聚乙二醇干擾素與普通干擾素抗病毒治療的比較研究

劉素芬，馮愛東，李靜，張海叢，鄭歡偉，黃艷，李兵順，董正洪

（河北省石家莊市第五醫院傳染科，河北 石家莊 050021）

·臨床論著·

聚乙二醇干擾素與普通干擾素抗病毒治療的比較研究

劉素芬，馮愛東，李靜，張海叢，鄭歡偉，黃艷，李兵順，董正洪

（河北省石家莊市第五醫院傳染科，河北 石家莊 050021）

目的探討聚乙二醇干擾素α-2a對慢性乙型肝炎患者療效觀察。方法隨機選取76例慢性乙型肝炎患者，分為聚乙二醇干擾素α-2a組（38例）和普通干擾素組（38例），分別接受96周治療。觀察治療前后肝組織中乙肝病毒共價閉合環狀DNA（HBV cccDNA）檢出率及含量、肝組織和血清HBV DNA水平以及肝功能。結果治療96周，普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組HBV cccDNA檢出率和含量、肝組織和血清HBV DNA水平、丙氨酸氨基轉移酶，天門冬氨酸氨基轉移酶以及總膽紅素的含量都明顯降低（P＜0.05），聚乙二醇干擾素α-2a組的降低量更為顯著（P＜0.05）。結論聚乙二醇干擾素α-2a對慢性乙型肝炎患者肝組織中cccDNA的清除療效顯著優于普通干擾素。

慢性乙型肝炎；聚乙二醇干擾素α-2a；共價閉合環狀DNA

慢性乙型肝炎治療的重要目標是清除或持續抑制乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV），減輕肝臟損傷，從而延長患者的生存期[1]。乙型肝炎病毒共價閉合環狀DNA（cccDNA）是HBV基因組復制中間體mRNA和前基因組RNA的模板，是HBV持續感染的關鍵，也是各種藥物治療慢性乙型肝炎復發的關

鍵所在[2]。干擾素α-2a（IFN-α-2a）是目前臨床應用于抗肝炎病毒的重要藥物，但在臨床應用中存在半衰期短、易被腎臟清除、需要頻繁給藥以及用藥后出現“峰谷”效應等副作用[3]，并不適宜長期給藥。聚乙二醇干擾素α-2a（長效干擾素）同時具有抗病毒效應和免疫調節效應。因此，這種藥物可能比抗病毒藥更有效[4]。

為了更好的評價聚乙二醇干擾素α-2a治療慢性乙型肝炎患者的近、遠期療效及安全性，本研究對聚乙二醇干擾素α-2a與普通干擾素的臨床療效進行了比較。對慢性乙型肝炎患者肝組織進行活檢，同時采用血清學方法對肝組織中HBV cccDNA、肝組織和血清HBV DNA以及肝功能進行了臨床療效觀察，以期為臨床應用聚乙二醇干擾素α-2a治療慢性乙型肝炎患者提供實驗依據。

1 資料與方法

1.1病例資料及分組

76例慢性乙型肝炎患者，男59例，女17例，年齡（29～47）歲，平均38.1歲，均為河北省石家莊市第五醫院住院患者。本研究病例符合以下條件：①血清HBsAg持續陽性6個月以上；②血清HBV DNA連續2次陽性（HBV DNA＞103copies/ml）；③血清ALT超過參考值上限2～9倍；④無HAV、HCV、HDV、HEV和HIV重疊感染；⑤不伴有失代償期肝硬化；⑥無明顯的心、腦、腎病史，無精神病和糖尿病病史，無酗酒和吸毒史；⑦非妊娠或哺乳期婦女；⑧近6個月內未使用過抗病毒藥物及免疫調節藥；⑨血常規正常。

將76例患者隨機分為兩組，普通干擾素組與聚乙二醇干擾素α-2a組，每組38例。兩組患者年齡、性別、病情變化等臨床資料，差異無統計學意義，具有可比性。本研究遵循本院人體試驗的委員會所制定的倫理學標準并得到該委員會的批準，且取得受試對象或其親屬的知情同意。

1.2治療方法

普通干擾素組給予普通干擾素（α-IFN），300萬U，隔日1次肌肉注射。聚乙二醇干擾素α-2a組給予聚乙二醇干擾素α-2a（上海羅氏制藥有限公司產品)，180μg，每周1次皮下注射，療程均為96周。

1.3實驗方法

1.3.1肝組織學檢查普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后經局部麻醉，在彩色B超的定位和引導下應用活檢槍、18G肝穿針進行快速肝活檢，切取的肝組織送本院病理科進行病理檢查。

1.3.2血清標志物檢測方法HBV血清標志物HBsAg、HBeAg用酶聯免疫吸附試驗檢測。

1.3.3肝組織中HBV cccDNA含量檢測所有標本收集后采用HBV跨雙缺口的特異引物進行熒光PCR定量檢測進行肝內病毒DNA分析。引物由上海生工生物技術有限公司合成。序列為：5'-CGACC ACGGGGCGCACCTCTCTTTAC-3'；5'-CAAGGCACA GCTTGGAGGCTTGAACAG-3'。TaqMan熒光探針5'-TCTCCTCCCCAGCTCCTCCCAG-3'，檢測值用copies/mg表示，檢測結果進行統計學分析。

1.3.4肝組織和血清HBV DNA病毒檢測指標普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后抽取清晨空腹血液10 ml，分離血清，采用熒光實時定量PCR儀（美國ABI公司）進行血清HBV DNA檢測。檢測值用copies/ml表示，檢測下限為100 copies/ml，同時對檢測結果進行統計學分析。

1.3.5肝功能檢測普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組所有患者在治療前和治療后抽取血液，分離血清，采用美國BeckMan全自動生化分析儀檢測血清中丙氨酸氨基轉移酶（ALT），天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）和總膽紅素（TBIL）含量。

1.4統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行數據處理，計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩個樣本均數比較用t檢驗，兩樣本率比較用χ2檢驗或Fisher’s精確檢驗，組內時間的顯著性研究用方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1肝組織學檢查

治療前后的肝組織病理標本經10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，常規HE染色。治療前后的病理檢測圖如附圖所示，根據2000年中華醫學會病毒性肝炎防治方案組織病理學診斷標準，治療前肝組織炎癥活動分級為G2～G3，纖維化分期為S1～S2。治療后炎癥分級為G1～G2，纖維化分期為S1。聚乙二醇干擾素α-2a組和普通干擾素組治療后較治

療前炎癥、纖維化程度均下降。

附圖 治療前后肝組織病理檢測圖（HE染色×400）

2.2HBV血清標志物及HBV-DNA的變化

聚乙二醇干擾素α-2a組和普通干擾素組治療前基線情況見表1。在治療96周后，聚乙二醇干擾素α-2a組HBe Ag陽轉陰22例，陰轉率為95.7%，HBV-DNA陰轉率為100%；普通干擾素組HBeAg陽轉陰15例，陰轉率為68.2%，HBV-DNA陰轉率92.1%。聚乙二醇干擾素α-2a組的HBeAg陰轉率及HBV-DNA陰轉率均明顯高于普通干擾素組，差異有統計學意義（P＜0.05)。

表1 兩組治療前基線情況比較

2.3兩組患者肝組織中HBV cccDNA含量和檢出率的變化

隨著抗病毒時間的延長，聚乙二醇干擾素α-2a組中HBV cccDNA含量以及檢出率均顯著降低。48周后，與治療前比較，普通干擾素組治療后肝組織中HBV cccDNA的檢出率和含量也顯著降低（P＜0.05）；而聚乙二醇干擾素α-2a組肝組織中HBV cccDNA的檢出率和含量與普通干擾素組比較，下降更為明顯（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組治療48、96周后肝組織中HBV cccDNA含量和檢出率的變化

2.4肝組織和血清HBV DNA病毒檢測結果

經過96周給藥治療后，與治療前比較，普通干擾素組和聚乙二醇干擾素α-2a組的肝組織和血清HBV DNA含量均顯著降低（P＜0.05)；但與普通干擾素組比較，聚乙二醇干擾素α-2a組中肝組織和血清中HBV DNA的含量下降更多，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3。

2.5肝臟活組織檢查

聚乙二醇干擾素α-2a組中治療前肝組織HBe Ag陽性23例，治療48周時4例陽性，96周時1例陽性；普通干擾素組中HBeAg陽性22例，治療48周時，12例陽性，而96周時7例陽性。經過治療后，隨著患者HBV DNA對數值的降低，肝組織炎癥活動度（G）明顯降低，且患者肝組織纖維的活動度也相應降低。

表3 兩組治療不同時間后肝組織和血清HBV DNA結果

2.6治療前后血清肝功能變化

普通干擾素組患者在抗病毒治療48周后，轉氨酶水平較基線水平有明顯好轉（P＜0.05），同時，與治療前基線比較，聚乙二醇干擾素α-2a組經12周治療后，血清中ALT、AST和TbiL的含量均顯著降低（P＜0.05)；隨著抗病毒時間的延長，兩組的ALT復常率均有所增加，而聚乙二醇干擾素α-2a組明顯優于普通干擾素組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 兩組干擾素治療乙型肝炎患者肝功能情況

3 討論

蛋白質聚乙二醇修飾技術起源于上世紀70年代，1977年DAVIS等研究人員發現，蛋白質經PEG偶聯之后免疫原性極大降低，體內的循環半衰期增加，藥效學等性質都得到了明顯改善[5-6]。

聚乙二醇干擾素α-2a是40 kD聚乙二醇與普通干擾素α-2a結合形成的長效干擾素。2002年FDA批準瑞士羅氏公司的聚乙二醇干擾素α-2a上市。聚乙二醇分子的大小和支鏈結構決定藥物的吸收、分布和消除特點，在干擾素表面形成分子屏障，使其免受酶的分解，與器官、細胞的接觸時間延長，同時溶解度和穩定性增加，清除率減慢，聚乙二醇干擾素α-2a可使患者體內干擾素有效血藥濃度持續時間延長，每周給藥一次即可達到持續抑制病毒的目的[7-8]。聚乙二醇干擾素α-2a與肝細胞表面的Α受體結合，觸發細胞內復雜的信號轉導途徑并激活基因轉錄，調節多種生物信號，其中包括抑制感染細胞內的病毒復制和細胞增殖，有免疫調節作用[9-10]。因此，聚乙二醇干擾素α-2a可以持續有效地抗病毒，長期應用可能起到清除乙肝病毒，改善肝功能，改變肝病預后的作用。

研究表明，肝細胞內持續HBV感染是以核內HBV cccDNA的存在為特征，HBV cccDNA是HBV mRNA和前基因組RNA的合成模板，也是HBV持續感染的關鍵因素，因此抑制或清除HBV cccDNA是治療慢性乙肝的關鍵[11-12]。有研究顯示，拉米夫定對外周血HBV DNA清除效果顯著，但對細胞內的HBV cccDNA的清除幾乎無效[13]。口服單一抗病毒藥物，如恩替卡韋或阿德福韋酯，對肝組織內和血清中的HBV DNA清除效果顯著，而對肝組織內HBV cccDNA的清除作用微小[14]，因此尋找能夠清除肝組織內HBV cccDNA的有效藥物是治療慢性乙型肝炎的關鍵。

本研究通過肝組織活檢及血清檢測顯示，聚乙二

醇干擾素α-2a治療后肝組織中HBV cccDNA檢出率和含量均明顯降低，肝組織中和血清中HBV DNA含量同樣顯著降低；丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶和總膽紅素也顯著降低，提示兩種治療方法對慢性乙型肝炎的治療均有效，而聚乙二醇干擾素α-2a的治療效果比普通干擾素更加顯著。

本研究觀察到聚乙二醇干擾素α-2a對慢性乙型肝炎患者肝組織內HBV cccDNA的清除及肝功能的改善明顯優于普通干擾素，有較持久的療效，同時以其獨特的藥代動力學特點，簡單的每周1次給藥方式，可使患者具有更好的依從性。

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（張蕾 編輯）

Comparison of antiviral effect of Peginterferon with interferon

Su-fen LIU,Ai-dong FENG,Jing LI,Hai-cong ZHANG,Huan-wei ZHENG, Yan HUANG,Bing-shun LI,Zheng-hong DONG
(Department of Infectious Diseases,the Fifth Hospital of Shijiazhuang, Shijiazhuang,Hebei 050021,P.R.China)

【Objective】To explore the effect of Peginterferon alph-2a treatment on intrahepatic hepatitis B virus covalently closed circular DNA(cccDNA).【Methods】A total of 76 patients were randomly divided into control group treated with common interferon(38 patients)and Peginterferon alph-2a treatment group(38 patients).Both groups were treated for 96 weeks.The detection rate and content of intrahepatic hepatitis B virus(HBV)cccDNA were tested,the level of HBV DNA in hepatic tissue and serum was measured and the hepatic functions were observed.【Results】After treatment for 96 weeks,the detection rate and the level of intrahepatic HBV cccDNA,the level of HBV DNA in hepatic tissue and serum,ALT,AST and TBIL in serum were decreased significantly after therapy in both groups(P＜0.05).Importantly,the above parameters had more obvious declines after therapy in the Peginterferon alph-2a treatment group compared to the control group(P＜0.05).【Conclusions】The effect of Peginterferon alph-2a treatment on intrahepatic HBV cccDNA is predominant compared to the effect of common interferon.

chronic hepatitis B;Peginterferon alpha-2a;covalently closed circular DNA

1005-8982（2015）27-0045-05

R575.1；R453

A

2015-06-19