克螨特農藥對斑馬魚急性毒性的研究

黃 瑜，蔡 佳，王 蓓，魯義善，簡紀常，吳灶和，湯菊芬*

(1.廣東海洋大學水產學院，廣東湛江524088;2.廣東省水產經濟動物病原生物學及流行病學重點實驗室，廣東湛江524088;3.廣東省水產經濟動物病害控制重點實驗室，廣東湛江524088;4.仲愷農業工程學院，廣東廣州510225)

克螨特，又稱炔螨特，英文通用名稱Propargite，是美國Uniroyal公司1968年研制成功的高效低毒、無內吸性、低殘留、具有觸殺和胃毒雙重作用的有機硫廣譜殺螨劑，有效成分為2-(4-叔丁基苯氧基)環己基丙炔-2-基亞硫酸酯［1］。克螨特在農業上主要用于防治棉花、果蔬、花卉的螨害效果顯著［2-4］。然而，近年有研究發現克螨特對寄生于鰻鱺身上的指環蟲有很好的治療效果［5］。斑馬魚(Brachydanio rerio)是一種亞熱帶淡水魚類，因其體側具有象斑馬一樣縱向的暗藍與銀色相間的條紋而得名，斑馬魚體積小、繁殖快、易于培養、成本低、同時易于給藥容易觀察，是試驗中重要的科研魚類。筆者通過克螨特對斑馬魚的室內急性毒性測定試驗，為今后利用克螨特殺滅斑馬魚的寄生蟲疾病提供數據支持。

1 材料與方法

1.1 試驗用魚 同批同齡的斑馬魚取自廣東省湛江市花鳥蟲魚市場，斑馬魚(Brachydanio rerio)體質量為(0.3 ±0.1)g，全長為(20.0±5.0)mm，雌雄不限，試驗前在容積為400 L的大水簇箱中馴養7 d。試驗時挑取體格健壯、無傷無病的斑馬魚進行試驗。

1.2 試驗藥物 克螨特(Propargite)，購自汕頭市光華化學廠。

1.3 試驗條件 養殖用水為曝氣充氧除氯24 h以上的自來水，水溫(20±3)℃，pH在7.0左右，總硬度101～103 mg/L，堿度52.21 ～57.13 mg/L，溶解氧含量5.2 ～7.1 mg/L。充氣使用小型充氣泵，飼料為斑馬魚專用飼料。試驗是在規格80 L的水族箱中進行，每桶加入藥液水50 L。

1.4 試驗方法

1.4.1 濃度設置。采用靜水試驗方法，以4 d為1個試驗周期。通過預試驗，確定克螨特毒性試驗的濃度范圍，即96 h 100%死亡濃度(LC100)和0%死亡濃度(LC0)。然后，按照等對數間距法確定克螨特急性毒性試驗濃度梯度(表1)，設置7個濃度組和1個對照組進行試驗，觀察96 h內斑馬魚的反應，每組放30尾，試驗藥液現配現用。

待測得克螨特對斑馬魚96 h的半致死濃度(LC50)和安全濃度(SC)后，再進行LC50和SC的可信度驗證。設置3個平行組，每組30條魚。試驗所用藥液現配現用。

1.4.2 結果觀察。試驗前24 h停止投喂飼料，試驗開始后的前8 h內連續觀察受試魚的中毒癥狀及死亡情況，以后不定時進行觀察，并于96 h分別記錄試驗魚的死亡數和存活數。

1.4.3 指標計算。LC50和95%可信區間的計算采用寇氏法［6］;按照以下公式計算 SC:SC=0.1 ×96 h LC50［7］。

1.4.4 數據處理。使用SPSS 17.0統計軟件對試驗數據進行單因素方差分析和Duncan’s多重比較，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 預試驗結果 克螨特對斑馬魚96 h全部死亡的最小劑量(LC100)約為1.2 mg/L，無死亡的最大劑量(LC0)約為0.6 mg/L。

2.2 克螨特對斑馬魚的LC50和SC 不同濃度克螨特處理組斑馬魚的死亡數和致死率見表1。根據表1中各濃度克螨特處理組斑馬魚的96 h死亡數和致死率，計算出96 h斑馬魚的 LC50為0.909 mg/L，置信區間為0.876 ～0.943 mg/L，SC為 0.091 mg/L。

表1 各濃度克螨特處理組斑馬魚的96 h死亡數和死亡率

2.3 LC50和SC的驗證 根據以上試驗得出的斑馬魚LC50和SC進行試驗驗證。試驗表明，斑馬魚LC50的3個組死亡數分別為14、16和15尾;SC的3個組沒有魚死亡。這表明斑馬魚的SC是可信的。顯著性分析表明，斑馬魚LC50的理想死亡尾數和LC50的實際死亡尾數沒有顯著差異，表明LC50的結果也是可信的。

3 討論

該試驗將藥物加入斑馬魚所生活的水中，它們會自主連續地從溶液中吸收藥物，通過調節水中藥物濃度來改變給藥劑量。在預試驗中發現，隨著水中克螨特藥物濃度的增加，斑馬魚在一定時間內的死亡率會相應增加，說明產生毒性的藥物濃度與斑馬魚的死亡率呈正相關，因此可以用LC50來表示藥物毒性大小。筆者隨機選取體質健壯且大小均勻的斑馬魚進行試驗，每組受試數均為30尾，這為判別藥物的作用效果提供了良好條件，大大降低了因為研究材料的質量不佳和數量不足從而導致試驗誤差較大的可能性。

研究表明，克螨特農藥在96 h對鱒魚 LC50為0.118 mg/L［8］，藍鰓翻車魚 LC50為 0.197 mg/L［9］，鯉魚 LC50為 1.0 mg/L［10］。筆者通過克螨特農藥對斑馬魚毒性的研究發現，96 h克螨特對斑馬魚的LC50為0.909 mg/L。依據試驗所得斑馬魚對克螨特LC50和SC進行試驗驗證。結果表明，斑馬魚在LC50下的理想死亡尾數和實際死亡尾數并沒有顯著性差異，表明試驗結果可信。在克螨特SC條件下飼養96 h，也沒有造成斑馬魚的死亡，說明斑馬魚對克螨特SC的結果也可信。這些結果為今后利用克螨特殺滅斑馬魚感染寄生蟲的用藥量提供了重要的數據基礎。

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