凝膠法檢測新生兒溶血病免疫性抗體的臨床價值分析

王申

河南省安陽市婦幼保健院兒內(nèi)三科，河南安陽 455000

新生兒溶血病為一種免疫性疾病，主要由母嬰血型不合時母體血清中IgG 抗體經(jīng)由胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，致使胎兒紅細(xì)胞被破壞所引發(fā)[1]。新生兒溶血癥不會對母體來造成任何影響，但胎兒會出現(xiàn)嚴(yán)重貧血、心力衰竭等問題，嚴(yán)重時甚至導(dǎo)致死亡。存活患兒也極易出現(xiàn)運(yùn)動能力障礙或智力發(fā)育低下等后遺癥[2]?；诖?，積極診斷新生兒溶血癥意義重大。試管法為臨床傳統(tǒng)檢測方法，通過直接、間接抗人球蛋白試驗(yàn)及放散試驗(yàn)測定患兒免疫性抗體，但該方法所需時間長、步驟繁瑣，且結(jié)果可重復(fù)性差，容易出現(xiàn)假陰性情況。微柱凝膠法為新型檢測方法，有效改善了試管法缺陷，目前已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用。整群選取2011年6月—2014年6月該院85例溶血病疑似新生兒進(jìn)行研究，探析凝膠法在新生兒溶血病免疫性抗體檢測中臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以該院2011年6月—2014年6月所收治85例溶血病疑似新生兒進(jìn)行研究，其中男48例，女37例，出生時間在4~10 d，平均(8.2±1.3)d。臨床表現(xiàn)：32例為高膽紅素血癥、20例為血紅蛋白降低、16例為新生兒黃疸，14例為貧血、3例肝脾腫大。

1.2 檢測方法

1.2.1 對照組 試管法：①直接抗人球蛋白試驗(yàn)：生理鹽水洗滌新生兒紅細(xì)胞2 次后配制為濃度5%紅細(xì)胞鹽水懸液。取1 滴配制好的紅細(xì)胞鹽水懸液于干凈試管中，加入抗人球蛋白血清，混合均勻后離心1 min，觀察凝集反應(yīng)。②間接抗人球蛋白試驗(yàn)：取3支干凈試管，均放入2 滴新生兒血清及1 滴配制好的5%紅細(xì)胞鹽水懸液，由A、B、O 型血液標(biāo)本制成。發(fā)生凝集表示出存在相應(yīng)抗體。若未凝集，加入4 滴抗IgG 的抗人球蛋白血清，混合均勻后離心，時間為1 min，觀察凝集反應(yīng)。③放散試驗(yàn)。新生兒紅細(xì)胞洗滌3 次，加入抗A、B 分型血清，混合均勻后進(jìn)行離心，將上清液去掉后再洗滌3 次，加入一半體積生理鹽水。之后放入37℃水浴中放散。將放散液與2%的抗人球蛋白混合，進(jìn)行離心，觀察結(jié)果。

1.2.2 觀察組 微柱凝膠法：首先對微柱凝膠試劑卡做標(biāo)記，取50 μL 患兒血清或紅細(xì)胞放散液，分別加入50 μL 配制好的A、B、O 不同血型、血液標(biāo)本所制成濃度為0.5%的紅細(xì)胞鹽水懸液，混合均勻。離心1 min 后取出，肉眼觀察結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩種檢測方法：①直接抗體、游離抗體、放散試驗(yàn)檢出率；②特異性抗體陽性率，包括IgG 抗體、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS17.0 軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用百分率（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測HDN 免疫性抗體的比較

觀察組直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性率為81.2%、抗體游離試驗(yàn)陽性率為87.1%、抗體放散試驗(yàn)陽性率為91.8%，符合率為91.8%；對照組對應(yīng)陽性率分別為64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，觀察組陽性率顯著高于對照組，對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），詳細(xì)見表1。

表1 兩種方法檢測HDN 免疫性抗體比較結(jié)果[n(%)]

2.2 HDN 免疫性抗體的特異性檢測

兩種檢測方法對免疫性IgG 抗體、IgG 抗A、IgG 抗B、IgG抗D、IgG 抗E、IgG 抗cE 陽性率接近，比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），詳細(xì)見表2。

表2 HDN 免疫性抗體特異性檢測結(jié)果[n(%)]

3 討論

HDN 是由母嬰血型不合所引起免疫性溶血性疾病，人體紅細(xì)胞表面上分布有多種抗原系統(tǒng)，很多可引起溶血病，以ABO血型不合作為常見，Rh 血型系統(tǒng)比較少見[3-4]。一般情況下，母體為O 型血、父體為非O 型血最容易引發(fā)溶血病，原因在于O 型血具有更高效價抗A、抗B 的IgG 抗體[5]。

臨床上常用直接、 間接抗人球蛋白試驗(yàn)及放散試驗(yàn)對疑似新生兒溶血病病例進(jìn)行檢測，其中直接抗人球蛋白試驗(yàn)可檢測出紅細(xì)胞是否出現(xiàn)不完全致敏，而間接抗人球蛋白試驗(yàn)則可檢測血清中是否存在抗體并明確抗體具體類型，放散試驗(yàn)則主要檢測紅細(xì)胞上抗原類型[6-7]。但該種檢測方法檢測時步驟復(fù)雜，且容易受到外界因素干擾，進(jìn)而導(dǎo)致偏差，引發(fā)誤診。本組將試管法與凝膠法進(jìn)行對比，結(jié)果證實(shí)，凝膠法抗人球蛋白試驗(yàn)陽性率、抗體游離試驗(yàn)陽性率及符合率分別為81.2%、87.1%、91.8%、91.8%，顯著高于對照組64.7%、70.6%、75.3%、75.3%，HDN 免疫性抗體特異性檢出率則接近。試管法敏感性容易受離心速度及時間、血清與紅細(xì)胞比例等因素影響，操作步驟繁多，耗時較長，且需對紅細(xì)胞進(jìn)行反復(fù)洗滌?？乖涂贵w親和力弱，洗滌次數(shù)太多容易大致抗體脫落而引發(fā)假陰性情況[8]，因此符合率僅為75.3%。微柱凝膠法為一種新型血清檢測方法，將凝膠分子篩技術(shù)與抗原抗體反應(yīng)結(jié)合起來，血清檢測過程中，游離紅細(xì)胞可穿過凝膠柱，但抗原抗體發(fā)生反應(yīng)后紅細(xì)胞會發(fā)生凝集而無法穿過分子篩，從而懸浮在凝膠柱上，游離紅細(xì)胞與凝集紅細(xì)胞就會區(qū)分開來[9]。此外，微柱凝膠法的應(yīng)用可將血型抗體及抗人球蛋白提前放進(jìn)去，不需逐次加入，因此檢測過程得到大幅簡化[10]，操作更簡單，人為誤差和干擾也因此得到控制，優(yōu)勢得到凸顯，這是其符合率高達(dá)91.8%的原理基礎(chǔ)。再有，其通過調(diào)節(jié)凝膠濃度對凝膠間隙進(jìn)行控制，讓細(xì)胞在離心力作用下發(fā)生凝集而分為上下2層，區(qū)分陽性與陰性。與試管法相比，不用頻繁洗滌紅細(xì)胞，易于標(biāo)準(zhǔn)化，影響因素少，靈敏度得以提高。有臨床研究單獨(dú)對Rh 血型免疫性抗體進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示單一抗體產(chǎn)生頻率抗E 最高，抗e 最低，混合抗體中，抗Ce 最高，抗cD 最低。且女性免疫性抗體陽性率明顯高于男性，且被檢者中以孕產(chǎn)婦居多，多數(shù)存在反復(fù)妊娠、流產(chǎn)史，說明母嬰血型不合妊娠免疫同樣也是導(dǎo)致Rh血型免疫性抗體重要原因。另外，也有研究提出微柱凝膠法敏感性偏高，對于血清中含有高效價冷凝集素及自身抗體患者，抗體篩查試驗(yàn)可能因此導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。為確保臨床輸血有效性、安全性，可聯(lián)合凝聚胺法、酶法等予以確認(rèn)。

綜上，凝膠法檢測新生兒溶血病免疫性抗體所受影響因素少，敏感性高，操作更簡單，具有較高臨床應(yīng)用價值。

[1]卜祥茂,梁弘剛,宋金蓮，等.新生兒ABO 溶血病實(shí)驗(yàn)診斷的方法學(xué)探討[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2013,17(12):2205-2207.

[2]曾德理,石明芳.3 種不同劑量放散液檢測新生兒ABO 溶血病的結(jié)果分析[J].廣西醫(yī)學(xué),2011,33(11):1447-1448.

[3]張勇萍,蘇小花,楊世明，等.微柱凝膠法檢測Rh 血型免疫性抗體的分析[J].臨床血液學(xué)雜志：輸血與檢驗(yàn)版，2010,23(4):449-450,453.

[4]楊世明,張勇萍,安寧，等.新生兒溶血病紅細(xì)胞血型免疫性抗體的特異性分析[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2011,27(10):1130-1131.

[5]譚慶芬.914例不規(guī)則抗體篩查結(jié)果分析及臨床意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2009,38(12):1445-1445.

[6]張春燕,李繼紅,趙素珍，等.檢出免疫性抗體的RhD 陰性獻(xiàn)血者基因型分析[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2012,20(3):753-756.

[7]周益強(qiáng),肖倩,馮尚克，等.IgG 亞型與新生兒ABO 溶血病的相關(guān)性[J].廣東醫(yī)學(xué),2011,32(2):182-184.

[8]劉穎,王亞娟,林影，等.新生兒Rh 血型不合溶血病90例臨床分析[J].中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,17(9):628-631.

[9]李偉生,楊輔直,陳曉玲，等.新生兒ABO 溶血病早期診治及轉(zhuǎn)歸分析[J].廣東醫(yī)學(xué),2012,33(10):1429-1430.

[10]高翔羽,黃歡,李立達(dá)，等.新生兒MN 溶血病一例并21例文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[J].中華兒科雜志,2009,47(9):648-652.