北京市昌平區(qū)某奶牛場體細(xì)胞數(shù)超標(biāo)的診斷報(bào)告

文/王天坤 李永清 黃 驊 孟慶更 劉寶華 楊鐵剛 孫寶山 薛 勇

（1北京市昌平區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心；2北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所畜禽疫病防控技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3北京市飼料監(jiān)察所；4北京市昌平區(qū)南口動(dòng)物防疫站；5北京市昌平區(qū)崔村動(dòng)物防疫站）

體細(xì)胞（Somatic Cell，SC）是奶牛生乳中存在的血液白細(xì)胞和脫落的上皮細(xì)胞的總稱。體細(xì)胞數(shù)（Somatic Cell Counts，SCC）是指每毫升生乳中體細(xì)胞的個(gè)數(shù)。健康奶牛生乳中的SCC為2 萬～20 萬個(gè)/mL。SCC是反應(yīng)乳腺感染細(xì)菌或病毒嚴(yán)重程度的標(biāo)記，又稱“金標(biāo)準(zhǔn)”。當(dāng)奶牛乳腺被感染或受機(jī)械損傷后，SCC就會(huì)上升，感染越嚴(yán)重，體細(xì)胞數(shù)越高。SCC增高不僅會(huì)造成奶牛產(chǎn)奶量下降，而且還會(huì)對生乳的化學(xué)成分產(chǎn)生不同程度的影響，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)和乳品加工業(yè)造成嚴(yán)重的損失，給人類的健康帶來威脅。

2015年4月15日，北京市昌平區(qū)某奶牛場報(bào)告，該場20 多頭產(chǎn)奶牛出現(xiàn)體細(xì)胞嚴(yán)重超標(biāo)現(xiàn)象，生乳品質(zhì)受到了影響，以至于乳品廠拒收其生乳，遭受嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，而牛場管理及技術(shù)人員均無法查得病因。于是邀請本單位人員前往牛場進(jìn)行現(xiàn)場診治。通過DHI檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)病牛只生乳中體細(xì)胞數(shù)最高達(dá)930 萬個(gè)/mL，最低100 萬個(gè)/mL，達(dá)到重度乳房炎的程度。臨床觀察發(fā)現(xiàn)，這些奶牛的乳頭或乳房均有不同程度的損傷，表現(xiàn)為紅腫、乳管口開裂、潰瘍；觸診時(shí)，奶牛表現(xiàn)出疼痛（踢腿）。初步診斷為擠奶員操作不規(guī)范導(dǎo)致擠奶機(jī)損傷乳頭，加上牛床不衛(wèi)生引起感染而形成乳房炎。將8 頭SCC最高的奶牛生乳帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌分離和鑒定，結(jié)果如下。

1 細(xì)菌分離鑒定

無菌條件下采集生乳樣品，分別接種于LB瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板以及含5%的犢牛血清的TSA和TSB平板上，37 oC培養(yǎng)過夜，結(jié)果在LB瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上未見細(xì)菌生長，而在TSA和TSB平板上均有白色或金黃色菌落生長。顯微鏡鏡檢發(fā)現(xiàn)，所分離的細(xì)菌均為革蘭氏陽性菌，為葡萄串或短鏈狀。再對所分離細(xì)菌進(jìn)行16s RNA的PCR產(chǎn)物測序進(jìn)行鑒定，結(jié)果獲得2 株表皮葡萄球菌（Staph.Epidemitis），2 株無乳鏈球菌（Strep.Agalactiae）和1株金黃色葡萄球菌（Staph.Chromogenes）。這些細(xì)菌都在自然界天然存在，均可引起奶牛乳房炎。其中，金黃色葡萄球菌藥物治療無多大意義，建議牛場淘汰病牛。

2 藥敏試驗(yàn)

各選取1 株表皮葡萄球菌和無乳鏈球菌以TSA加血清37 oC培養(yǎng)5 h后，取100 μL涂布TSA血清平板，待表面液體被吸干后，將藥敏紙片輕貼于平板上并保持合適的間距（每板7 個(gè)），然后倒置于37 ℃溫箱培養(yǎng)過夜。觀察并測量每個(gè)藥物抑菌圈的直徑，結(jié)果如表1所示。從結(jié)果中可以看出，所分離的細(xì)菌對頭孢噻肟、頭孢氨芐、環(huán)丙沙星高度敏感，而對多黏菌素、慶大霉素有抵抗，對其它藥物表現(xiàn)為不同程度的耐藥性。

3 毒力試驗(yàn)

將分離出的表皮葡萄球菌和無乳鏈球菌在含10%胎牛血清TSB培養(yǎng)平皿上劃線，于37 ℃培養(yǎng)過夜，然后挑取單個(gè)菌落接種到含10%胎牛血清TSB培養(yǎng)液中，240 r／min振蕩搖菌16 h后，測定OD 600值，當(dāng)達(dá)到2.1046時(shí)，再按照0.5 mL/只的劑量腹腔注射5 只8 周齡的BALB/c小鼠，于隔離環(huán)境中飼養(yǎng)，觀察小鼠發(fā)病與死亡情況。結(jié)果為：接種過無乳鏈球菌的小鼠于24 h后100%（5/5）死亡，解剖發(fā)現(xiàn)小鼠肺臟嚴(yán)重出血，對肝臟切面觸片進(jìn)行革蘭氏染色后，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞內(nèi)有大量的短鏈桿菌。這表明小鼠的死亡原因?yàn)闊o乳鏈球菌感染，從而證實(shí)從體細(xì)胞嚴(yán)重超標(biāo)的奶牛乳房內(nèi)分離出的細(xì)菌為高毒力的無乳鏈球菌。

表1 不同藥物的抑菌圈直徑結(jié)果

4 分析與建議

藥敏試驗(yàn)和毒力試驗(yàn)結(jié)果表明，該牛場嚴(yán)重體細(xì)胞數(shù)超標(biāo)的一個(gè)重要病原為無乳鏈球菌感染，該菌具有很強(qiáng)的毒力。該菌常存在于奶牛的皮膚、乳頭及乳房，通過擠乳人員的手、擠乳機(jī)械以及蠅類攜帶而傳播，是奶牛感染乳房炎的主要病原體。其感染后不激發(fā)機(jī)體免疫，目前尚無菌苗可用，因此建議按照如下措施進(jìn)行防治。

4.1 調(diào)整擠奶機(jī)械

要求擠奶員重新校正擠奶機(jī)的負(fù)壓壓力和脈沖頻率，檢查擠奶杯的橡皮奶襯是否老化，然后根據(jù)不同奶牛乳頭形狀調(diào)整擠奶時(shí)間，避免負(fù)壓空吸。

4.2 合理處理患病奶牛

淘汰產(chǎn)奶量低又有嚴(yán)重乳房炎的奶牛；對一些癥狀較輕或體細(xì)胞數(shù)相對較低的奶牛實(shí)施對癥治療：以頭孢噻肟、頭孢氨芐、環(huán)丙沙星3 種敏感抗生素交替進(jìn)行肌肉注射和乳頭灌注，對紅腫的乳頭除藥浴外，還應(yīng)采取外敷消腫等措施。

4.3 對環(huán)境進(jìn)行消毒

開展全面的衛(wèi)生消毒工作，盡可能防止牛只感染病原微生物。