香菇子實體多糖得率的差異性研究

張建軍，謝麗源，彭衛(wèi)紅，鄧 靜 ，段 丹，吳志鵬，3，龔燕川，吳振亞，3，王耀輝，3，張 言，3，龔加路，鐘正丹(．四川理工學(xué)院生物工程學(xué)院，四川自貢 643000;．四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料所，四川成都 60066;3．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，四川雅安 65000)

香菇［Lentinus edodes(Berk．)Sing］為擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)擔(dān)子菌綱(Basidiomycetes)傘菌目(Agaricales)口蘑科(Tricholomataceae)香菇屬(Lentinus)真菌［1］。香菇是食藥兩用的菌類物質(zhì)，味道鮮美，香氣沁人，營養(yǎng)豐富，素有“山珍之王”之稱，是高蛋白、低脂肪的營養(yǎng)保健食品。香菇多糖(lentinan，LNT)是香菇子實體提取物中主要的藥用成分之一，具有多方面的藥理作用［2］。國內(nèi)外大量研究資料表明，香菇多糖具有抗病毒、抗腫瘤、抗凝血、抗氧化、降血糖、消炎等生理活性，同時還是一種非特異性免疫調(diào)節(jié)劑(增強(qiáng)劑)，它能激活免疫細(xì)胞，提高機(jī)體的免疫功能，刺激干擾素形成等功能，且對正常細(xì)胞沒有毒副作用，并且其硫酸酯化多糖還具有抗HIV病毒作用［3］。

由于香菇多糖有如此多的功效，近年來，人們對香菇多糖的研究也越來越深入，主要集中在香菇多糖的提取與純化、多糖的測定以及多糖的構(gòu)效分析等［4］，且由此開發(fā)了包括香菇多糖片、香菇多糖膠囊和口服液等香菇多糖產(chǎn)品［5］。但上述研究忽略了栽培環(huán)節(jié)對香菇多糖含量的影響，而栽培環(huán)節(jié)對穩(wěn)定多糖品質(zhì)至關(guān)重要，其中不同潮次、不同產(chǎn)地的香菇多糖得率具有一定的差異性［6－7］，可造成香菇多糖產(chǎn)品質(zhì)量不穩(wěn)定，因此，穩(wěn)定的香菇多糖來源對于香菇多糖產(chǎn)品的開發(fā)至關(guān)重要。筆者在穩(wěn)定的栽培條件下培養(yǎng)并獲得香菇子實體，對不同潮次、部位、成熟度的香菇多糖得率進(jìn)行研究，明確它們之間香菇多糖得率的差異，以期為更好地開發(fā)和利用香菇多糖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 供試菌株 從四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院的栽培場采集6份香菇子實體樣本，分別編號為 L1、L2、L3、L4、L5 和 L6，其中每份樣本都包括不同潮次、不同部位和不同成熟度的香菇子實體。

1．2 主要儀器與設(shè)備 紫外分光光度計UV1240:日本島津儀器公司;雙重蒸餾水蒸餾器:四川優(yōu)普超純科技有限公司;GLI66-Ⅱ臺式高速離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠;100 g手提式高速萬能粉碎機(jī):溫嶺市林大機(jī)械有限公司;HH．S11-6-恒溫水浴鍋:北京長安科學(xué)儀器廠;ALC-Z10．3電子天平:北京賽多利斯天平有限公司;R-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:鞏義市英峪高科技儀器廠;SHB-Ⅲ循環(huán)水多用真空泵:鄭州長城科工貿(mào)有限公司;試管及三角瓶等常用玻璃儀器。

1．3 試驗試劑 葡萄糖對照品:sigma公司;苯酚、濃硫酸、鹽酸、無水乙醇、95%乙醇(均為分析純):成都長征生物試劑公司。

1．4 樣本的預(yù)處理 香菇子實體樣本采摘回來后，將3個潮次的子實體分開，分別取2份6個樣本的第3潮次香菇子實體，其中1份將菌蓋和菌柄2個部位分開，另1份按菌蓋直徑(d)大小分為3個等級(其中d＞6．0 cm的為1級品，6．0 cm ＞d＞4．0 cm 的為2 級品，4．0 cm ＞d ＞2．5 cm 的為3極品)，分別烘干，備用。

1．5 香菇多糖提取測定

1．5．1 多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。采用苯酚－硫酸法，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程:Y=0．008 9X－0．003 2，R2=0．999 8，線性關(guān)系良好。

1．5．2 香菇多糖的提取測定。采用水提醇沉法［8］，得到粗多糖，然后加適量水將粗多糖重新完全溶解，定容后稀釋適當(dāng)倍數(shù)，用苯酚－硫酸法［9］測定490 nm波長下的吸光度，計算在標(biāo)準(zhǔn)曲線上對應(yīng)吸光度的多糖濃度。重復(fù)3次，取平均值。計算公式:多糖得率其中，香菇水分按10%計。

2 結(jié)果與分析

2．1 不同潮次香菇多糖得率比較 由表1可知，6個香菇樣本第1潮與第2潮香菇多糖得率均存在顯著差異(P＜0．05)，且第1潮香菇多糖得率低于第2潮香菇多糖得率，第1潮與第3潮香菇多糖得率也均存在顯著差異(P＜0．05)，且第1潮香菇多糖得率低于第3潮香菇多糖得率，除菌株L2外，其余菌株第2潮與第3潮香菇多糖得率均差異不顯著;6個香菇樣本第1潮與第2潮香菇多糖得率差異均達(dá)到極顯著水平(P＜0．01)，除菌株L1、L2外，其余菌株第1潮與第3潮香菇多糖得率差異均未達(dá)到極顯著水平，除菌株L2外，其余菌株第2潮與第3潮香菇多糖得率差異也未達(dá)到極顯著水平，且第2潮與第3潮香菇多糖得率高于第1潮香菇，因此，將第2潮或第3潮香菇子實體作為采收用香菇較適宜。

表1 不同潮次香菇多糖得率比較 %

由表2可知，第2、3潮香菇多糖得率與第1潮香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)較低，分別為0．177 7和0．075 9，表明它們之間的相關(guān)性不明顯，即第1潮香菇多糖得率與第2、3潮香菇多糖得率之間相關(guān)性不大;第2潮與第3潮香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)為0．775 0，表明第2潮與第3潮菇多糖得率之間存在一定的相關(guān)性，這與上述第2潮與第3潮香菇多糖得率無顯著差異相一致。

2．2 不同部位香菇多糖得率比較 由表3可知，6個香菇樣本菌蓋多糖得率與菌柄多糖得率之間均差異不顯著，即香菇菌蓋與菌柄多糖得率一致。因此，在香菇多糖產(chǎn)品的開發(fā)與生產(chǎn)過程中，將菌蓋與菌柄分別提取香菇多糖沒有實際意義。

表2 不同潮次香菇多糖得率的相關(guān)性分析

表3 不同部位香菇多糖得率 %

由表4可知，香菇菌蓋和菌柄2個不同部位的多糖得率相關(guān)系數(shù)高達(dá)0．986 6，表明菌柄和菌蓋多糖得率之間相關(guān)性明顯，且不同部位的香菇多糖得率差異不顯著，分析原因可能是由于香菇生長過程中菌棒中營養(yǎng)成分在香菇不同部位被均衡地吸收，轉(zhuǎn)化成香菇多糖以及其他的營養(yǎng)物質(zhì)。

表4 不同部位香菇多糖得率的相關(guān)性分析

2．3 不同成熟度香菇多糖得率比較 由表5可知，6個香菇樣本除菌株L3、L4外，其余菌株1級品與2級品香菇多糖得率均差異不顯著，除菌株L4，其余菌株2級品與3級品香菇多糖得率均差異不顯著;除菌株L3外，其余菌株1級品與2級品香菇多糖得率差異均未達(dá)到極顯著水平，除菌株L3、L5外，其余菌株1級品與3級品多糖得率差異均未達(dá)到極顯著水平，除菌株L4外，其余菌株2級品與3級品香菇多糖得率差異均未達(dá)到極顯著水平。表明不同成熟期香菇子實體多糖含量差異不明顯(個別例外)，但考慮到生產(chǎn)成本，最好采摘成熟期的香菇子實體作為生產(chǎn)用原材料。

表5 不同成熟度香菇多糖得率比較 %

由表6可知，不同成熟度香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)均較高(均大于0．900 0)，其中，1級品與2級品香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)為0．926 9，1級品與3級品香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)為0．974 3，2級香菇與3級香菇子實體多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)為0．963 9。表明香菇在不同的生長時期，香菇子實體多糖的積累過程具有較大的相關(guān)性，即香菇多糖的積累伴隨著子實體的生長而合成。

表6 不同潮次香菇多糖得率的相關(guān)性分析

3 結(jié)論與討論

(1)不同潮次香菇多糖得率的研究結(jié)果表明，第1潮與第2、3潮香菇多糖得率均存在顯著差異(P＜0．05)，而第2潮與第3潮香菇多糖得率差異不顯著(個別菌株例外)。第1潮香菇的多糖得率最低，分析認(rèn)為第1潮香菇菌棒中菌絲生長代謝過程中的次級代謝產(chǎn)物含量較少，這些次級代謝產(chǎn)物包括酶和其他生長因子［10］可供出菇的營養(yǎng)需求，因而造成第1潮香菇部分畸形，多糖含量偏低;由于營養(yǎng)物質(zhì)的積累，使得第2潮與第3潮香菇多糖得率相對較高且相差不大，這與文獻(xiàn)［6］不同潮期香菇營養(yǎng)成分的比較研究的結(jié)論相符合。相關(guān)性分析結(jié)果表明，第2潮與第3潮香菇多糖得率與第1潮香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)較低，表明第1潮香菇多糖得率的多少與第2、3潮香菇多糖得率沒有明顯關(guān)聯(lián);第2潮與第3潮香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)為0．775 0，表明第2潮與第3潮菇多糖得率之間存在一定的相關(guān)性，可見，在營養(yǎng)條件充分且香菇生長所需的各種生長因子都具備的情況下，不同潮次的香菇多糖得率具有較大的相關(guān)性。

(2)不同部位(菌柄和菌蓋)香菇多糖得率的研究結(jié)果表明，6個香菇樣本菌蓋多糖得率和菌柄的多糖得率之間均無顯著性差異，且不同部位的香菇多糖得率相關(guān)系數(shù)高達(dá)0．986 6，表明菌柄和菌蓋多糖得率之間相關(guān)性明顯，多糖在香菇不同部位的含量具有一致性，可能是因為香菇生長過程中營養(yǎng)物質(zhì)在不同部位被均衡地吸收，且多糖的積累過程也具有一致性。因此，在生產(chǎn)過程中，將菌蓋和菌柄分開提取香菇多糖沒有實際意義。

(3)不同成熟度香菇多糖得率的研究結(jié)果表明，不同成熟度之間香菇多糖得率差異不顯著(個別菌株例外)，即采收不同成熟期的香菇子實體對香菇多糖的含量影響不大，但考慮到生產(chǎn)成本，建議采收成熟期的香菇子實體作為生產(chǎn)原材料。相關(guān)性分析結(jié)果表明，不同成熟度香菇多糖得率之間的相關(guān)系數(shù)均較高(均大于0．900 0)，表明香菇子實體在不同的生長時期其多糖的積累過程具有較大的相關(guān)性，即香菇多糖的積累伴隨著子實體的生長而合成，該結(jié)論與謝玉策等［11］在香菇多糖含量的影響因素中的研究相符合。

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