照組與模型對照組予同體積蒸餾水。最后一次給藥后30min予墨汁灌胃（0.2mL/只），10min后摘眼球取血，靜置1h，3 000r/min離心15min，離心半徑12cm，取血清，存放于－20℃，備用。取血后脫臼處死小鼠，迅速分離小腸，備用。

1.4.4 新斯的明致小鼠小腸運動亢進模型的制備及處理［8－9］小鼠50只，分組同慢性腹瀉模型制備，每組10只，苦味酸標記，編號，稱體質量并記錄。正常對照組與模型對照組灌蒸餾水0.4mL/只；粳米米湯組、直鏈淀粉組和支鏈淀粉組分別灌服粳米米湯、直鏈淀粉溶液和支鏈淀粉溶液0.4mL/只。連續灌服4d，每天給藥1次，期間小鼠正常喂養。第3天給藥后，小鼠禁食不禁水12h。第4天給藥前稱量每只小鼠體質量并記錄，給藥15min后除空白對照組外，其余各組均腹腔注射甲硫酸新斯的明10mL/kg。注射15min后，各組均灌服0.2mL墨汁。10min后迅速將小鼠處死，打開腹腔，分離小腸，備用。

1.5 檢測指標

1.5.1 小腸推進率 用直尺記錄小腸總長度和墨汁在腸道中推進的距離（幽門到墨汁推進前端的距離），推進率＝墨汁在腸道中推進的距離/小腸總長度×100%。

1.5.2 血清鈉、鉀離子含量測定 按試劑盒說明書測定血清中鈉、鉀離子含量，并計算其濃度（測定OD值/標準OD值×標準品濃度×樣本測試前稀釋倍數）。

1.6 統計學方法

應用SPSS 17.0軟件進行統計學處理，定量資料以均數±標準差（±s）描述。根據數據分布特征，采用單因素方差分析或t檢驗進行組間比較，并進一步用LSD法進行兩兩比較，檢驗水準α設定為0.05。

2 結果

2.1 急性腹瀉模型各組腹瀉情況

與模型對照組比較，粳米米湯組和直鏈淀粉組急性腹瀉次數均明顯減少，在2、3和4h，其差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；在2、3和4h，模型對照組、粳米米湯組和支鏈淀粉組的稀便次數均高于直鏈淀粉組，除4h粳米米湯組外，其余差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；而支鏈淀粉僅有一定的止瀉趨勢，與模型對照組比較，其差異無統計學意義（P＞0.05）（表1）。

2.2 慢性腹瀉模型各組腹瀉情況

與模型對照組比較，粳米米湯組和直鏈淀粉組的稀便次數在各時間點均減少，在2h和3h其差異有統計學意義（P＜0.01），直鏈淀粉的止瀉作用最明顯；與模型對照組比較，支鏈淀粉僅在2h表現出止瀉作用，此時其差異有統計學意義（P＜0.01）；與直鏈淀粉組比較，支鏈淀粉組稀便次數較多，在1h、2h和3h其差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）（表2）。

表1 不同時間點急性腹瀉模型各組稀便次數的比較（±s，n＝12）

表1 不同時間點急性腹瀉模型各組稀便次數的比較（±s，n＝12）

注：與模型對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與直鏈淀粉組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

4h 5h模型對照組 0.6±0.3 4.3±1.0△△ 3.8±0.8△△ 1.5±0.8△組別 1h 2h 3h 0.3±0.5 0.4±0.6陽性對照組 0.0±0.0 2.2±1.0＊＊ 0.8±0.6＊＊ 0.3±0.6＊ 0.1±0.3粳米米湯組 0.7±0.8 2.6±1.0＊＊△ 2.2±0.7＊＊△△ 0.5±0.7＊ 0.1±0.3直鏈淀粉組 0.4±0.7 2.1±1.1＊＊ 1.2±0.8＊＊ 0.4±0.5＊ 0.1±0.3支鏈淀粉組 0.7±1.0 3.4±1.5△△ 2.9±1.1△△ 0.9±1.4△

表2 不同時間點慢性腹瀉模型各組稀便次數的比較（±s，n＝10）

表2 不同時間點慢性腹瀉模型各組稀便次數的比較（±s，n＝10）

注：與模型對照組比較，＊＊P＜0.01；與直鏈淀粉組比較：△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 1h 2h 3h 4h模型對照組 0.5±0.5 5.3±0.9△△ 3.3±0.9△△0.7±0.7陽性對照組 0.0±0.0＊＊ 2.1±0.7＊＊ 1.5±0.5＊＊ 0.4±0.5粳米米湯組 0.2±0.4 2.9±0.9＊＊ 2.4±0.5＊＊△0.5±0.5直鏈淀粉組 0.0±0.0＊＊ 2.7±0.7＊＊ 1.7±0.7＊＊ 0.5±0.5支鏈淀粉組 0.3±0.5△ 3.8±0.8＊＊△△2.8±0.6△△0.4±0.5

2.3 慢性腹瀉模型各組小腸推進率的比較

與模型對照組比較，粳米米湯組和直鏈淀粉組的小腸推進率均下降，其差異有統計學意義（P＜0.01），尤以直鏈淀粉作用最明顯；粳米米湯組和支鏈淀粉組的小腸推進率均高于直鏈淀粉組，其差異有統計學意義（P＜0.01）（表3）。

表3 對慢性腹瀉模型小鼠小腸運動功能的影響（±s，n＝10，%）

表3 對慢性腹瀉模型小鼠小腸運動功能的影響（±s，n＝10，%）

注：與模型對照組比較，＊＊P＜0.01；與直鏈淀粉組比較，△△P＜0.01

組別 推進率正常對照組51.09±8.98模型對照組 72.95±7.78△△粳米米湯組 56.94±4.27＊＊△△直鏈淀粉組 50.18±3.77＊＊支鏈淀粉組 67.89±7.93△△

2.4 慢性腹瀉模型各組血清鈉、鉀離子濃度的比較

粳米米湯組、直鏈淀粉組、支鏈淀粉組的鈉、鉀離子濃度均高于模型對照組，其差異有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；與直鏈淀粉組比較，粳米米湯組與支鏈淀粉組鉀離子濃度較低，其差異有統計學意義（P＜0.05），而其鈉離子濃度的差異無統計學意義（P＞0.05）（表4）。

表4 對慢性腹瀉模型小鼠血清中鈉、鉀離子濃度的影響（±s，n＝10，mmol/L）

表4 對慢性腹瀉模型小鼠血清中鈉、鉀離子濃度的影響（±s，n＝10，mmol/L）

注：與模型對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與直鏈淀粉組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 鈉離子 鉀離子正常對照組164.86±1.84 5.41±0.43模型對照組 149.19±2.43△△ 4.62±0.09△△粳米米湯組 162.61±1.89＊＊ 5.03±0.25＊△直鏈淀粉組 163.01±1.59＊ 5.33±0.29＊＊支鏈淀粉組 162.21±1.37＊ 5.05±0.35＊△

2.5 新斯的明所致小腸運動亢進模型各組小腸推進率的比較

與模型對照組比較，粳米米湯、直鏈淀粉和支鏈淀粉對新斯的明所致小腸運動功能亢進均具拮抗作用（P＜0.05或P＜0.01），且以直鏈淀粉作用最強（表5）。

表5 對新斯的明所致小鼠小腸運動亢進的影響（±s，n＝10，%）

表5 對新斯的明所致小鼠小腸運動亢進的影響（±s，n＝10，%）

注：與模型對照組比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與直鏈淀粉組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組別 推進率正常對照組54.27±5.41模型對照組 86.39±5.61△△粳米米湯組 70.64±3.90＊＊△直鏈淀粉組 62.47±4.88＊＊支鏈淀粉組 79.01±6.55＊△

3 討論

番瀉葉是目前應用較廣泛的導瀉劑，其致瀉的主要有效成分為番瀉苷A及番瀉苷B。番瀉苷A、B能抑制腸細胞膜 Na＋－K＋－ATPase，阻礙鈉離子和鉀離子的轉運和吸收，使腸內滲透壓增高，保留大量水份，繼而刺激腸壁，反射性地使小腸和結腸蠕動增強，引起腹瀉［12］。本課題組在前期研究的基礎上，依次采用番瀉葉致小鼠急、慢性腹瀉模型及新斯的明致小鼠小腸運動亢進模型來評價粳米米湯的止瀉作用。

本研究結果表明，粳米米湯產生止瀉作用與降低番瀉葉劑所致急、慢性腹瀉小鼠腹瀉次數，使血清中鈉、鉀離子濃度升高及改善腸道吸收功能等有關。直鏈淀粉與支鏈淀粉為粳米米湯止瀉的主要物質基礎，在減少急性腹瀉小鼠的稀便次數、抑制新斯的明致小鼠小腸運動功能亢進及改善慢性脾虛腹瀉小鼠小腸推進功能、提高鉀離子濃度方面，直鏈淀粉更具優勢。本研究結果表明，粳米米湯的止瀉作用可能與抗膽堿作用，促進鈉、鉀離子吸收，改善腸道運動功能等有關，但其深入的分子機制還有待進一步實驗研究。另外，鑒于直鏈淀粉與支鏈淀粉的止瀉作用亦存在明顯差異，提示前期研究3種米湯止瀉效果不同的原因可能與其直鏈、支鏈淀粉含量及比例不同有關，本課題組將繼續關注二者不同含量配比的止瀉效果。

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