結核桿菌特異性抗原對結核病診斷價值研究

孫麗娜，孫京濤，田永全

1.廊坊市疾病預防控制中心，河北廊坊 065000；2.廊坊市人民醫院，河北廊坊 065000；3.廊坊市食品工程學校，河北廊坊 065000

結核病（Tuberculosis，TB）是一種結核分枝桿菌為病原菌的慢性傳染性疾病。TB 多見于青年人，可人際間接觸、體液、血液傳播，嚴重威脅人類生命健康，據WHO 統計年報表明全球每年約有20 億人感染結核分枝桿菌 （M.tuberculosis，MTB），TB年發病1000 萬人、死亡300 萬人[1-3]。目前，已有關于MTB 抗原血清學技術診斷TB 方法，具有操作簡單、快捷、所需器材少等優點，在結核病快速篩查、診斷中具有無可比擬的技術優勢，應用前景較好。該研究在2013年2月—2014年5月采用ELISA，評價結核桿菌特異性抗原單一、聯合診斷結核病效用，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年2月—2014年5月，該地疾病預防控制中心結核病防治所提供實驗用血清、陽性標準品血清、陰性標準品血清。陽性血清人群100例，其中男61例、女39例，年齡22～71 歲、平均（44.4±6.8）歲，以不同程度低熱、消瘦、乏力為癥狀表現，咳血61例，肺結核91例、支氣管結核9例。陰性對照組血清均取自100例健康體檢者，其中男60例、女40例，年齡22～70 歲、平均（46.8±10.5）歲。抗體檢測采用美MP 公司產IgG 檢測試劑盒檢測。

1.2 方法

1.2.1 實驗 確定最佳ELISA 條件：①采用棋盤滴定法，確定最佳抗原包被濃度和血清稀釋度[4]；②分別用以上計算所得的最佳抗 原濃度包被ELISA 板，確定CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 四種結核分枝桿菌特異性抗原二抗稀釋度；③以①-②確定的各類結核分枝桿菌特異性抗原最佳ELISA 條件，檢測100 份陽性血清、100 份陰性血清。

1.2.2 檢測性能評估 整理各抗原檢測結果，整理抗原組合列表，預測聯合診斷性能，選擇最佳抗原混合，比較各組合診斷效率，并進行重復性、精密度實驗，評價方法穩定性。

1.3 統計方法

以SPSS18.0 軟件包處理所獲數據資料，以n（%）表示計數資料，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05 表示差異有統計學意義，計算各抗原組合診斷Cut-off 值。

2 結果

2.1 單一蛋白診斷

單一蛋白診斷，38kDa 靈敏度最高，其次為CFP10-ESAT6，再次為HsPX，最次為Ag85B，38kDa 靈敏度高于Ag85B，差異有統計學意義（χ2=10.86，P＜0.05）；Ag85B 特異度最高，其次為CFP10-ESAT6，再次為HspX，最次為38kDa，但差異無統計學意義（χ2=0.31，P＞0.05）；38kDa、HspX 符合率最高，其次為CFP10-ESAT6，差異無統計學意義（χ2=3.02，P＞0.05），見表1。

表3 38kDa＋CE＋HspX 實際診斷[n(%)]

表1 四種蛋白單一診斷效用對比[n(%)]

2.2 聯合蛋白診斷預測

篩選Youden 指 數＞0.5 組合主要包括：38KDa＋CE、38kDa＋HspX、38kDa＋CE＋HspX，靈敏度（χ2=1.52）、特異度（χ2=1.52）、符合率（χ2=0.76）均在72%以上，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 三種聯合蛋白診斷效率較好蛋白組合[n(%)]

2.3 ELISA 檢驗與重復性實驗

38kDa＋CE＋HspX 聯合檢查Youden 指數最高為0.445，擬作為診斷組合。

2.4 實際診斷

以38kDa＋CE＋HspX 組合診斷2014年1月—2014年10月，收治的疑似肺結核患者，結果顯示任意蛋白DTH 陽性診斷肺結核敏感度達80.39%，特異度18.99%，可滿足需要，見表3。

3 討論

目前，TB 診斷主要方法包括痰涂片抗酸染色法、 痰結核菌培養法，但前者假陰性與假陽性率高，后者耗時長、操作相對繁瑣，不利于大規模推廣應用，兩者均不適用于TB 潛伏期患者篩查、診斷[5]。

CFP10-ESAT6、38kDa、Ag85B、HspX 是目前發現時間較早、研究時間相對較長、提取較方便的四種結核桿菌特異性抗原，部分已被應用于臨床診斷[6]。研究結果顯示，四種蛋白單一或聯合均可應用于TB 診斷，靈敏度略高于痰涂片，不同抗原靈敏度、特異度、符合率存在一定差異，38kDa 靈敏度、符合率均居首位。值得注意的是，三類組合中均有38KDa，這與38kDa 靈敏度、符合率均居首位有關。ELISA 檢驗與重復性實驗結果顯示，三種組合診斷效用不受混合方式影響，且穩定性較好，其中38kDa＋CE＋HspX 聯合檢查Youden 指數最高為0.445，可作為聯合診斷組合。實測結果顯示，以任意蛋白DTH 陽性作為診斷標準，診斷TB敏感度達80.39%、特異度81.01%、符合率80.077%，高于痰涂片、PPD 皮試、X 線診斷。此外還應注意的是，聯合診斷與X 線片結合空洞影一致性較好，敏感度達到97.06%，有助于提高X 線應用水平，與Davidow 研究發現一致[7]。

結核桿菌特異性抗原診斷結核病是當前研究熱點，如Deng[8]等以38ku＋16ku＋LAM 共同檢測MTB，敏感度高達96.1%，但尚無診斷TB 結果。目前，許多學者致力于構建融合蛋白，進行血清學檢測，彌補單一蛋白無法檢測所有抗體的弊端，也是今后該領域研究的重要發展方向。

[1]王蕓.云南省2000、2010年結核病流行病學抽樣調查分析[J].預防醫學論壇，2014，20(1):11-19.

[2]馬均.結核病[M].北京:人民衛生出版社，2006.

[3]全國結核病流行病學抽樣調查技術指導組.第四次全國結核病流行病學抽樣調查報告[J].中華結核和呼吸雜志,2002,25（1）:3-7.

[4]中國防癆協會基礎專業委員會.結核病診斷實驗室檢驗規程[M].北京:中國教育文化出版社，2006.

[5]王橋霞.結核桿菌特異性抗原對結核病診斷價值研究[J].中國熱帶醫學，2009，9(11):2085-2087.

[6]聶恒.結核分枝桿菌特異性蛋白抗原研究進展及其應用策略探討[J].中國病原生物學雜志，2014，9(2):180-181.

[7]孫艷.肺結核患者涂陽率及其影響因素的研究[J].臨床肺科雜志，2012，17(9):1619-1621.

[8]Deng S，Yuan Y，Xia J，et al.Clinical utility of combination of lipoarb inomannan，38-kDa antigens as a diagonsis tool for tuberculosis[J].Diagn Microbiol Infect Dis，2011，71(1):46-50.