激活素A及激活素結(jié)合蛋白用于腦血管病治療前后的變化

楊 媛張梅奎張 寰康曉妮于生元△解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 北京 100853 解放軍總醫(yī)院遠(yuǎn)程醫(yī)學(xué)中心 北京 100853

激活素A及激活素結(jié)合蛋白用于腦血管病治療前后的變化

楊 媛1）張梅奎2）張 寰2）康曉妮2）于生元1）△
1）解放軍總醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 北京 100853 2）解放軍總醫(yī)院遠(yuǎn)程醫(yī)學(xué)中心 北京 100853

目的 探討激活素A以及激活素結(jié)合蛋白在腦血管病治療前后的變化。方法 收集2013-01—2014-01我院收治的腦出血患者22例為A組，腦梗死患者22例為B組，健康志愿者22例為C組，分別采集A、B組治療前后及C組的外周靜脈血，采用放射免疫法測(cè)定血清激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平。結(jié)果 A、B組治療前的激活素A水平顯著高于C組（P＜0.05）；治療后A、B組的激活素A均顯著降低（P＜0.05），但與C組無明顯差異（P＞0.05）；A組治療前激活素結(jié)合蛋白水平顯著高于C組（P＜0.05），治療后顯著降低（P＜0.05），但與C組無明顯差異（P＞0.05）；B組激活素結(jié)合蛋白治療前后均與C組無明顯差異（P＞0.05）。結(jié)論 腦出血患者存在外周血激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平明顯升高現(xiàn)象，腦梗死僅表現(xiàn)為激活素A明顯升高，治療后均可恢復(fù)至正常水平。

腦出血；腦梗死；激活素A；激活素結(jié)合蛋白

激活素是一種雙鏈糖蛋白，可促進(jìn)垂體前葉腺細(xì)胞促性腺激素的分泌，并可促進(jìn)細(xì)胞的分化和胚胎的發(fā)育［1］。激活素結(jié)合蛋白是一種單鏈糖蛋白，在多種組織中均有分泌，能夠與激活素發(fā)生特異性結(jié)合，發(fā)揮對(duì)激活素的抑制作用，從而抑制激活素所具有的生物學(xué)作用［2］。既往研究顯示，激活素以及其特異結(jié)合蛋白在腎上腺、腎、丘腦、垂體、卵巢及胎盤等多種組織中均有表達(dá)，在外周血中也有存在［3］。腦血管疾病患者具有明顯免疫功能以及內(nèi)分泌變化，這種變化與激活素A以及激活素結(jié)合蛋白是否有關(guān)目前尚未完全闡明［4］。本研究分析了腦出血以及腦梗死患者治療前后激活素A及激活素結(jié)合蛋白水平變化，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2013-01—2014-01我院收治的腦出血患者22例為A組，男12例，女10例；年齡41～65歲，平均（50.33±2.48）歲；腦梗死患者22例為B組，男13例，女9例；年齡40～62歲，平均（50.79±2.51）歲；健康志愿者22例為C組，男12例，女10例；年齡40～66歲，平均（50.53± 2.46）歲。3組的年齡和性別構(gòu)成等均無明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法 A組、B組均在治療前及治療后、C組入組時(shí)晨取空腹外周靜脈血4mL，3 000r／min離心10min，置于-20℃下保存待測(cè)。采用放射免疫法測(cè)定激活素A水平。按照1∶1000的比例加入pH 8.0的0.05mol／L硼酸鹽緩沖液至兔抗激活素A多克隆抗體中，然后在放射免疫測(cè)定管中加入經(jīng)稀釋后的抗激活素抗體，每管100mL，并加入徑125I標(biāo)記后的激活素A，每管10 000次／min，然后在加入待測(cè)血清或者標(biāo)準(zhǔn)激活素A（濃度0～6 400ng／L），每管100mL，在4℃條件下孵育過夜。在每孔中加入1∶100的羊抗兔IgG抗體，毎管200mL，在4℃條件下繼續(xù)孵育6h。然后加入6％ 的PEG，毎管500mL，5 000r／min離心30min，棄去上清液。采用計(jì)數(shù)儀測(cè)定每分鐘的放射率（次／min），并繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣本中激活素A含量的計(jì)算。

采用雙抗體夾心酶法聯(lián)合免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定激活素結(jié)合蛋白水平。在鼠抗體激活素結(jié)核蛋白單克隆抗體中加入pH 9.6的0.05mol／L碳酸鹽緩沖液稀釋至2.5 mg／L，每孔中加入100mL使酶標(biāo)板包被，4℃條件下孵育過夜，然后此阿勇洗滌液進(jìn)行洗板1次。在每孔中加入20 g／L的BAS，并置于40℃條件下封閉保存1h，然后再洗板1次。加入0.25～16ng／mL的標(biāo)準(zhǔn)激活素結(jié)合蛋白或者血清樣本，每孔100mL，在40℃下孵育1h。然后洗板3次以后，加入1∶800的兔抗激活素結(jié)合蛋白多克隆抗體，每孔100mL，在40℃下孵育1h，再次洗板3次，然后再加入經(jīng)HRP標(biāo)記后的1∶1 000羊抗兔IgG抗體，每孔100mL，40℃下孵育1h。洗板3次以后，加入鄰苯二胺（OPD）底物緩沖液，每孔100mL，置于室溫避光條件下顯色5min。然后再加入2mmol／L的H2SO4終止反應(yīng)，每孔50mL。采用酶聯(lián)免疫法測(cè)定490nm處的吸收值（A），并描繪標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算測(cè)定樣本中的激活素結(jié)合蛋白含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 18.0進(jìn)行分析，以（±s）表示計(jì)量資料，行t檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

A組的激活素A以及激活素結(jié)合蛋白均顯著高于C組（P＜0.05），治療后均顯著降低（P＜0.05），但與C組無明顯差異（P＞0.05）；B組激活素A顯著高于C組，治療后顯著降低（P＜0.05），但與C組無明顯差異（P＞0.05）；B組激活素結(jié)合蛋白在治療前后均與C組組無明顯差異（P＞0.05）。見表1。

表1 3組激活素A以及激活素結(jié)核蛋白水平比較（±s，μg／L）

表1 3組激活素A以及激活素結(jié)核蛋白水平比較（±s，μg／L）

組別n 激活素A 激活素結(jié)合蛋白治療前 治療后 治療前 治療后A組22 5.81±0.33 1.91±0.26 8.03±1.44 5.71±0.34 B組22 3.03±0.35 1.89±0.24 5.68±0.31 5.57±0.29 C組22 1.74±0.23 - 5.15±0.27 -

3 討論

激活素是一種轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子b（TGF-b）超家族成員，主要是由bA與bB兩個(gè)亞基經(jīng)二硫鍵連接所組成的激活素，其分子形式主要激活素A、激活素B以及激活素AB三種類型［57］。三種分子的激活素均具有相似的生物學(xué)活性，均可促進(jìn)垂體前葉腺分泌出促性腺激素。由于激素A的活性相對(duì)較弱，故目前臨床多針對(duì)激活素A展開研究［8］。激活素A又稱為免疫因子P，其能夠抑制巨噬細(xì)胞的活性，并可誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞的凋亡。目前已有相關(guān)研究［9-11］證實(shí)，人外周血中具有激活素A及其結(jié)合蛋白，但關(guān)于兩者在腦血管疾病的病理進(jìn)展過程中的作用目前尚未完全闡明，其與腦血管疾病患者的細(xì)胞免疫功能受抑之間的關(guān)系也缺乏充分的證據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，A組患者的外周血激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平均較C組顯著升高，經(jīng)相應(yīng)治療且癥狀好轉(zhuǎn)后，外周血激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平均顯著降低且趨于正常，與C組無明顯差異。B組僅激活素A顯著高于C組，且異常程度不及A組明顯，治療后外周血激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平也接近正常。提示外周血激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平與腦血管病變的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)［12］。研究認(rèn)為，激活素A是一種免疫抑制因子，可能抑制機(jī)體T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化活性，從而誘發(fā)心腦血管疾病［13-14］。此外，研究結(jié)果還顯示，A組的激活素A以及激活素結(jié)合蛋白水平均顯著高于B組，認(rèn)為監(jiān)測(cè)激活素A以及激活素結(jié)核蛋白水平對(duì)于腦血管疾病的早期診斷以及臨床預(yù)后評(píng)估具有重要指導(dǎo)意義，但關(guān)于其具體界限值還有待進(jìn)一步大樣本研究［15］。

綜上所述，腦出血患者表現(xiàn)為激活素A以及激活素結(jié)核蛋白水平明顯升高，而腦梗死患者僅表現(xiàn)為激活素A明顯升高，經(jīng)有效治療后均能夠恢復(fù)正常，檢測(cè)激活素A以及激活素結(jié)核蛋白水平變化有利于指導(dǎo)臨床對(duì)腦血管疾病的診斷鑒別、治療決策以及預(yù)后判斷。

［1］常霞，陰懷清，栗紅，等.激活素A對(duì)新生大鼠缺血缺氧后腦組織巢蛋白表達(dá)的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2010，8（5）：589-591.

［2］劉春紅，孫侃，王宏，等.血清S100β蛋白與2型糖尿病腦梗死的關(guān)系［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2012，33（12）：1 797-1 800.

［3］劉春紅，孫侃，王宏，等.血清S100β蛋白與腦梗死認(rèn)知功能障礙及OCSP分型的關(guān)系［J］.山東醫(yī)藥，2012，52（9）：48-49.

［4］耿輝，孫利偉，孫莉莉，等.兒童外傷性腦梗死與蛋白S基因多態(tài)性的關(guān)系［J］.臨床兒科雜志，2011，29（9）：886-888.

［5］孫爽，孫莉，周春奎，等.血漿蛋白C、蛋白S與腦梗死的相關(guān)性研究［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2007，24（5）：551-554.

［6］王軼楠，馬迪，閆楓，等.激活素結(jié)合蛋白在ConA誘導(dǎo)小鼠肝損傷時(shí)的表達(dá)及作用［J］.中國(guó)免疫學(xué)雜志，2009，25（8）：684-686；691.

［7］張令軍，黃鶴，潘平喜，等.激活素A在心肌缺血后適應(yīng)中的表達(dá)變化及意義［J］.四川大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，40（1）：97-99.

［8］郝麗紅，王琳，郭靜，等.激活素A在細(xì)菌性腦膜炎新生兒腦脊液中的變化及其對(duì)預(yù)后評(píng)估的價(jià)值［J］.實(shí)用兒科臨床雜志，2012，27（16）：1 270-1 272.

［9］于昉，王軼楠，楊清，等.激活素A及激活素結(jié)合蛋白在急性酒精性肝損傷小鼠肝組織中的表達(dá)［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2011，24（3）：285-287；291.

［10］張宸豪，柳忠輝，劉海巖，等.激活素A及其結(jié)合蛋白在STZ損傷小鼠胰腺組織中的表達(dá)及意義［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，35（2）：292-295.

［11］霍德勝，汪麗，陳秀華，等.流產(chǎn)患者外周血激活素結(jié)合蛋白水平變化的研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2009，13（1）：91-93.

［12］于昉，楊清，王軼楠，等.酒精性肝硬化患者外周血激活素結(jié)合蛋白水平變化［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（3）：473-475.

［13］潘均喜，李廣漢，韋善，等.三維立體定向軟通道與硬通道治療高血壓腦出血療效比較［J］.現(xiàn)代儀器與醫(yī)療，2013，19（4）：83-84；87.

［14］包薩如拉，朱潤(rùn)秀，孟云慶，等.青年腦梗死與中老年腦梗死臨床資料的對(duì)比探究［J］.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2013，16（14）：13-15.

［15］黃楚泉，張圳銳，吳少波，等.腦梗死與血漿同型半胱氨酸水平及頸動(dòng)脈粥樣硬化的相關(guān)性研究［J］.中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志，2012，15（19）：3-6.

（收稿2014-10-12）

Effects of activin A and activin-binding protein used in the treatment of cerebrovascular disease

Yang Yuan＊，Zhang Meikui，Zhang Huan，Kang Xiaoni，Yu Shengyuan
＊Department of Neurology，the General Hospital of PLA，Beijing100853，China

Objective To investigate the changes of activin A and activin-binding protein in patients with cerebrovascular disease before and after treatment.Methods 22cases of patients with cerebral hemorrhage in our hospital between January 2013and January 2014were collected as group A，22patients with cerebral infarction as group B，22cases of healthy volunteers as group C，the Peripheral blood of group A，group B before and after treatment and group C were collected，the activin A and activin-binding protein of the three groups were measured by radioimmunoassay.Results The activin A levels of group A and group B before treatment were significantly higher than group C（P＜0.05）；after treatment，activin A levels in group A，group B were significantly lower（P＜0.05），there were no significant differences between group C（P＞0.05）；before treatment，activin-binding protein level in group A was significantly higher than in group C（P＜0.05），after treatment was significantly lower（P＜0.05），and no significant difference with group C（P＞0.05）；activin-binding protein level in B group before and after treatment，group C were not significantly different（P＞0.05）.Conclusion Patients with cerebral hemorrhage existence of phenomenon with peripheral activin A and activin-binding protein levels are significantly increased，and cerebral infarction shows only activin A significantly increased，all can recover to normal levels after treatment.

Cerebral hemorrhage；Infarction；Activin A；Activin-binding protein

R743.34

A

1673-5110（2015）15-0001-02

國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題（2013BAH14F00）

△通訊作者：于生元（1963.7-），主任醫(yī)師，博士研究生，E-mail：yusy1963＠126.com