對蝦早期死亡綜合癥的研究進展

徐含穎，張婉蓉，張學舒，馮雙雙，羅燕兒 (浙江海洋學院，浙江舟山316022)

南美白對蝦，也稱為凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)，原產美洲熱帶地區(qū)，是當今世界上三大經濟對蝦之一，也是“海蝦淡養(yǎng)”的優(yōu)質品種。白對蝦生長速度快、營養(yǎng)需求低、環(huán)境適應性好、抗病力強，我國于20世紀80年代末將其作為白斑病毒綜合征(WSSV)抗病優(yōu)勢種成功引種試樣，并于2000年實現產業(yè)化育苗，此后白對蝦在我國的養(yǎng)殖規(guī)模逐年增大。

1 南美白對蝦的養(yǎng)殖模式和主要病害

目前，南美白對蝦的養(yǎng)殖模式分為精養(yǎng)、半精養(yǎng)、粗養(yǎng)(混養(yǎng))［1－4］，具體包括灘涂土地養(yǎng)殖模式、高位池精細養(yǎng)殖模式、低鹽度淡化養(yǎng)殖模式、冬棚養(yǎng)殖模式、高鹽度水兌淡水養(yǎng)殖模式、鹽堿地養(yǎng)殖模式和混養(yǎng)模式。

隨著大規(guī)模的高密度養(yǎng)殖，水源污染加劇，加上自身免疫低劣性，南美白對蝦發(fā)生病害［5－9］愈來愈頻繁，歸納起來有3個因素:①對蝦自身，即內在因素;②養(yǎng)殖環(huán)境，即外界因素;③對蝦敏感的病毒、細菌、寄生蟲或其他微生物，即病原因素。目前，已知的病害主要有桃拉綜合征、白斑綜合征、肌肉壞死病、黃/灰/黑鰓綜合征、對蝦腸道疾病、紅體等。近年來，有一種名為“EMS［10］”的新病害在南美白對蝦養(yǎng)殖區(qū)域暴發(fā)，給對蝦養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大損失。

2 EMS對對蝦產業(yè)的沖擊

EMS是“早期死亡綜合癥”(Early mortality syndrome，EMS)的簡稱，又稱急性肝胰腺壞死綜合癥(AHPNS)。2009年，EMS在我國海南對蝦養(yǎng)殖區(qū)域暴發(fā)，在受病原體感染的養(yǎng)蝦池中蝦的早期死亡率極高，造成巨大的經濟損失。2010年，疫情暴發(fā)進一步擴大，越南EMS疫情開始見諸報端。2011～2012年相繼在馬來西亞和泰國暴發(fā)。聯(lián)合國糧農組織數據顯示，2011年亞洲蝦產量為300萬t，產值達133億美元，2011年我國海南、廣東、福建和廣西等省(區(qū))的養(yǎng)殖場產量受此損失近80%。截止2013年，EMS給亞洲的對蝦養(yǎng)殖產業(yè)造成了前所未有的沖擊。EMS造成每年超過10億美元的經濟損失。

3 EMS對蝦體的影響

早期關于EMS的研究表明，EMS多發(fā)于蝦苗放養(yǎng)7～30 d，患病對蝦體色呈白濁并微紅，多數情況下肝胰臟異常腫大，質地松軟，顏色呈淡白或淡黃色;部分患病對蝦的肝胰臟明顯萎縮，質地變硬。發(fā)病期間，患病對蝦通常在池塘水面緩慢游動或趴伏于池塘邊坡上，失去食欲，胃、腸充塞度極差，嚴重者胃腸呈紅色。該病病情發(fā)展十分迅速，死亡率和排塘率極高，從發(fā)現少量病蝦到排塘時間最短的僅2～3 d。

近年來的一些養(yǎng)殖實踐表明，EMS不僅發(fā)生于蝦苗，而且會在成體發(fā)生，甚至延伸到對蝦的整個生命周期。通過對養(yǎng)殖戶的調研發(fā)現，很多蝦塘在蝦苗放養(yǎng)45 d以后才出現發(fā)病現象與以前的相關研究報道相一致。

4 EMS病因的研究進展

目前，對EMS病原的研究很多，學術上主要有3種觀點:一種觀點認為，EMS的病原是副溶血弧菌的特異變種，被噬菌體感染后發(fā)生變異，并促使細菌釋放強力的毒素;另一種觀點則認為，EMS病因是YHV新型病毒，弧菌是繼發(fā)性感染;第三種觀點認為，暴發(fā)EMS/AHPNS的直接原因是弧菌感染，而其根本原因是蝦苗抗逆性下降。此外，也有觀點認為是藻毒素所引起的中毒現象。國內外學者對EMS病因的研究主要集中于病原的分離和鑒定以及發(fā)病機理的研究。

4.1 EMS致病原為變種副溶血性弧菌 2013年5月1日全球水產養(yǎng)殖聯(lián)盟(GAA)宣布，亞利桑那大學研究團隊經過數月的調查研究發(fā)現了導致早期死亡綜合癥的病原體。美國Donald V.Lightner教授領導的研究小組發(fā)表聲明:由未知因子引起的在中國和東南亞暴發(fā)的對蝦早期死亡綜合癥(技術上被稱為急性肝胰腺壞死綜合癥的疾病)其病原已經被確定［11］。研究表明，病因是一種副溶血弧菌，由口進入體內，定植在對蝦消化道內，產生的毒素可導致肝胰腺的結構和功能的損傷，但這種細菌目前報道對人類健康無危害。Loc Tran等［12］通過對感染蝦類的菌落的分離發(fā)現，致病的其中一個因素是哈維氏弧菌的分支，最密切相關的是溶血性弧菌。

國內研究表明，2010年從廣西北海地區(qū)第二造的幼蝦分離的腸炎弧菌(又稱副溶血弧菌)，發(fā)現疑似EMS/AHPNS病樣，表現為肝胰腺萎縮，呈淡黃色，死亡率在90%左右。在2216E瓊脂培養(yǎng)的是2 mm、突起的、光滑的菌落，在TCS瓊脂培養(yǎng)的是綠色菌落，細胞形狀呈棒狀，一端帶鞭毛。此外，試驗中發(fā)現副溶血弧菌不能利用蔗糖。對此，有3位代表性專家支持Donald V.Lightner教授提出的EMS與AHPNS由細菌引起的觀點。廣西對蝦協(xié)會常務副會長龐德彬是國內第一位提出EMS與AHPNS致命原為副溶弧菌的觀點;海南大學賴秋明教授認為病原是一種綠弧菌，其最有價值的試驗就是將南美白對蝦放在2.5×104cfu/ml濃度的綠色弧菌內浸泡1 h，10 d內的累計死亡率達到98%;中山大學何建國教授基本同意副溶血弧菌為致病原的觀點。

4.2 EMS是由黃頭病毒所引起的 中國水產科學院黃海水產研究所研究員黃倢認為，目前存在將多種病原引起不同的疾病混為一談的可能。在所有EMS發(fā)病的對蝦體內都能檢測出副溶血弧菌，不可否認這種細菌感染的存在，副溶血弧菌會引起對蝦死亡也是肯定的，但是不是原發(fā)性的病原尚不能定論。關于對蝦的EMS，可能是由病毒所引起的，是一種新型的黃頭病毒［13－14］，試驗發(fā)現黃頭病毒具有高毒性。

4.3 EMS根本原因是種苗抗逆性下降 Chalor表示EMS不具備可傳染性，并且不是由病毒、寄生蟲或者飼料因素引起的［15］。Chalor指出，他所在的實驗中心在2012年前就開始用病蝦去感染健康蝦，甚至用病蝦的肝胰臟的混懸液注射給健康蝦，也不能導致健康蝦發(fā)病。到目前為止，從中國，越南，泰國等國家發(fā)生EMS的病蝦材料去感染實驗室的健康對蝦，都沒有使健康蝦感染EMS。他認為，在白對蝦育苗階段，很多育苗企業(yè)在苗室大量使用微生物產酸來控制幼體和仔蝦的弧菌感染。這雖然控制了弧菌，但育苗池中的pH太低，蝦苗的蛻殼頻率大大增加，肝胰臟中也保留了大量的細菌，處于一種亞健康狀態(tài)。這種蝦苗進入大池養(yǎng)殖后，如果管理方面太過于激進(如密度更高、投料更多、過量使用微生物來降低pH等)就很容易開始EMS，部分管理適度的農戶，雖然使用了同樣的蝦苗，但死亡往往從40 d左右才開始。

2013年5月31日，基因測算公司的首席執(zhí)行官羅杰·道爾博士和一位從戴爾豪斯大學退休的教授在泰國作了關于近親繁殖和EMS/AHPNS之類病害的關系口頭報告。羅杰·道爾博士表示:在泰國有將近60%的蝦農選擇蝦苗場近親繁殖培養(yǎng)的二代苗。事實上，經過一代又一代的近親繁殖，蝦苗抗病力變得越來越差，越來越容易受到病害襲擊。

5 EMS的防治

面對EMS疾病，目前仍以預防為主，從保證蝦苗質量、建立良好的水環(huán)境、定期檢測弧菌以及藥物和生物防治等方面來開展工作。

5.1 選育優(yōu)質的蝦苗 體內攜帶大量弧菌的親蝦會產生不健康蝦苗，給整個養(yǎng)殖環(huán)境帶入大量病原體。因此，養(yǎng)殖戶要選擇攜帶弧菌數量在安全范圍內的蝦苗放養(yǎng)，在源頭上嚴格把關。

5.2 保持水環(huán)境的相對穩(wěn)定 白對蝦養(yǎng)殖環(huán)境處在自然環(huán)境中(如高位池和土塘養(yǎng)殖)，自然天氣的變化無常，此時，養(yǎng)殖過程中可以以一種常態(tài)化的改變來達到水質［16－18］的相對穩(wěn)定，具體措施包括:①經常加換新水，每天5～10 cm水深，由此使蝦適應暴雨、臺風等環(huán)境突變，也可為保持藻相穩(wěn)定創(chuàng)造條件;②人工增氧，時刻保持溶氧量在5 mg/L以上，這樣也可起到穩(wěn)定菌相的作用;③應用藥物清塘，放苗前15 d左右對養(yǎng)殖池塘進行清塘工作，清塘藥物以生石灰或漂白粉為好。

5.3 維持良好水色，避免“倒藻”發(fā)生 弧菌數量的增加和早期死亡綜合癥疫情的發(fā)生通常都與“倒藻”有密切關系。養(yǎng)殖期間若發(fā)現水色色澤變暗，池水泡沫增多或表層漂浮少量死藻時，說明藻類開始老化，需要采取相應的措施:①經常適量地換水，可以維持藻類的正常生長，避免“倒藻”現象發(fā)生;②經常使用有益微生物(如酵素菌產品)可以及時分解轉化死亡藻類，避免水體藻毒素的累積或濃度升高，促進新藻的繁殖。

5.4 維持蝦池微生物的多樣性和數量的相對穩(wěn)定 養(yǎng)蝦水體宜以好氧微生物為主，同時保持微生物的種類多樣性和數量及穩(wěn)定性［19－21］，從而維持水體物質的良性循環(huán)［22］。經常定期向養(yǎng)蝦水體投施含有多種有益菌的微生物制劑(如酵素菌)是維持蝦池微生物多樣性和數量穩(wěn)定性的重要手段。

5.5 控制池塘的pH 養(yǎng)殖戶可添加適量的生石灰水(清晨太陽升起前)和75 kg/hm2小蘇打，調節(jié)水體的早上的pH控制在7.9～8.0，這將減緩蝦苗脫殼時機和降低死亡率。

5.6 定期檢測養(yǎng)殖水體中弧菌密度 如果檢測出弧菌濃度偏高，應對養(yǎng)殖水體進行消毒，待藥性消失后再重新培育水體菌相。

5.7 藥物防治 以抗生素、中藥控制為主，中藥主要包括適當使用大蒜素、大黃、黃連和板藍根等，這些中藥還可以顯著提高南美白對蝦機體免疫力。

5.8 生物防治 ①混養(yǎng)切斷病原傳播:主要有對蝦和魚類混養(yǎng)法，如將南美白對蝦和革胡子鯰等底棲魚類進行套養(yǎng)，減少患病對蝦的數量，控制病菌數量，切斷病原的傳播，從而控制EMS等疾病在白對蝦養(yǎng)殖群體的暴發(fā);②利用酵素菌和藍藻防控:EMS發(fā)生時總有一些伴生的環(huán)境因素，EMS是對蝦腸道弧菌毒素與不良水質環(huán)境共同作用的結果。采用酵素菌和藍藻進行生物防控EMS就是利用弧菌與水環(huán)境這2個EMS發(fā)生和發(fā)展的關鍵點［23］，目前已取得較好的成效。

6 小結

早期死亡綜合癥(EMS)作為一種新的病害，危害著整個對蝦產業(yè)。在發(fā)病早期，對蝦的體色、肝胰臟等處會產生明顯的病理特征，需要留心觀察，及時采取防護措施，降低損失。由于該疾病發(fā)病時間短、病情發(fā)展迅速，在養(yǎng)殖過程中仍以預防手段為主，選擇合適的管理模式來維持良好的養(yǎng)殖水域環(huán)境。研究表明，副溶血弧菌直接或間接引發(fā)EMS，因此要選購強抗逆性的健康蝦苗，并定期對水環(huán)境進行弧菌檢測，控制弧菌數量。

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