大腸桿菌檢驗方法的探究與分析

彭建瓊629200四川省射洪縣人民醫院

大腸桿菌檢驗方法的探究與分析

彭建瓊
629200四川省射洪縣人民醫院

目的：探討不同檢驗方法對大腸桿菌檢出率的影響。方法：分別采用一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法、離心-雙重濾膜法檢測模型藥物呋喃唑酮片的大腸桿菌，觀察檢出率。結果：一次離心法：膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，無氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基無菌落長出；二次離心法和離心-濾膜法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基無菌落長出；離心-雙重濾膜法：膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基可觀察到明顯的菌落。結論：與其他方法相比，離心-雙重濾膜法對大腸桿菌的檢出率較高，同時操作更加簡便。

大腸桿菌；檢驗方法；呋喃唑酮片

大腸菌群是一種革蘭陰性菌，屬于兼具需氧和厭氧性的無芽孢桿菌，能夠發酵乳糖并產酸產氣。這種菌主要存在于人類及其他恒溫動物的糞便中，因此需要通過檢測大腸桿菌情況來判斷食物、藥品等是否受到糞便的污染，是口服藥物的常規必須檢測的項目之一。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗方法，檢測靈敏度有所不同。呋喃唑酮片是一種常用于治療由大腸桿菌、痢疾桿菌引發的腸炎及菌痢等疾病的抗菌藥[1]。由于其的抗菌特性，常規檢驗方法難以檢測出呋喃唑酮片中的大腸桿菌。因此本文以呋喃唑酮片為模型藥物，考察一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法四種不同的大腸桿菌檢驗方法檢測大腸桿菌的情況，現報告如下。

資料與方法

選取規格100mg/片的呋喃唑酮片；采用兩種不同規格的混合纖維素酯微孔濾膜，孔徑分別為1.20μm和0.45μ m；選用中國藥品生物制品檢定所提供的含伊紅美藍（eosinmethyleneblue，EMB）瓊脂的大腸桿菌生化反應培養基，以及膽鹽乳糖增菌液；大腸桿菌使用CMCC（B）44102。

方法：①供試液的制備：取呋喃唑酮片與大腸桿菌CMCC（B）適量，制成含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液，待用。②一次離心法：將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心（3000/min，30min），取上清液適量，用于大腸桿菌的檢驗。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現渾濁和產氣現象；另取上清液，接種于伊紅美藍瓊脂培養基上，進行平板分離檢驗，培養兩周后，觀察培養基上大腸桿菌菌落生長情況。③二次離心法：將所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液離心（3000/min，30min），充分取上清液，再次離心（3000/min，30min），取上清液適量，用于檢驗。將所取上清液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h，觀察增菌液是否出現渾濁和產氣現象；另取上清液適量，接種于伊紅美藍瓊脂培養基上[2]，進行平板分離檢驗，培養兩周后，觀察培養基上大腸桿菌菌落生長情況。④離心-濾膜法：取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量，離心（3000/min，30min），取上清液，經0.45μm混合纖維素酯微孔濾膜過濾后，將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗。取所得溶液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現渾濁和產氣現象；另取部分溶液接種于伊紅美藍瓊脂培養基上，進行平板分離檢驗，培養兩周后，觀察培養基上大腸桿菌菌落生長情況。⑤離心-雙重濾膜法：取所制得的含大腸桿菌的具有呋喃唑酮成分的供試液適量，離心（3000/min，30min），取上清液，分別依次經3.0μm和0.45μm孔徑的混合纖維素酯微孔濾膜過濾后，將所得溶液用于大腸桿菌的檢驗。取適量溶液加入膽鹽乳糖增菌液中，增菌48h后，觀察增菌液是否出現渾濁和產氣現象；另取部分溶液接種于伊紅美藍瓊脂培養基上，進行平板分離檢驗，培養2周后，觀察培養基上大腸桿菌菌落生長情況。

觀察指標：根據膽鹽乳糖增菌液試驗和伊紅美藍瓊脂培養基試驗判斷大腸桿菌的檢測。膽鹽乳糖增菌液試驗中，若增菌48h后增菌液出現渾濁（+）和產氣現象（+），則認為檢出大腸桿菌（+/+），否則為未檢出（+/-、-/+或-/-）；伊紅美藍瓊脂培養基試驗中，培養2周后，若培養基上產生有金屬光澤的紫色菌落，則認為有大腸桿菌檢出（+），否則為未檢出（-）。

統計學分析：采用SPSS18.0統計學軟件進行統計學處理，若P＜0.05則認為組間差異有統計學意義。

結果

一次離心法：膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，無氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基無菌落長出，認為未檢出大腸桿菌；二次離心法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基無菌落長出；離心-濾膜法：膽鹽乳糖增菌液澄清且無氣體產生[3]，伊紅美藍瓊脂培養基無菌落長出；離心-雙重濾膜法：膽鹽乳糖增菌液渾濁且有氣體產生，伊紅美藍瓊脂培養基可觀察到明顯的菌落。采用4種不同的大腸桿菌檢驗方法檢驗呋喃唑酮片大腸桿菌的結果，見表1。

表1 采用4種不同的大腸桿菌檢驗方法檢驗呋喃唑酮片大腸桿菌結果比較

討論

人們服用被糞便污染的食品及藥品后，有被其中可能存在的腸道致病菌等病原微生物感染的危險，因此常通過檢測大腸桿菌用來判斷食品或藥品等是否被糞便污染[4]。一次離心法、二次離心法、離心-濾膜法以及離心-雙重濾膜法都是常用的大腸桿菌檢驗方法，但對于呋喃唑酮片這類本身具有抑菌特性的抗菌藥物來說，常規檢測方法往往難以檢測出其中含有的大腸桿菌。本實驗中，一次離心法、二次離心法和離心-濾膜法，膽鹽乳糖增菌液試驗和伊紅美藍瓊脂培養基試驗均認為未檢出大腸桿菌[5]，其中，一次離心法膽鹽乳糖增菌液略顯渾濁，而二次離心法中增菌液澄清，加之兩種方法都沒有檢測到氣體產生，因此并不能認為一次離心法有大腸桿菌檢出，這種渾濁可能與離心不完全有關。4種檢測方法中，只有離心-雙重濾膜法試驗均呈陽性，且伊紅美藍瓊脂培養基中可觀察到明顯的深紫色、有金屬光澤的大腸桿菌菌落，認為有大腸桿菌檢出[6]，可見離心-雙重濾膜法更適用于對呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢測。因為離心-雙重濾膜法經離心和兩次濾膜過濾，使呋喃唑酮的藥物濃度降低至其有效抑菌濃度之下[7]，因此檢測大腸桿菌的靈敏度更高。所以將離心-雙重濾膜法用于呋喃唑酮這類抗菌藥物的大腸桿菌檢驗具有一定的應用前景，有待進一步的研究。

[1] 張全溫,馮云.呋喃唑酮片大腸桿菌的檢驗方法探究[J].中國醫藥指南,2012,10（29）：440-441.

[2]付興祥,張忠平,張海琴,等.大腸桿菌自家滅活油乳苗的制備及疫苗質量檢驗[J].現代農業科技,2013,24（5）：274,276.

[3]林濤,蘭敏,馮小軍,等.VIDAS-VTTEK法快速檢驗食品中大腸桿菌0157的研究[J].中國衛生檢驗雜志,2008,18（8）：1660-1662.

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[7]白秀芝.小檗堿甲氧芐啶片中大腸桿菌的檢驗[J].微生物學雜志,2004,24（6）：64.

圖2

圖3

圖4

討論

上述幾種情況在臨床檢驗工作中比較常見，我們通過對血液分析儀結果顯示的數據、圖形和報警進行分析，對顯示的異常情況進行分析，尋找原因，防止差錯的發生。這就要求檢驗操作人員嚴格執行儀器操作規程，掌握儀器的工作原理和一定的臨床知識。血液分析儀欲獲得準確、可比的結果，除按照規定校準外，還需要做好日常的質量控制[2]，使檢驗的結果準確、可靠，才能在疾病的診斷和治療中發揮最大作用。

參考文獻

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[2] 葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].南京：東南大學出版社,2006：141-142.

Explorationandanalysisofthemethodfortheinspectionofescherichiacoli

PengJianqiong
ThePeople'sHospitalofShehongCounty,SichuanProvince629200

Objective：Toinvestigatetheeffectofdifferenttestmethodsonthedetectionrateofescherichiacoli.Methods：One centrifugalmethod,twocentrifugalmethod,thecentrifugalfiltrationmembranemethodandthecentrifugaldoublefiltration membranemethodwereusedtodetecttheescherichiacoliinfurazolidonetablet.Results：Inonecentrifugalmethod,theincreasing bacterialliquidofbilesaltlactosewasslightlyturbid,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadno bacterialcolonylength.Intwocentrifugalmethodandthecentrifugalfiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidof bilesaltlactosewasclear,andtherewasnogas,culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadnobacterialcolonylength.Inthe centrifugaldoublefiltrationmembranemethod,theincreasingbacterialliquidofbilesaltlactosewasturbid,andtherewasgas, culturemediumofeosinmethyleneblueagarhadobviouscolony.Conclusion：Comparedwithothermethods,thedetectionrateof thecentrifugaldoublefiltrationmembranemethodforescherichiacoliwashigh,andtheoperationwasmoreconvenient.

Escherichiacoli；Testmethod；Furazolidonetablet

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.70