丹參對人口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9表達的影響

李 育

(重慶市開縣人民醫(yī)院口腔科，重慶開縣 405400)

口腔黏膜白斑病(OLK)是以口腔黏膜過度角化進而形成灰白色或乳白色斑狀病變的一種常見疾病，好發(fā)于頰、舌、唇的黏膜上，有時也可發(fā)生在硬腭和牙齦。患者早期通常并無明顯自覺癥狀，表現(xiàn)為大小不一、光滑、稍突出黏膜表面的乳白色斑，隨著時間的延長可逐漸增大變厚、變粗糙。其發(fā)病原因和機制尚不明確，但近年來的研究認為與嗜煙、嗜酒、局部有長期的機械性刺激(如不適合的假牙、殘留牙冠牙根等)以及維生素A缺乏、內(nèi)分泌功能紊亂、霉菌感染等導致口腔黏膜上皮正常角化等有關(guān)［1-3］。目前OLK已成為公認的癌前病變之一，其癌變率約為3% ～5%，而常用的手術(shù)、冷凍或口服維生素治療雖然可以明顯改善患者的臨床癥狀，但并不能作為控制其癌變的有效手段。大量的研究表明［4-5］，丹參中的有效成分具有顯著的抗癌作用，因此我院自2013年開始給予OLK患者口服丹參片治療，通過比較治療前后口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9水平的變化對丹參在控制患者癌變進展的有效性進行探討。相關(guān)研究內(nèi)容和結(jié)果報道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2013年2月—2014年3月我院收治的112例口腔黏膜白斑患者以及100例同期口腔檢查正常者為研究對象，分別列為病理組和正常組。病理組112例患者均由病理檢驗確診，并按醫(yī)囑進行治療，自愿參與本次研究、完成隨訪和臨床檢測，排除伴有其他腫瘤以及嚴重內(nèi)科疾病患者。其中男性62例，女性50例，年齡20～58歲，平均年齡(43.48±6.72)歲，病程1～12個月，平均病程(5.12±3.05)個月，其中均質(zhì)型82例，顆粒型17例，其他類型13例;正常組100例患者中，男性57例，女性43例，年齡18～60歲，平均年齡(46.12±7.15)歲。兩組患者在性別、年齡方面并無明顯差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 研究方法 病理組患者確診后給予口服丹參片治療，一次3片，一天3次，連續(xù)治療2個月，采用免疫組織化學方法檢測正常組口腔檢查當天以及病理組患者治療前、治療2個月后、結(jié)束治療1個月后和結(jié)束治療3個月后口腔黏膜白斑中MMP-2及MMP-9表達，并對結(jié)果進行比較分析。病理組患者于治療2個月后對其臨床療效進行評價。臨床療效評價標準［6］:患者口腔黏膜白斑以及臨床癥狀完全消失為痊愈;患者口腔黏膜白斑面積減小≥2/3，且臨床癥狀顯著改善為顯效;患者口腔黏膜白斑面積減小1/3～2/3為有效;若患者口腔黏膜白斑面積減小＜1/3或無明顯變化者為無效。

1.2.2 檢測方法 病理組患者去病變處口腔黏膜，正常組患者則取左側(cè)口腔頰黏膜，所取組織黏膜均交由本院病理實驗室進行檢測。將采集的患者口腔黏膜組織用10%福爾馬林液固定，經(jīng)Leica EG116包埋機(德國徠卡公司生產(chǎn))石蠟包埋后切片，采用3%雙氧水孵育10 min后，運用1%檸檬酸高壓抗原熱修復2 min，再經(jīng)5%正常牛血清孵育15 min后滴加一抗，在室溫下孵育60 min，滴加Max Vision試劑(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn))繼續(xù)室溫孵育20 min，給予DAB顯色，蘇木精染色，脫水后封片。所有組織切片均由固定兩名病理科主治醫(yī)師運用Olympus-206024型顯微鏡(日本Olympus公司生產(chǎn))下進行獨立雙盲觀察，判斷組織中MMP-2及MMP-9的陽性表達情況。每張切片隨機選擇10個400倍視野計算細胞總數(shù)和細胞陽性表達率，其染色陽性判斷標準為細胞漿或胞膜呈現(xiàn)棕黃至棕褐色，并按半定量方法對其鏡下表現(xiàn)進行評分，根據(jù)評分和細胞陽性表達率對MMP-2及MMP-9的表達強度進行判斷。細胞著色評分標準［7］:0分為無著色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色;細胞陽性率評分標準:1% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。細胞著色評分與細胞陽性率評分結(jié)果相加為總分，總分0～2分為陰性表達，≥3分則為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 將所得結(jié)果錄入SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學處理及分析。其中計量資料采用均數(shù)±標準差(±s)表示，兩組間的比較采用成組t檢驗;其它計數(shù)類資料，采用例數(shù)和百分比表示，兩組間的比較采用χ2檢驗，各時間點間的比較則為配對卡方檢驗。以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者組織中MMP-2及MMP-9表達情況比較將正常組人口腔檢查當天口腔黏膜組織以及病理組患者治療前、治療2個月后、結(jié)束治療1個月后和結(jié)束治療3個月后口腔黏膜白斑中的MMP-2及MMP-9表達情況進行比較，其結(jié)果見表1。

表1結(jié)果顯示，病理組患者治療前其病灶組織MMP-2和MMP-9陽性表達分別為67.9%和58.9%，相比正常組明顯增加(P＜0.05);而病理組患者治療2個月后其病灶組織MMP-2和MMP-9陽性表達均較治療前有明顯降低，分別為54.5%和45.5%，差異具有統(tǒng)計學意義(P ＜0.05);結(jié)束治療后隨訪病理組患者口腔黏膜MMP-2和MMP-9陽性表達相比治療2個月后有所降低，但差異并無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

表1 兩組患者組織中MMP-2及MMP-9表達情況比較/例

2.2 病理組患者治療后臨床療效比較 對病理組患者治療2個月后、結(jié)束治療1個月以及結(jié)束治療3個月的臨床療效進行比較分析，其結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，患者治療2個月后其臨床總有效率可達97.3%，較結(jié)束治療后1個月有明顯增長(P＜0.05)，而患者在結(jié)束治療3個月后回訪其臨床治療效果相比結(jié)束治療1個月并無明顯變化(P＞0.05)。

2.3 治療結(jié)束后一年隨訪結(jié)果 112例患者治療結(jié)束后一年隨訪人數(shù)104例，其中5例失聯(lián)，3例因其他非腫瘤疾病死亡。經(jīng)調(diào)查顯示，104例患者治療結(jié)束一年后僅有2例患者病發(fā)口腔頰癌，癌變率為1.9%，皆因口腔黏膜白斑癌變所致。

3 討論

基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinase，MMP)是一組對鈣離子、鋅離子等金屬離子具有依賴性內(nèi)肽酶，因其幾乎能降解細胞外基質(zhì)中的各種蛋白成分，并能對腫瘤細胞侵襲的組織學屏障形成破壞，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中具有關(guān)鍵性的作用，由此MMP被認為是腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移過程中主要的蛋白水解酶，同時也是目前臨床研究認為與腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切的一類蛋白水解酶，近年來已成為相關(guān)腫瘤疾病侵襲、轉(zhuǎn)移等研究的熱點。MMPs家族現(xiàn)已分離鑒別出26個成員，編號分別為MMP1～26。根據(jù)作用底物以及片斷同源性的不同被分為膠原酶、明膠酶、基質(zhì)降解素、基質(zhì)溶解素、furin活化的 MMP和其他分泌型 MMP。MMP-2和MMP-9則是膠原酶的成員，也是目前臨床對于MMPs與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移研究較為集中的兩項指標［7-9］。

腫瘤的侵襲的轉(zhuǎn)移過程實際是癌細胞脫離原發(fā)癌組織后逐漸向其他組織侵襲和轉(zhuǎn)移的過程，在此過程中癌細胞須穿過細胞外基質(zhì)、血管壁基底膜等的組織學屏障，其中基底膜中的Ⅳ型膠原是具有獨特螺旋結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)，大部分的蛋白酶并無法對Ⅳ型膠原起到降解作用，而作為膠原酶的MMP-2和MMP-9則是目前研究認為唯一能降解細胞外機制和基底膜中IV型膠原三螺旋結(jié)構(gòu)的酶，并可對基底膜的完整性起到破壞作用。因此MMP-2和MMP-9在組織中的表達是對組織結(jié)構(gòu)完整性以及是否具有屏障作用的判斷指標。

表2 病理組112例患者治療后臨床療效比較/例(%)

口腔黏膜白斑是公認的癌前病變，其癌變率約在3%～5%左右，正常口腔黏膜組織發(fā)展到口腔黏膜白斑進而發(fā)生癌變是口腔腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要途徑，其發(fā)病機制尚不明確，臨床大多采用手術(shù)、冷凍或口服維生素等治療改善臨床癥狀，但對于控制其癌變的作用卻不盡人意［10-11］。近年來的大量研究結(jié)果表明，丹參中的丹參酮可對多種腫瘤細胞如乳腺癌細胞、肝癌細胞、宮頸癌細胞、前列腺癌細胞、結(jié)腸癌細胞以及白血病細胞等的增殖起到抑制作用，誘導癌細胞凋亡，進而起到控制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用［4-5］。而對于丹參是否可以有效治療口腔黏膜白斑這一癌前病變并控制其癌變進展則少有研究。由此，鑒于MMP-2和MMP-9在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中的特異性作用以及丹參在各種腫瘤疾病治療中的有效性，我院從2013年開始對口腔黏膜白斑病患者給予口服丹參片治療，并觀察治療過程中口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9表達的變化，對丹參在治療口腔黏膜白斑病以及抑制口腔黏膜癌變的作用進行探討。結(jié)果顯示，病發(fā)口腔黏膜白斑的患者其口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9的陽性表達率較正常人群明顯增高，提示在此狀態(tài)下患者口腔黏膜組織基底膜及其組織屏障可能均已遭到破壞，一旦被癌細胞侵襲則極易發(fā)生癌變。而患者在經(jīng)口服丹參片治療2個月后可見其MMP-2和MMP-9相比治療前有明顯下降，臨床有效率達到97.3%，且結(jié)束治療后一年內(nèi)的癌變發(fā)生率僅為1.9%，由此表明丹參治療可通過降低口腔黏膜組織中MMP-2和MMP-9的陽性表達起到修復組織細胞、改善口腔黏膜白斑病患者臨床癥狀，同時對抑制其癌變的進展其到積極的作用。

因此，我們認為丹參治療可有效改善口腔黏膜白斑病患者的臨床癥狀，并對抑制其近期癌變進展有積極的作用，遠期抑制作用尚需進一步隨訪觀察。

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