投喂蠶豆對羅非魚肝損傷及非特異性免疫功能的影響

陳度煌

（福建省淡水水產研究所，福建福州 350002）

羅非魚是我國淡水養殖的主要水產品之一。研究表明，投喂蠶豆可使羅非魚肉質變緊硬而爽脆，不易煮爛，切成魚絲不易拉斷，韌性和咀嚼性增加，風味獨特，是改善羅非魚肉質的一種獨特方式，有利于羅非魚加工和出口，顯著提高了養殖的經 濟 效 益 （ 倫 峰 ，2006；Grigorakis 和 Alexis，2005）。而目前有關投喂蠶豆對魚體免疫力影響的研究卻鮮見報道。本試驗用浸泡蠶豆、配合飼料飼養羅非魚，研究投喂蠶豆對羅非魚肝損傷及非特異性免疫功能的影響，以期為更合理使用蠶豆進行肉質脆化提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗用新吉富羅非魚（NEW GIFT，Oreochromis niloticus）由福建省淡水水產研究所榕橋試驗基地提供，初始體重為 （118.62±10.28）g，每桶放養 10 尾。

1.2 試驗設計 試驗設兩個處理：試驗組投喂浸泡蠶豆，對照組投喂配合飼料，每組設3個重復。餌料營養水平測定值如表1所示。

表1 餌料營養水平 %

1.3 飼養管理 試驗在玻璃鋼圓桶中進行，每個圓桶內徑100 cm，高度90 cm，水深60～70 cm，使用小循環系統使其保持微流水狀態。試驗開始前，羅非魚用3%食鹽水消毒后放入暫養池，進行為期7 d左右的適應性馴化，待魚適應后正式試驗。采取固定人員專門管理：

（1）飼料和蠶豆嚴格按組投喂，投喂前將蠶豆于1%食鹽水中浸泡24 h。每日投餌2次，投喂時間一般為上午 7∶00 ～ 7∶30，下午 17∶00 ～ 17∶30。投飼量根據魚攝食狀況而定，一般為魚體重量的3%～4%，詳細記錄各組別的實際投餌量。

（2）每天定時測定水溫。溶解氧，記錄魚活動情況，試驗期間水溫維持在26.0～31.5℃，溶解氧5.0～ 7.0 mg/L.。

（3）試驗用水為經過曝氣的自來水，每天進行加換水，排污，一般每天換水量在30%～40%，試驗時間為60 d。

1.4 樣品采集 試驗期滿羅非魚禁食24 h后，參考白潔（2008）的方法適當修改，每桶取樣5尾，用一次性注射器進行心臟采血，置于1.5 mL離心管內，于室溫下靜置2 h，然后放到4℃冰箱16 h，再以2500 r/min離心析出血清，-40℃保存，備用待測。

1.5 測定指標和方法 天冬氨酸轉氨酶（AST）、丙氨酸轉氨酶（ALT）、腺苷脫氨酶（ADA）、乳酸脫氫酶 （LDH）、 酸性磷酸酶 （ACP）、 堿性磷酸酶（AKP）、髓過氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）均采用試劑盒測定，測試盒購自南京建成科技有限公司，具體操作方法及計算方法參照試劑盒說明書。

1.6 數據統計與分析 試驗結果采用 “平均值±標準差”表示。用SPSS 17.0對數據進行方差分析，顯著性水平為0.05。

2 結果與分析

2.1 投喂蠶豆對羅非魚肝損傷的影響 由表2可見，投喂蠶豆組的羅非魚血清AST、ALT和ADA活性分別較對照組提高13.67%、12.93%、19.12%（P ＜ 0.05），LDH 活性無顯著變化（P ＞ 0.05）。

表2 投喂蠶豆對羅非魚肝損傷的影響

2.2 投喂蠶豆對羅非魚非特異性免疫功能的影響 由表3可見，投喂蠶豆組的血清ACP和AKP活性與對照組相比，分別降低22.96%、19.70%（P＜0.05），MPO和LSZ活性雖也下降，但差異不顯著（P＞0.05），說明長期投喂蠶豆一定程度上降低了羅非魚非特異性免疫功能。

表3 投喂蠶豆對羅非魚非特異性免疫功能的影響

3 討論

3.1 投喂蠶豆對羅非魚肝損傷的影響 天冬氨酸轉氨酶（AST）和丙氨酸轉氨酶（ALT）是水產動物血清中兩種重要的轉氨酶。在正常代謝過程中，血清中AST和ALT活性值都會維持一定水平，當機體組織中毒、發生病變，或者受損傷的組織范圍較大，可引起血清中AST和ALT濃度上升，活性突然持續性增強。當肝細胞受到外來物質的損傷時，細胞膜的通透性加大，大量ALT和AST滲入血液，肝的ALT和AST活性明顯下降，而血液中ALT和AST活性升高（陳鵬飛等，2005）。血清腺苷脫氨酸（ADA）主要來源于肝臟，因其為肝細胞的胞漿酶，所以任何原因所造成的肝細胞損傷，其肝細胞膜的通透性均會增強，致使血清中的ADA酶的活性升高，故該酶可以作為反映肝實質損傷的指標。乳酸脫氫酶（LDH）是糖的無氧酵解和糖異生的重要酶系之一，廣泛存在于心臟、肝臟、肺以及其他各組織內，組織一經損傷血清中該酶即見升高，肝細胞損傷或者壞死后，會向血液釋入大量的 LDH（賀麗虹等，2004；惠天朝等，2000）。

本試驗發現，投喂蠶豆使得魚體血清中肝損傷指標AST、ALT和ADA活性顯著上升，可能是肝細胞膜功能的完整性遭到破壞，影響膜的流動性和其他各項功能，進而損害了羅非魚肝臟功能，這可能是蠶豆中的某種特殊化學因子起作用導致的。而LDH活性在試驗期內與對照組相比變化不大，原因有待進一步研究。

3.2 投喂蠶豆對羅非魚非特異性免疫功能的影響 魚類為較低等變溫脊椎動物，其特異性免疫應答相對低下，而非特異性免疫系統在其防御病原體感染中具有非常重要的意義 （Tonya等，2000）。 酸性磷酸酶（ACP）、堿性磷酸酶（AKP）、髓過氧化物酶（MPO）、溶菌酶（LSZ）是評價魚類非特異性免疫力的常用指標。其中，ACP是水產動物體內公認的巨噬細胞溶酶體的標志酶，在體內直接參與磷酸基團的轉移和代謝，其活力的高低反映了巨噬細胞的激活程度（李麗娟等，2013）。同時，ACP也是吞噬溶酶體的重要組成部分，在血細胞進行吞噬和包囊反應時，會釋放酸性磷酸酶。

AKP是磷酸酶的一種，血清中的AKP主要來源于肝臟和骨骼，能將對應底物去磷酸化，生成磷酸根離子和自由的羥基，直接參與磷酸基團的轉移，以及鈣磷代謝。堿性磷酸酶能夠通過改變病原體的表面結構，增強機體對病原體的識別和吞噬能力，起調理素的作用，加速吞噬細胞的吞噬和病原體的降解速度，進而提高魚體的抗病力，可作為機體免疫標志酶（王玲等，2008）。

MPO是魚體內一種重要的氧化酶，它是由中性粒細胞、單核細胞和某些組織的巨噬細胞分泌的血紅素蛋白酶，主要存在于嗜中性粒細胞和單核細胞中。吳越等（2005）研究表明，MPO能催化過氧化氫與氯反應，產生次氯酸，具有很強的抗微生物作用，可直接影響機體的免疫功能。

LSZ是水產動物體內一種重要的非特異性免疫因子，存在于魚體的吞噬細胞和血清中，對病原體有重要的防御作用。溶菌酶在機體免疫過程中，通過催化水解細菌細胞壁黏肽的乙酰胺基多糖，導致細菌裂解死亡。同時能清除其他抗菌因子作用后所殘余的細菌細胞壁，并增強其他免疫因子的抗菌敏感性，誘導調節其他免疫因子的合成與分泌，共同抵制外來病原的入侵 （葉丹和連賓，2003）。魚類血清溶菌酶活力的高低是衡量機體免疫狀態的指標之一。血清溶菌酶活力提高，其免疫能力也相應提高。相反，魚類血清溶菌酶的活性降低，機體免疫力降低。

本試驗中，與普通配合飼料相比，用浸泡蠶豆投喂羅非魚后，魚體的非特異性免疫力降低，特別是ACP和AKP指標顯著降低，可能是由于蠶豆適口性差，以及抗營養因子（蛋白酶抑制劑、單寧等）的存在。用蠶豆作為單一餌料脆化羅非魚肉質，魚體攝食量減少，營養不平衡，胃腸道各種消化酶活力降低，對營養物質的消化吸收及利用能力也降低，使得脆化期間魚體所需營養得不到滿足，從表觀上看，魚體的生長受到抑制，同時，各種非特異性免疫酶的合成和分泌受到了抑制，降低了魚體的免疫力，削弱了魚體的抗病能力。而MPO和LSZ活性雖也有下降趨勢，但差異不顯著，原因可能是試驗時間還不夠長，有條件的話，將做重復試驗，延遲試驗時間至90 d。

4 結論

本試驗結果表明，以浸泡蠶豆飼養新吉富羅非魚，雖可明顯脆化羅非魚肉質，但卻一定程度上造成魚體肝臟的損害，降低魚體非特異性免疫功能。

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