靈芝水提物活性成分抗皮膚衰老功效研究

黃守耀，焦春偉，梁慧嘉，楊詠善，陳家明，張命龍，洪雅琪，謝意珍，2*(.廣東粵微食用菌技術有限公司，廣東廣州50070;2.廣東省微生物研究所，廣東省菌種保藏與應用重點實驗室，省部共建華南應用微生物國家重點實驗室，廣東省微生物應用新技術公共實驗室，廣東廣州50070)

衰老是生命運動的自然過程，是機體在發育成熟后，體內各種功能活動進行性下降的過程，存在于任何生命體的任何時期，只是不同情況下其速率與程度有所區別。目前關于其發生機制說法不一，主要有中醫延年學說［1］、氧自由基學說［2］、遺傳程序學說［3－6］等。靈芝是一種珍貴的食藥用真菌，具有明顯抗衰老、抗氧化作用［7］，能消除自由基［8］、抑腫瘤、抗輻射，維持機體免疫調節平衡，提高機體抗病能力。筆者利用靈芝水提物制作成靈芝抗衰老面膜，進行臨床試驗，通過檢測相關指標，研究其抗面部皮膚衰老的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 靈芝抗衰老面膜，由靈芝水提物制作，供試靈芝抗衰面膜由廣東粵微食用菌技術有限公司提供。

1.2 方法 靈芝抗衰面膜臨床試驗設計由抗皮膚衰老功效臨床試驗委托國家衛生部認定具有“化妝品人體安全性與功效檢驗機構”資質的中山大學第三附屬醫院皮膚科完成。采用隨機、雙盲的臨床功效研究方法。

1.2.1 試驗對象。年齡在30～60歲的健康中國女性，皮膚類型為II～IV型皮膚［9］，在廣州生活居住一年以上，能很好配合試驗，在研究期間能保持生活的規律性并能避免日光紫外線照射者，顏面部具有皮膚較粗糙或細紋較多者，能夠閱讀和理解知情同意書的所有內容，并自愿簽署知情同意書者。試驗期間不使用任何對結果有影響的化妝品、藥物和保健品。

凡具有下列任一條件的患者必須排除進入該項研究，面部合并有嚴重細菌、病毒或真菌感染者，有高度過敏體質者，有嚴重心、肝、腎功能損害及嚴重免疫功能低下者，有精神疾病及嚴重內分泌疾病者或妊娠以及口服避孕藥者，面部有糖皮質激素皮炎者，面部有濕疹或嚴重脂溢性皮炎、痤瘡的患者，30 d內參加藥物臨床試驗或其他試驗者，或1周內系統使用對試驗結果有影響藥物者，2周內有口服和外用可能對試驗結果有影響的美容產品者，不能配合試驗者，研究者認為不適于參加該研究者。受試者如在研究期間有妊娠、并發癥、嚴重不良事件或違反研究方案等原因，應退出臨床研究，同時寫明退出原因。

1.2.2 使用方法。潔膚后，取出面膜，撕下珠光膜或藍色膜，貼于面部，再撕下藍色膜或珠光膜，約20 min后取下，將面部余留精華輕柔拍打至吸收。晚上睡前使用，效果更佳。每周使用2次，連續使用12周。

1.2.3 臨床試驗結果評價。共觀察12周，隨訪5次，分別為第0天、第7天、第28天、第56天和第84天，由專業研究者對每個受試者在使用前和每次隨訪時進行目測評估、儀器測量以及問卷調查。每次日測評估和儀器測量保持前后條件一致即由同一個研究者，充足的光線，在相對恒定環境條件，即室溫(23±2℃)和濕度(50±5%)，對同一個靶部位進行評估和測量。每個受試者每次評估和測試前應避免劇烈運動，在上述室內穩定環境中休息20 min后進行。

1.2.3.1 感官評價。評估指標包括面部皮膚干燥度、皮膚彈性、皮膚光澤度、皮膚細小皺紋以及皮膚光滑度。每個指標依據其程度按0分(很好)～9分(很差)來進行評估，通過使用產品前后各指標的改變程度(評分差值)來判斷其改善程度，改善程度評估標準分別為－l=輕度變差、－2=中度變差、－3=明顯變差、0=無改善、1=輕度改善、2=中度改善、3=明顯改善、4=完全改善。

1.2.3.2 安全性評估。所有在使用產品期間發生的皮膚不良反應如皮膚紅、刺痛、瘙癢、灼熱等均應記錄，對嚴重不良反應要及時報告。皮膚不良反應分級按照衛生部頒發的2007年版《化妝品衛生規范》中規定的人體試用試驗皮膚不良反應分級標準來判斷。

1.2.3.3 皮膚含水量的測定。使用德國 COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產的皮膚水份測量儀(Corneometer@CM825)，每次隨訪時對受試者靶部位皮膚進行皮膚含水量測定，共測量3次，取其平均值;通過比較樣品使用前后及試驗側和對照側皮膚含水量的變化來評估該樣品的保濕功效。

1.2.3.4 皮膚彈性指標的測定。使用德國 COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產的皮膚彈性測量儀(Cutometer@MPA580)對受試者靶部位皮膚進行皮膚彈性指標R2和R5的測定，共測量3次，取其平均值;通過比較樣品使用前后及試驗側和對照側皮膚彈性指標的變化來評估該樣品對皮膚彈性的改善功效。

1.2.3.5 皮膚紋理深淺指標的測定。先用硅膠在眼角靶部位制成細小皺紋模型，然后使用德國COURAGE+KHAZAKA(CK)公司生產的皮膚皺紋分析儀(Visioline⑩VL650-Quantiride⑧)對受試者靶部位細小皺紋模型進行皮膚細紋深度和長度指標的分析;通過比較產品使用前后及試驗側和對照側皮膚細紋深度和長度的變化來評估該樣品對皮膚細紋的改善功效。

1.2.4 統計分析。使用SPSS20.0專用統計軟件進行統計分析，采用單因素重復測量分析方法進行檢驗，P值＜0.05表明有統計學差異。

2 結果與分析

2.1 感官評估結果

2.1.1 研究者感官評估。研究者感官評估結果(表1)表明，受試者使用樣品后，皮膚干燥度、皮膚彈性、皮膚光澤度以及皮膚光滑度有不同程度的改善，且隨著使用時間的延長，改善效果增強，各時間點較使用前有明顯的改善(P值＜0.05);皮膚細小皺紋方面，隨著使用時間的延長，雖然有一定程度改善，但較使用前無明顯的改善(P值＞0.05)。從使用樣品不同時間后各皮膚改善程度的人數百分比(表2)可看出，隨著使用時間的延長，各指標的改善率逐漸增加，在連續使用12周時，皮膚干燥度、彈性、光澤度以及光滑度的總改善率均超過 90%，分別為 91.17%、91.17%、94.12%、91.18%，細小皺紋的總改善率也達11.76%。

表1 研究者評估各指標的變化

表2 研究者評估各指標總改善率 %

2.1.2 受試者自我感官評估。由圖1可見，在使用產品后第1周開始，受試者自評面部各指標(皮膚柔軟度、皮膚光滑度、皮膚滋潤度和皮膚紋理改善度)總的改善率基本達50%，隨著使用時間的延長，各指標的總改善率逐漸提高，使用12周后皮膚柔軟度、光滑度、滋潤度和紋理改善度分別為91.18%、88.24%、85.28%和 91.17%。受試者使用產品后，自我感覺良好。

2.2 安全性評估 34名受試者中，第15號和29號受試者試驗側使用試驗產品10～20 min后，出現輕微的紅斑或瘙癢，持續約數分鐘至半小時不等，無特殊處理癥狀可自行消失，不影響產品的繼續使用。25號受試者第一次使用產品20 min后，雙側使用部位均出現輕微的紅斑，持續約30 min后自行消失。26號受試者第一周試驗側每次使用試驗樣品約10 min后，出現輕微刺痛，持續數分鐘后自行消失;第12周其中一次使用產品后，雙側使用部位均出現輕微刺痛，持續約10～20 min后自行消失。其余未見與樣品相關的局部不良反應或嚴重不良反應，產品具有較好的安全性。

2.3 儀器測量結果

2.3.1 面部靶部位皮膚含水量測量結果。由圖2可見，使用試驗樣品后，面部靶部位皮膚含水量隨著使用時間的延長，均有逐漸升高的趨勢，各時間點與產品使用前比較，差異均有顯著性(P值＜0.05)。結果表明，試驗樣品在使用后第一周開始，有提高面部皮膚含水量的功效。

2.3.2 面部靶部位皮膚彈性指標測量的結果。皮膚彈性指標R2是指無負壓時皮膚的回彈量與有負壓時的最大拉伸量之比，比值越接近1，說明皮膚彈性越好;R5是指在皮膚測試的第一次循環中，皮膚恢復過程的彈性部分與加負壓過程的彈性部分之比，比值越接近1，說明皮膚彈性越好。由圖3可見，皮膚的彈性值R2隨著使用樣品時間的延長，有逐漸升高的趨勢，在使用后第8周達到最高峰，但各時間點與使用前比較均無統計學差異(P值＞0.05)。彈性指標R5隨著使用樣品時間的延長，各時間點與樣品使用前相比變化不大(P值＞0.05)。試驗樣品在改善皮膚彈性方面，效果不理想。

2.3.3 面部靶部位皮膚細小皺紋模型分析結果。通過面部細小皺紋模型的儀器分析，獲得平均皺紋長度和深度的變化情況，由圖4可見，隨著使用時間的延長，受試者皮膚的細小皺紋平均長度有逐漸變小的趨勢，在使用后第12周，與樣品使用前比較有顯著差異(P值＜0.05);皮膚細小皺紋平均深度也有逐漸變小的趨勢，除使用樣品后第8周外，其余各時間點與樣品使用前比較均有顯著差異(P值＜0.05)。試驗樣品在減小和淺化皮膚皺紋方面均具有一定的功效。

3 討論

靈芝抗衰老面膜在改善面部皮膚干燥度、光澤度、光滑度、彈性、柔軟度和滋潤度等方面有一定的功效，能一定程度地提高面部皮膚含水量，能一定程度地改善面部細小皺紋的長度和深度，有較好的安全性。在試驗過程中，皮膚彈性指標R2、R5值在使用前后無統計學差異(P值＞0.05)，應開發系列產品并配套使用，同時增加產品的使用頻率以更好地體現其抗面部衰老功效。

現代藥理研究發現，靈芝含有多種氨基酸及礦物質，并含有多種多糖類活性成分，靈芝多糖可促進細胞增殖，減輕角質形成細胞氧化應激性損傷，有抗表皮細胞衰老作用［10］，該研究通過臨床試驗證實靈芝具有抗衰老的功效，為靈芝產業的進一步發展壯大提供試驗依據。

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