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尿液分析技術(shù)介紹
薛麗華
264000山東省煙臺(tái)市萊山經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心
尿液分析是血、尿、糞傳統(tǒng)的三大常規(guī)檢測(cè)之一。尿沉渣分析儀是對(duì)尿液有形成分的檢測(cè),具有檢測(cè)簡(jiǎn)便、快速、標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化等許多優(yōu)點(diǎn)。但在實(shí)際工作中必須與顯微鏡檢測(cè)相結(jié)合,互相驗(yàn)證,才能為臨床醫(yī)師提供準(zhǔn)確的信息。一旦其中任何一個(gè)項(xiàng)目有異常,則必須進(jìn)行顯微鏡檢測(cè)。
尿液干化學(xué)分析;尿沉渣分析;顯微鏡檢測(cè)
隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,尿液分析發(fā)生了巨大的變化。在尿液有形成分的檢測(cè)中,全自動(dòng)尿液分析儀起到了初篩的作用,顯微鏡檢查為進(jìn)一步檢查有形成分的重要方法。
研究對(duì)象:100份尿液標(biāo)本,男56例,年齡30~45歲;女44例,年齡30~45歲。
測(cè)定方法:桂林華通產(chǎn)的HT-2000尿液分析儀,尿十項(xiàng)檢測(cè)。男性組異常8例,葡萄糖(+)~(+++)5例,潛血(+)1例,蛋白質(zhì)(+)1例,酸堿度異常1例。潛血異常的經(jīng)過顯微鏡檢測(cè)紅細(xì)胞5個(gè)/HP。女性組異常8例,葡萄糖(+)1例,潛血(++)3例,白細(xì)胞(+++)4例。潛血異常經(jīng)過顯微鏡檢測(cè)紅細(xì)胞5~10個(gè)/HP,白細(xì)胞異常經(jīng)過顯微鏡檢測(cè)白細(xì)胞或者膿細(xì)胞5~20個(gè)/HP。見表1和表2。
盡管不同廠家的儀器設(shè)計(jì)上存在差別,但均用微電腦控制,光學(xué)系統(tǒng)采用球面積分析雙波長(zhǎng)反射式光度計(jì)測(cè)定試帶上的顏色變化。尿干化學(xué)試帶上的各測(cè)試塊與尿液中的成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng),使試紙塊發(fā)生顏色變化,顏色變化與尿液中的成分成正比。光源燈發(fā)出的光照射在試帶上的模塊上,顏色越深,吸收光量值越大,顏色越淺,吸收光量值越小,也就是每個(gè)色塊越深其尿液中的有形成分含量越多。①葡萄糖:試帶中含有葡萄糖氧化酶、過氧化物酶、緩沖劑以及作為顯色的鄰聯(lián)甲苯胺。葡萄糖氧化酶把尿中的葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫,在過氧化酶的催化下,過氧化氫作用于鄰聯(lián)甲苯胺,導(dǎo)致其氧化變色。尿中葡萄糖的含量越高,則模塊的顏色越深[1]。②潛血:尿液中的血紅蛋白具有過氧化物酶活性,可使過氧化氫茴香素分解氧化成四甲基聯(lián)苯胺,形成草綠色斑點(diǎn)(完整的紅細(xì)胞)或草綠色(游離血紅蛋白/肌紅蛋白)。紅細(xì)胞尿常見于月經(jīng)期女性。如果尿液中存在大量的紅細(xì)胞,這時(shí)一定要詳細(xì)詢問患者是否處于月經(jīng)期,然后在檢驗(yàn)報(bào)告單上注明原因,避免臨床醫(yī)師誤診。另外,成年女性的白帶污染也能引起假陽性。③蛋白質(zhì):試帶中含有酸堿指示劑溴酚藍(lán)、枸櫞酸緩沖系統(tǒng)以及表面活性劑,當(dāng)指示劑不斷電離并超過其緩沖范圍,試帶就會(huì)出現(xiàn)顏色反應(yīng)。試帶法對(duì)白蛋白的敏感度遠(yuǎn)高于球蛋白、血紅蛋白的敏感度。大劑量應(yīng)用抗生素可致顏色減弱。④酮體:模塊中含有亞硝基鐵氰化鈉,尿液中的酮體與其反應(yīng)后變色。本項(xiàng)目測(cè)試對(duì)乙酰乙酸的敏感度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于丙酮。正常尿液一般呈陰性結(jié)果。⑤比重:多聯(lián)試條尿比重的反應(yīng)區(qū)域內(nèi)的多聚電解質(zhì)對(duì)尿液中的離子濃度非常敏感。當(dāng)離子濃度升高時(shí),多聚電解質(zhì)發(fā)生降低,從而導(dǎo)致酸堿度降低,酸堿指示劑顏色發(fā)生改變,從而反應(yīng)出尿比重的變化。尿液存在一定數(shù)量的蛋白時(shí),可使尿比重增加。⑥酸堿度(pH值):試帶中含有甲基紅和溴麝香草酚藍(lán),變化范圍5.0~8.5。酸性尿呈橙色,堿性尿?yàn)樗{(lán)色[2]。⑦亞硝酸鹽:尿液中的革蘭陰性桿菌將尿中的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽,再與試帶中對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)生成重氮化合物,后者再與四氫苯丙喹啉-3酚偶聯(lián)產(chǎn)生粉紅色。但是陰性結(jié)果并不表示尿液中不存在細(xì)菌,陰性結(jié)果可見于非硝酸鹽轉(zhuǎn)化型細(xì)菌的尿路感染或尿液在膀胱中存在沒有>4 h。飲食中缺乏硝酸鹽或高比重尿可降低亞硝酸鹽的敏感度。所以顯微鏡檢測(cè)顯得尤為重要。⑧尿膽原:對(duì)二甲基苯甲醛與尿膽原發(fā)生特異性反應(yīng)生成紅色。高濃度P-氨基苯酸會(huì)使試帶顏色發(fā)生異常。⑨白細(xì)胞:試帶中的三羧酸吲哚與粒細(xì)胞酯酶反應(yīng)生成吲哚酚,吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)生成紫色化合物。試帶對(duì)尿液中的白細(xì)胞敏感,對(duì)淋巴細(xì)胞不敏感。陽性結(jié)果偶爾可見于一些被陰道分泌物污染的隨機(jī)尿液。大量服用某些抗生素可造成假陰性。任何異常顏色的尿液都能影響試帶的顏色變化。⑩抗壞血酸:抗壞血酸(VC)檢測(cè)可以確定尿液中0~6 mmol/L抗壞血酸。通過檢測(cè)可以了解到人體內(nèi)的VC對(duì)葡萄糖、膽紅素、潛血、亞硝酸鹽等項(xiàng)目的影響程度。強(qiáng)還原性金屬離子,如亞鐵、亞錫、亞銅等會(huì)使VC測(cè)定值升高。

表1 男性組(例)

表2 女性組(例)
尿沉渣分析儀是對(duì)尿液有形成分的檢測(cè),具有檢測(cè)簡(jiǎn)便、快速、標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化等許多優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)在有兩大類,一類是流式細(xì)胞術(shù)分析儀,另一類是影像分析儀。流式細(xì)胞術(shù)分析儀有2種染料:一種是非啶染料,主要染細(xì)胞的核酸成分;另一種為羧花氫染料,它穿透力較強(qiáng),與細(xì)胞質(zhì)膜的脂層發(fā)生結(jié)合,不僅能將各種有形成分,如細(xì)胞、管型等定量,還能進(jìn)一步識(shí)別各種顆粒,如細(xì)菌、霉菌、結(jié)晶等。檢測(cè)原理:當(dāng)一個(gè)尿液標(biāo)本被稀釋液稀釋后,經(jīng)過染色后靠液壓作用通過鞘液流動(dòng)池,被一種無粒子顆粒的鞘液包圍,使每個(gè)細(xì)胞以單個(gè)縱列的形式通過中心軸線,每一份尿液中的有形成分,如細(xì)胞、細(xì)菌等被氬激光光束照射,發(fā)出不同的熒光強(qiáng)度。儀器通過散射光波形、熒光波形和電阻抗值的大小一起綜合分析,得出細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞容積等多個(gè)信息。優(yōu)點(diǎn):流式細(xì)胞術(shù)分析儀與手工顯微鏡檢測(cè)相比有以下幾點(diǎn)優(yōu)勢(shì):①不需離心尿液,可自動(dòng)進(jìn)樣本;②所需標(biāo)本量很少;③檢測(cè)速度快,可以報(bào)告多個(gè)參數(shù),如紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型、細(xì)菌5個(gè)定量參數(shù)以及霉菌、病理管型、結(jié)晶以及精子5個(gè)定性參數(shù),尤其是對(duì)于生殖系統(tǒng)疾病的檢測(cè)更是大大提高了參數(shù)質(zhì)量,為臨床醫(yī)師提供了非常有價(jià)值的檢驗(yàn)數(shù)據(jù);④檢測(cè)過程中的總粒子數(shù)范圍0~4 000,與目測(cè)顯微鏡相比,大大提高了準(zhǔn)確性;⑤操作順序統(tǒng)一,便于質(zhì)量控制。缺點(diǎn):此儀器不能檢測(cè)出滴蟲、脂肪滴、病理及藥物結(jié)晶;當(dāng)尿中存在大量細(xì)菌、酵母菌時(shí)可能干擾其他項(xiàng)目的計(jì)數(shù)。
美國(guó)臨床檢驗(yàn)委員會(huì)(NCCLS)曾經(jīng)對(duì)尿沉渣的檢查做出如下規(guī)定:①實(shí)驗(yàn)室要按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化要求準(zhǔn)確分析,強(qiáng)調(diào)分析的重復(fù)性和標(biāo)準(zhǔn)化;②用單位體積報(bào)告尿沉渣數(shù)量,不能用低倍鏡視野或者高倍鏡視野。
美國(guó)臨床檢驗(yàn)委員會(huì)(NCCLS)對(duì)尿沉渣鏡檢的范圍提出要求:①臨床醫(yī)師提出檢測(cè)通知;②患者的病情需要;③尿液分析中出現(xiàn)任何一項(xiàng)參數(shù)異常。
尿有形成分的檢測(cè)必須進(jìn)行以下規(guī)范化的操作:①尿液最好選擇第1次晨尿;②尿量應(yīng)該標(biāo)準(zhǔn)化10 mL;③離心時(shí)間5 min;④離心速度400 G;⑤用統(tǒng)一方式鏡檢;⑥用統(tǒng)一醫(yī)學(xué)術(shù)語、報(bào)告方式以單位體積定量報(bào)告,建議用XX細(xì)胞(或管型)/μL的報(bào)告方式,有便于臨床醫(yī)師對(duì)患者進(jìn)行更好地觀察。
影像分析術(shù)進(jìn)入我國(guó)時(shí)間較短,其實(shí)際應(yīng)用效果還有待于進(jìn)一步探討。作為一名基層服務(wù)中心的檢驗(yàn)人員,一定要有扎實(shí)的理論功底,還要有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。在基層工作中最常用的還是干化學(xué)分析儀,其具有操作簡(jiǎn)便、快速檢測(cè)、同時(shí)獲得多項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果等優(yōu)點(diǎn),但是在實(shí)際工作中必須與顯微鏡檢測(cè)相結(jié)合,互相驗(yàn)證,才能為臨床醫(yī)師提供準(zhǔn)確的信息。一旦其中任何一個(gè)項(xiàng)目有異常,則必須進(jìn)行顯微鏡檢測(cè)。
[1]熊立凡,李樹仁.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2003.
[2]劉成玉,吳曉蔓.臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007.
Development of urine analysis
Xue Lihua
Laishan Economic Development Zone Community Health Service Center of Yantai City,Shandong Province 264000
Urine analysis is one of blood,urine,excrement traditional three conventional detection.Urinary sediment analyzer is the detection of urine formed element.It has many advantages,such as simple,rapid,standardization,automation.But in the practical work,it should be combined with microscope detection,they validate each other in order to provide accurate information for clinicians.Once any one project there is abnormal,it must be given a microscope detection.
Urine dry-chemical analysis;Urinary sediment analyzer;Microscope detection
10.3969/j.issn.1007-614x.2015.17.62