依達拉奉對大鼠創傷性腦損傷的早期保護作用

周傳廣 冷曉磊 矯永慶 崔 鵬

1）遼寧大連市第三人民醫院神經外科 大連 116033 2）大連醫科大學附屬三院神經外科 大連 116000

目前，因交通事故等所造成的顱腦創傷呈加速遞增趨勢，是導致創傷病人傷殘和死亡的主要原因，嚴重危害人類健康，給社會和家庭帶來沉重負擔，深入研究創傷性腦損傷（TBI）的發病機制及其傷后病理生理變化，探索行之有效的腦保護治療途徑，將有助于提高TBI病人的生存率及生存質量。依達拉奉作為一種新型的自由基清除劑，對缺血性腦損傷保護作用的報道眾多［1-3］。本文旨在探討依達

拉奉對早期創傷性腦損傷的作用。

1 材料

1．1 實驗動物及分組 選取健康成年SD 大鼠54 只，雄性，購于遼寧醫學院實驗動物中心。分為3 組：假手術組18 只，僅開骨窗，不致傷；損傷組18 只，制大鼠自由落體腦撞擊傷模型；依達拉奉組18 只，予尾靜脈注射依達拉奉注射液處理。

1．2 藥品及試劑 依達拉奉注射液（商品名比存，南京先聲藥業有限公司，規格每支20mL：30mg）；伊文思藍（EB）試劑（上海生物試劑站）；MDA 及SOD 試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2 方法

2．1 動物模型制作 采用經典的自由落體撞擊傷模型。本實驗選用改進的Feeney’s自由落體硬膜外撞擊方法［4］。

2．2 給藥途徑及方法 依達拉奉組在傷后立即于大鼠尾靜脈滴注依達拉奉0．5mg·kg-1（溶解于生理鹽水100mL中）30min滴完。傷后每12h再給藥1次，劑量及給藥途徑均一致。余2組僅注射同體積的生理鹽水。

3 觀察指標

3．1 腦含水量測定 于傷后24h、48h及72h各組分別取大鼠斷頭處死，開顱取腦，于傷灶周圍取200 mg腦組織，電子分析天平稱取腦濕質量，然后將標本置于90 ℃紅外線干燥箱中24～48h至恒質量，稱取值為干質量。腦水含量用濕重的百分比表示，即腦組織含水量（%）＝（濕質量-干質量）／濕質量×100%。

3．2 BBB 通透性測定 按Belayer法［5］使用伊文思藍（evens blue，EB）作為示蹤劑。于傷后24h、48h及72h各組分別取大鼠斷頭處死，在處死前2h，按20mg／kg自股靜脈注入2%的EB 溶液。取傷灶后外標本100mg，加甲酰胺3 mL 加蓋避光在54℃水浴箱中提取24h，提取液在紫外分光光度計下測量光密度值（OD 值），波長為632nm，腦組織EB含量（OD／g濕腦組織）代表BBB通透性。

3．3 腦組織MDA 含量測定及SOD 活力檢測 于傷后24 h、48h 及72h將大鼠迅速斷頭取腦，于冰浴中迅速分離腦組織，取損傷側半球腦組織稱質量，按1∶10比例（每1g組織加10mL 生理鹽水）加入冰生理鹽水，用組織勻漿機分別制成10%組織勻漿，離心10min，并用生理鹽水將上清液稀釋成1%組織勻漿，測定MDA 含量及SOD 活力。

3．4 統計學處理 采用SPSS 14．0統計軟件進行Oneway-ANOVA 分析，計量資料均以±s表示。組間比較用LSD檢驗，P＜0．05 為差異有統計學意義。

4 結果

4．1 腦含水量測定結果 在3個時間點，損傷組和依達拉奉組均高于假手術組，而依達拉奉組明顯低于損傷組，差異有統計學意義（P＜0．05）。見表1。

表1 各組腦組織含水量（%）比較 （±s，n＝18）

表1 各組腦組織含水量（%）比較 （±s，n＝18）

注：與損傷組相應時間點比較，＊P＜0．05

組 別24h 48h 72h假手術組95．82±0．34 95．90±0．41 95．73±0．38損傷組 98．48±0．52 110．62±0．59 118．37±0．63依達拉奉組 97．02±0．48＊ 103．92±0．54＊ 110．82±0．60＊

4．2 腦組織EB含量測定結果 在3個時間點，損傷組和依達拉奉組EB含量均有不同程度升高，但依達拉奉組的變化，各時間點均明顯低于損傷組（P＜0．05）。見表2。

表2 各組腦組織EB含量（OD／g）比較 （±s，n＝18）

表2 各組腦組織EB含量（OD／g）比較 （±s，n＝18）

注：與損傷組相應時間點比較，＊P＜0．05

組 別24h 48h 72h假手術組0．296±0．026 0．295±0．022 0．297±0．028損傷組 0．762±0．075 0．843±0．083 0．927±0．091依達拉奉組 0．721±0．072＊ 0．801±0．079＊ 0．845±0．082＊

4．3 MDA 含量及SOD 活力變化 在3個時間點，損傷組和依達拉奉組MDA 含量均有不同程度升高，SOD 活力呈下降趨勢。但與損傷組比較，依達拉奉組MDA 含量均顯著降低（P＜0．05），SOD 活力則下降緩慢（P＜0．05）。見表3。

表3 各組MDA 含量及SOD 活力比較 （±s，n＝18）

表3 各組MDA 含量及SOD 活力比較 （±s，n＝18）

注：與假手術組相應時間點比較，＊P＜0．05，與損傷組相應時間點比較，＊＊P＜0．05

組 別 時間 MDA 含量（mmol／mL）SOD 活力（Nu／mg）假手術組24h 117．51±5．82 119．88±4．69 48h 119．32±5．93 120．38±4．92 72h 118．42±5．89 121．34±5．23損傷組 24h 146．47±7．82＊ 90．01±7．11＊48h 156．71±9．15＊86．34±6．27＊72h 175．24±11．43＊ 80．29±5．51＊依達拉奉組 24h 143．12±7．13＊＊ 93．35±7．52＊＊48h 149．25±8．02＊＊ 90．39±7．32＊＊72h 160．41±10．12＊＊ 88．46±7．03＊＊

5 討論

顱腦損傷是當今威脅人類生命的主要疾患之一，其發生率和病死率僅次于癌癥和心血管疾病而居第3位，在暴力性死亡中顱腦損傷的病死率居首位。隨著我國現代化進程的加快，交通、建筑事業的發展以及運動損傷、意外事故和自然災害等致傷因素的存在，創傷發生率增多，顱腦損傷已成為威脅人們生命的主要疾病。目前顱腦損傷的實驗研究主要圍繞顱腦損傷后繼發性損傷機制展開，如腦組織能量代謝紊亂、興奮性氨基酸毒性、細胞內鈣超載、自由基損傷、神經細胞凋亡、炎癥反應等多環節。而創傷性腦損傷后引起的出血、缺血及缺血再灌注等均伴有大量的氧自由基產生，由于細胞膜脂質內含有大量的膽固醇及多不飽和脂肪酸，易遭受自由基的侵害，發生脂質過氧化反應，致細胞膜通透性改變，細胞水腫壞死［6］。SOD 是一種金屬酶，可催化超氧自由基發生歧化反應，能夠清除氧自由基，保護生物膜免受自由基的傷害。自由基可使腦組織MDA 含量升高，SOD 活性下降。通過研究腦組織線粒體MDA 和SOD 水平的變化，可以反映藥物治療的效果是否通過對抗自由基而發揮其治療作用［7］。依達拉奉是一種新型自由基清除劑，分子量小，具有親脂基團，可清除具有高度細胞毒性的羥基基團，降低羥自由基的濃度，抑制脂質過氧化作用［8］。本實驗結果表明損傷組傷后腦組織MDA 含量明顯增加，而SOD 活力則有顯著下降，但依達拉奉治療組，傷后早期MDA 含量升高及SOD 活力下降趨勢得到顯著的抑制。從本實驗腦含水量及EB含量的變化觀察，我們考慮依達拉奉能通過清除自由基，抑制細胞膜和毛細血管的脂質過氧化，降低BBB 的通透性，從而能在腦損傷早期起到減輕腦水腫的作用。故依達拉奉作為一種安全、有效的自由基清除劑，對腦損傷早期具有積極的保護作用。

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