梅毒患者血清IL－33和IL－35與梅毒細胞免疫的相關性

張勝佳田洪青李中偉鄭榮濤侯建玲李富容

·論著·

梅毒患者血清IL－33和IL－35與梅毒細胞免疫的相關性

張勝佳1田洪青2?李中偉2鄭榮濤2侯建玲2李富容2

目的: 檢測梅毒患者血清IL－33和IL－35的表達。方法: 采用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測梅毒患者和正常對照血清IL－33和IL－35的表達。結果: 梅毒患者血清IL－33和IL－35的表達與對照比較，差異均無統計學意義(P＝0.638和P＝0.122)。一期梅毒、二期梅毒、潛伏梅毒間IL－33和IL－35比較差異亦無統計學意義(P＝0.116，P＝0.132)。結論: 梅毒患者外周血清IL－33和IL－35可能與梅毒的細胞免疫無相關性。

梅毒； 細胞免疫； 白介素33； 白介素35

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum，TP)引起的一種慢性性傳播疾病，幾乎可侵犯全身各個器官，產生多種多樣的癥狀或體征、功能障礙、組織破壞乃至死亡。梅毒患者的細胞免疫抑制－Th1/Th2反應的失衡(Th1反應向Th2反應漂移)和CD4CD25調節性T細胞(Treg)高度表達是造成機體不能有效清除梅毒螺旋體和病情遷延發展的原因之一。1－3IL－33是IL－1超家族的成員，其特異性受體是ST2。IL－33/ ST2通路是Th2反應的活化因子，誘導Th2型細胞因子的產生，參與Th2型細胞因子介導的炎癥反應。4IL－35是IL－12家族成員，由CD4CD25調節性T細胞(Treg)產生，是Treg細胞發揮免疫抑制作用所必需的細胞因子。5IL－35還可以抑制Th17的分化和IL－17的合成而Th17以及它的細胞因子IL－17在梅毒的發病機制中發揮著重要作用。6，7因此我們想通過檢測梅毒患者和正常對照組外周血中IL－33和IL－35表達水平，來探討IL－33、IL－35是否參與梅毒的細胞免疫抑制。

1 資料與方法

1.1 研究對象 研究對象均為2013年4月至2014年3月就診于我院性病門診的梅毒初診患者。梅毒入選標準:未經驅梅治療；TRUST和TPPA試驗均陽性，或TP－PCR陽性。對照入選標準:無梅毒相關臨床表現；未經驅梅治療；TRUST和TPPA試驗均陰性；可疑患者如果行TP－PCR檢測，結果為陰性。梅毒和對照的排除標準:①HIV抗體檢測陽性；②患有自身免疫性疾病或其他感染性疾病者；③妊娠、哺乳期婦女。

入選患者180例，但由于標本試驗中蛋白質降解問題，納入統計的患者數:IL－33為153例、IL－35為133例。IL－33病例組:男71例，女82例；年齡16～86歲(平均32.4歲)；一期梅毒15例，二期梅毒32例，早期潛伏梅毒(病期在2年以內)64例，晚期潛伏梅毒(病期大于2年)42例；有癥狀梅毒組包括一期和二期梅毒，無癥狀梅毒組包括早期和晚期潛伏梅毒。IL－35病例組:男65例，女68例；年齡15～86歲(平均32.7歲)；一期梅毒12例，二期梅毒26例，早

期潛伏梅毒59例，晚期潛伏梅毒36例。對照組入選180例，由于蛋白質降解的問題最終納入統計的例數:IL－33為162例、IL－35為156例。對照組IL－33:男93例、女69例，年齡17～69歲(平均33.2歲)；對照組IL－35:男85例，女71例，年齡18～69歲(平均33.7歲)。

1.2 實驗方法

1.2.1 主要儀器和試劑 IL－33、IL－35 ELISA試劑盒(上海嚴謹生物科技有限公司)；酶標分析儀(北京普朗新技術有限公司)；微孔振蕩器；電熱恒溫培養箱；TRUST和TPPA試劑盒。

1.2.2 標本采集 抽取患者和對照組靜脈血2 mL，收集于無菌干燥試劑管中，靜置、分離血清后置于－80℃保存備用。

1.2.3 TRUST、TPPA、HIV檢測，操作均嚴格按照操作規則進行。

1.2.4 IL－33、IL－35水平檢測 采用雙抗體夾心ELISA方法，嚴格按照說明書步驟進行操作(標準品的稀釋、加樣、溫育、配液、洗滌、加酶、溫育、洗滌、顯色、終止、測定)。在450 nm波長按順序測量出各標本的吸光度(OD值)。用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0軟件包對數據進行統計描述和分析。非正態分布的計量資料采用中位數(P50)、百分位數(P25，P75)描述；兩組獨立非正態分布資料比較采用Mann－Whitney檢驗，3組及以上非正態分布資料比較采用Kruskal－Wallis檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IL－33和IL－35在對照組和病例組的檢測結果(表1)，Mann－Whitney檢驗結果顯示 IL－33對照組(162例)和病例組(153例)的濃度差異無統計學意義(P＞0.05)，IL－35對照組(156例)和病例組(133例)的濃度差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.2 IL－33、IL－35在對照組、一期梅毒組、二期梅毒組、早期潛伏梅毒組、晚期潛伏梅毒組的檢測結果(表2)，Kruskal－Wallis檢驗顯示5組間差異無統計學意義(P＞0.05)。

2.3 IL－33、IL－35在對照組、有癥狀梅毒組和無癥狀梅毒組的檢測結果(表3)，Kruskal－Wallis檢驗結果顯示，差異無統計學意義(P＞0.05)。

表1 IL－33和IL－35在對照組與病例組的檢測結果

表2 IL－33和IL－35在各期梅毒的檢測結果

表3 IL－33和IL－35在有/無癥狀梅毒的檢測結果

3 討論

IL－33是2005年發現的白介素1的家族新成員，其基因序列和結構同IL－1β、IL－18相似。人IL－33的基因定位于9號染色體(9p24.1)，IL－33以前體蛋白的形式分泌，經一系列加工剪切形成具有活性的成熟蛋白，IL－33發揮作用主要是通過特異性受體－ST2，ST2在1989年被發現，其基因定位于人2號染色體(2q12)，Th2細胞表面穩定表達。IL－33是Th2細胞的活化因子，參與炎癥和免疫反應的發生。IL－33/ST2通路在炎癥性疾病、自身免疫性疾病、感染性疾病中有著重要作用。8－11隨著人們對IL－33研究的深入，人們對IL－33/ST2通路在感染性疾病中發揮的作用也越來越感興趣。梅毒的發病機制錯綜復雜，細胞免疫機制一直是研究的熱點，細胞免疫異常是梅毒發病和病程遷延的主要原因之一。Th1/Th2反應的失衡、抑制性T細胞、樹突狀細胞、CD4＋和CD8＋T細胞、Th17和Th22細胞亞群、細胞因子是最近幾年梅毒發病機制研究的主要領域。尤其是1992年Fitzger

ard學者提出了梅毒發病機制中Th1/Th2反應的失衡學說:隨著梅毒病程的遷延，梅毒的發病以Th1型反應介導為主逐漸向Th2型反應介導為主的反應遷移轉變，理論上梅毒螺旋體的清除應以Th1細胞免疫為主，而向Th2方向的漂移則抑制了機體的細胞免疫，造成梅毒病程的遷延。1

IL－33/ST2通路可誘導Th2型細胞因子的產生，參與Th2介導的反應。鑒于梅毒細胞免疫機制和IL－33、Th2型反應有著密切的關聯，我們檢測了梅毒患者和正常對照的血清IL－33的表達水平，探索IL－33是否與梅毒的細胞內免疫機制有關，盡管研究結果顯示梅毒患者IL－33、IL－35的血清濃度低于對照組，但無統計學差異，各期梅毒之間、有癥狀組與無癥狀組之間也無統計學差異。

IL－35是新近發現的一種新型抑制性細胞因子，屬于IL－12家族成員，是由 EB病毒誘導基因(EBI13)和IL－12的p35亞基組成的異二聚體，定位于人第17號染色體，IL－35由Treg細胞特異性產生，是Treg細胞發揮抑制作用所必須的細胞因子，能有效地抑制效應性T細胞的增值、Th17的分化以及IL－17的合成，有望成為調節Treg細胞活性的新型靶分子。IL－35在自身免疫性疾病、調節病原微生物引起的免疫應答、腫瘤抑制、誘導機體免疫耐受形成等方面發揮著重要作用。13－15梅毒患者Treg細胞明顯增高，抑制細胞免疫功能，削弱了機體對梅毒螺旋體的清除和殺傷。16IL－35是Treg細胞發揮免疫抑制作用的關鍵因子。此外，IL－35還可以抑制Th17反應和IL－17的合成，而Th17以及IL－17在梅毒外周血中的高度表達，在梅毒發病過程中發揮著重要作用。7因此我們檢測了梅毒與對照組的血清IL－35的表達，但是同樣無統計學差異，各期梅毒之間、有癥狀組與無癥狀組之間也無統計學差異。

出現以上結果可能的原因如下:1.研究例數少，進一步擴大樣本或者進一步分層研究，可能會出現不同的結果。由于病例所限，本研究未納入晚期有癥狀梅毒，可能也對結果造成一定影響；2.IL－33和IL－35未參與梅毒的細胞免疫抑制。IL－33未參與Th1/Th2失衡過程，向Th2方向的漂移存在其他的機制。IL－35作為Treg細胞發揮抑制作用的關鍵性細胞因子未參與梅毒細胞免疫功能抑制過程，高度表達的Treg細胞造成的梅毒細胞免疫抑制并未通過IL－35產生作用，可能通過其他細胞因子或機制產生作用。

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(收稿:2014－12－29 修回:2015－01－25)

The relevance of serum levels of IL－33 and IL－35 with profeta’s immunity in the patients with syphilis

ZHANG Sheng-jia，TIAN Hong-qing，LI Zhong-wei，et al.School of Medical and Life Science，Ji’nan University，250062

Objective:To detect the levels of IL－33 and IL－35 in the patients with syphilis.Methods: The levels of IL－33 and IL－35 in the patients and healthy controls were detected with ELISA.Results:There was no significant difference in the levels of IL－33 and IL－35 between the patients and controls(P＝0.63 and P＝0.122).There were no significant difference in the levels of IL－33 and IL－35 among primary syphilis，secondary syphilis and latent syphilis.Conclusion:IL－33 and IL－35 may not correlate with the cellular immunity in the patients with syphylis.

syphilis；cellular immunity interleukin；IL－33；IL－35

山東省自然科學基金(編號:ZR2013HM076)

1濟南大學山東省醫學科學院醫學與生命科學學院2山東省皮膚病性病防治研究所，濟南，250022

?通信作者