微生物限度培養器在微生物限度檢查中的適用性研究

任嘉 柳海霞730000甘肅奇正藏藥有限公司

微生物限度培養器在微生物限度檢查中的適用性研究

任嘉 柳海霞
730000甘肅奇正藏藥有限公司

目的：微生物限度培養器在微生物限度檢查中的適用性。方法：借助微生物限度培養器檢驗5種標準菌株及其回收率，并對屈臣氏水、含抑菌成分的藥品進行相應的微生物限度檢驗。結果：用《微生物限度培養器》與用《藥典》規定的薄膜過濾法的檢驗結果相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論：在微生物限度檢查中，微生物限度培養器適用于日常的微生物檢驗，比藥典規定的過濾方法操作更便捷，且增大了濾膜面積，提高過濾效果。

微生物限度；微生物限度培養器；適用性

根據《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《藥典》）2010年版一部附錄《微生物限度檢查法》[1]的規定，所有藥品生產用工藝用水都需要用薄膜過濾法進行微生物限度檢查，且用薄膜過濾法對含有抑菌作用的產品進行檢查。但是，在實際實驗操作過程中，薄膜過濾法主要通過濾膜過濾樣品后在培養基表面粘貼培養，計數、判定結果。實驗操作步驟比較繁瑣，操作也易造成污染，影響實驗結果。近年來，隨著微生物限度檢查技術的日益成熟，很多新技術，如微生物限度培養器的應用逐漸得到行業內的使用認可。這里根據《中國藥品檢驗標準操作規范》[2]、《藥品微生物檢驗技術》[3]及有關文獻，有針對性地分析微生物限度培養器在微生物限度檢查中的適用性[4，5]。

實驗材料

實驗設備：HTY-302G型微生物限度檢驗儀；S60微生物限度培養器。

菌種：①大腸埃希菌[CMCC（B）44 102]；②枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63 501]；③白色念珠菌[CMCC（F）98001]；④金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]；⑤黑曲霉[CMCC（F）98003]；⑥黏質沙雷氏菌[CMCC41003]。上述標準菌株均購自中國醫學細菌保藏中心，驗證試驗所用的菌株均為第3代。

實驗培養基：硫乙醇酸鹽液體培養基（1405132）、營養瓊脂（140606）、營養肉湯培養基（140125）、改良馬丁培養基（141124）、改良馬丁瓊脂培養基（140105），以上培養基均購自北京三藥科技有限公司。

供試品：青鵬軟膏、紅花如意丸、板藍根顆粒、潔白丸；飲用水為外購屈臣氏水。

方法

培養器的性能確認：微生物限度培養器工作原理與薄膜過濾法一致；培養基安裝在微生物限度檢測儀上，杯內注入供試液，減壓過濾后取下培養皿并翻轉，將培養基澆注于濾膜集菌反面，凝固后于規定溫度培養。①檢查密閉性能：檢查濾膜支撐體與杯體是否緊密連接；加入供試液后靜置觀察，看濾膜支撐體和杯體的接縫處是否存在滲漏現象（可以用濾紙測試）；操作時需要培養器能便捷快速安裝與拆卸至底座上（防止操作污染）。②檢查過濾性能：在濾座上安裝培養器后，向下按壓，使培養器的濾膜緊貼濾座表面的多孔板上；然后將杯蓋取下，用供試液加入杯體中，打開開關，進行抽濾；在抽濾過程中，培養器應保持抽濾順暢、不漏液，觀察濾膜是否有破裂現象。③檢查無菌性能：用于微生物限度檢查，微生物限度培養器應符合無菌檢驗標準；取檢查過上述功能的10套培養器，過濾體積為100mL、濃度0.9％的生理鹽水（已滅菌），收集濾液，合并后按《藥典》2010年版二部附錄進行薄膜過濾法無菌檢查，結果均符合無菌要求。④檢查截留性能：微生物限度培養器應能有效截留微生物的能力；選取黏質沙雷氏菌為挑戰菌[6]，將含有50～100個CFU的黏質沙雷氏菌濃度0.9％的100mL無菌生理鹽水加入培養器中進行過濾，收集濾液，接種到兩份裝量為40mL的營養肉湯培養基中，置于35℃無菌培養48h后觀察結果，應無菌生長；將過濾后的濾膜接種在營養肉湯培養基中同條件進行培養，應有菌生長，同法檢查10套培養器，結果均應符合要求。⑤檢查微生物的回收率：為了更好地完成日常工作，借助培養器看能否準確反映樣品中的微生物菌落數。選取《藥典》2010年版收載的驗證用5種試驗菌進行試驗。按藥典規定，制備5種菌稀釋液，采用平皿法準確計數，將5種菌液分別通過培養器和一般過濾器過濾，培養器為試驗組，《藥典》收載的薄膜過濾法為對照組，對比兩組數據來判斷有無統計學差異；判斷培養器的回收性能。將兩組數據進行t檢驗，結果顯示對所實驗的5種菌的回收率無統計學差異（P＞0.05），見表1。

表1 5種試驗菌的回收率實驗結果

確定培養器的適用性：選取青鵬軟膏、紅花如意丸、板藍根顆粒、潔白丸、屈臣氏水作供試品，按《藥典》2010年版規定的薄膜過濾法進行計數，同上試驗組為培養器，對照組為藥典規定薄膜過濾法，以兩組數據之間有無明顯的統計學差異作為判斷；選取上述藥品制備供試液，按《藥典》規定消除抑菌性后制成1：10供試液備用，取10mL供試液加入培養器與過濾器中，等稀釋液沖洗濾膜；飲用水按上法操作，不用稀釋液沖洗，將培養器和濾膜置規定條件培養（上述實驗均做平行樣品），逐日點計，計數結果進行對比。對兩組數據進行t檢驗，5種樣品的細菌計數結果無統計學差異（P＞0.05），見表2。

表2 微生物限度的適用性結果分析

討論

培養器與傳統濾器通過薄膜過濾法對5種試驗菌金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、黑曲霉、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌的回收率都達70％以上；且水質樣品和4種含有抑菌性成分的藥品經兩種過濾方式對比測定的結果，無統計學差異。實驗結果顯示，微生物限度培養器與《藥典》規定的過濾方法在應用原理、性能特點和基本結構上，檢測結果均一致，完全適用于水質以及藥品的微生物限度檢查，并且對于普通薄膜過濾法存在著很大優勢。

在微生物回收率的實驗過程中，發現在菌落形成的速度方面及典型菌落形態方面，微生物限度培養器也都要優于傳統過濾方法，更適合日常檢驗工作中實驗人員對菌落的認知與判斷，更適用于微生物限度的檢查。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）2010年版[S].北京：中國醫藥科技出版社,2010：附錄79-88.

[2]中國藥品生物制品檢定所,中國藥品檢驗總所.中國藥品檢驗標準操作規范2010年版[M].北京：中國醫藥科技出版社,2010：351-407.

[3]蘇德模,馬緒榮.藥品微生物學檢驗技術[M].北京：華齡出版社,2007：221-227.

[4]黃英.14種中成藥微生物限度檢驗方法研究[J].中國執業藥師,2013,10（3）：27-30.

[5]肖雨清,汪選斌,姜美蓉,等.薄膜過濾反注培養基法檢查抑菌藥品微生物限度[J].中國醫院藥學雜志,2012,25（3）：200-202.

[6]張海嬰,梁巧,高冬梅,等.微生物檢測的挑戰性試驗[J].生命科學儀器,2010,12（8）：50-54.

表1 兩組患者的診斷效果比較[例（％）]

高壓注射器是一種可控制注射速率的注射儀器，將它使用在造影劑的注射過程中，具有以下優點：①高壓注射器的注射速率始終保持一致，克服了手推式注射法注射速率不均的缺陷；同時，它還允許注射造影與CT掃描同時進行，機動靈活地抓掃各臟器的動脈期及靜脈期，甚至可以得到任何時期的圖像，對疾病的診斷具有很大作用。②高壓注射器的針筒加熱功能良好，能夠幫助造影劑順利進入患者體內，減少了造影失敗的幾率?；谝陨蠋讉€優點，16層螺旋CT增強掃描所得到的診斷結果才會優于MRI。需要注意的是，在16層螺旋CT增強掃描中應用高壓注射器需要做好以下幾點：①高壓注射器的操作程序要嚴格，嚴禁隨意更改、顛倒操作程序，以防止高壓注射器死機。②在造影劑抽吸完畢之后，要對針筒進行檢查，查看其中是否還有空氣沒有排出，如果有，則要將其排出。③在調用高壓注射器的預案之前，首先要對預案進行確認，如確認高壓注射器的注射劑量、注射速率，在核對無誤后按確認鍵。

綜上所述，16層螺旋CT增強掃描中應用高壓注射器進行注射，能夠提高診斷效果，而在應用過程中則需要注意嚴格操作程序等問題。

參考文獻

[1]金鏑,王耀春.32層螺旋CT增強掃描中高壓注射器的應用與護理體會[J].中國實用醫藥,2012,19（13）：193-194.

[2]鄧八妹,梁煥蓮.高壓注射器在螺旋CT增強掃描中的應用及效果觀察[J].齊魯護理雜志,2012,9（16）：33-34.

[3] 張冬梅.CT增強掃描中應用高壓注射器的護理研究[J].藥物與人,2014,12（6）：255-256.

[4]德吉.螺旋CT增強掃描中高壓注射器的應用及護理體會[J].西藏科技,2014,16（3）：45-46.

[5]沈文,張靈敏,劉金有.高壓注射器在64排螺旋CT增強掃描中的護理應用[J].哈爾濱醫藥,2014,22（4）：270-271.

Applicabilityofmicrobiallimitcultureinmicrobiallimittest

RenJia,LiuHaixia
GansuQizhengTibetanMedicineCoLtd730000

Objective：Applicabilityofmicrobiallimitcultureinmicrobiallimittest.Methods：Testingof5standardstrainsand theirrecoveryratebymicrobiallimit,themicrobiallimittestofWatsonswateranddrugcontainingantimicrobialcomponents. Results：Comparisonofmembranefiltrationmethodwithmicrobiallimitcultureformembranefiltration,therewasnostatistical significance（P＞0.05）.Conclusion：Inmicrobiallimittest,microbiallimitculturedeviceissuitableforroutinemicrobiological examination,anditismoreconvenienttooperateandincreasethesizeofthefilter,andimprovethefilteringeffect.

Microbiallimit,Microbiallimitculture,Applicability

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.30.64