CIP2A及c-Myc在老年膠質瘤中的表達及相關性

CIP2A及c-Myc在老年膠質瘤中的表達及相關性

李培棟王新軍單嶠吳躍輝王振

(鄭州大學第五附屬醫院神經外科，河南鄭州450052)

摘要〔〕目的探討癌性抑制因子(CIP)2A和(c-Myc)在老年膠質瘤組織中的表達并分析兩者表達的相關性。方法運用免疫組化技術檢測CIP2A和c-Myc在52例老年膠質瘤和12例正常腦組織中的表達情況，分析CIP2A和c-Myc與膠質瘤組織學分級的相關性以及兩者表達的相關性。結果CIP2A和c-Myc蛋白在老年膠質瘤組織中的陽性率分別為65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而兩者在正常腦組織中的陽性率差異顯著〔16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030〕。CIP2A和c-Myc蛋白表達與腫瘤組織病理分化顯著相關(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。Pearson相關分析結果顯示老年膠質瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(r=0.613，P=0.005)。結論老年膠質瘤組織中CIP2A高表達與腫瘤組織病理分化密切相關，并與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關，提示CIP2A可能通過穩定癌蛋白c-Myc促進老年膠質瘤發生發展。

關鍵詞〔〕CIP2A；c-Myc；膠質瘤

中圖分類號〔〕R73〔

基金項目：河南省科學研究(No.092102310090)

通訊作者：王新軍(1965-),男，博士，教授，主任醫師，主要從事腦膠質瘤個體化治療研究。

第一作者：李培棟(1971-)，男，副主任醫師，主要從事腦血管病、腦腫瘤研究。

蛋白磷酸酶2A(PP2A)的癌性抑制因子(CIP2A)通過抑制PP2A對c-Myc S62的脫磷酸化作用，從而遏制PP2A介導的c-Myc降解，穩定腫瘤細胞中c-Myc蛋白水平〔1〕。之前報道稱CIP2A在胃癌組織中表達升高，干擾其表達導致腫瘤細胞集落生成受損、細胞衰老和腫瘤分化〔2〕。另外在人頭頸部腫瘤、結腸癌、乳腺癌和口腔鱗狀細胞癌中均發現CIP2A高表達〔3，4〕，但CIP2A在老年膠質瘤組織中的表達及其與c-Myc的相關性少有報道。本課題分析CIP2A和c-Myc與老年膠質瘤臨床病理特征的相關性及兩者表達的相關性，初步探討CIP2A在老年膠質瘤發生發展中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料52例膠質瘤組織標本來源于2008～2012年本院病理科保存的石蠟標本，男31例，女21例，年齡61～78歲。按2000年WHO神經系統腫瘤分類標準：Ⅰ+Ⅱ級27例，Ⅲ+Ⅳ級25例，所有組織標本經術后病理學證實。正常腦組織來源于12例腦外傷或腦出血患者在手術非功能區入路過程中必須切除的腦組織標本，獲得患者知情同意，男8例，女4例，年齡60～76歲。兩組患者性別比及年齡無統計學差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2實驗方法

1.2.1CIP2A和c-Myc蛋白的免疫組化染色采用標準生物素-鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法對4 μm石蠟切片進行染色。切片在60℃烤箱中烘烤60 min，然后經二甲苯脫蠟和再水化，0.01 mol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)抗原熱修復，室溫冷卻20 min，0.3% Trixon-X100處理30 min，3%雙氧水-甲醇封閉內源性過氧化物酶活性，正常血清封閉非特異性結合，切片經CIP2A(1∶250，Novus Biologicals)和c-Myc(1∶400，Cell Signaling Technology)抗體4℃孵育過夜。沖洗后滴加生物素標記的二抗(SP試劑盒，北京中杉金橋生物技術有限公司)，室溫孵育30 min。滴加辣根酶標記的鏈霉卵白素工作液，室溫孵育30 min。滴加二氨基聯苯胺(DAB)顯色，蘇木蘇輕度復染。酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1.2.2免疫組化染色評估所有切片由兩位研究人員進行評估，染色強度評分：0分；陰性；1分；弱陽性；2分；中度；3分；強陽性。陽性細胞百分比評分：無陽性細胞，0分，≤25%，1分，26%～50%，2分；51～75%，3分；>75%，4分。染色強度和陽性細胞百分比評分相乘≥1分則認為CIP2A或c-Myc蛋白陽性表達〔5〕。

1.3統計學方法應用SPSS13.0軟件進行分析，分類資料運用χ2檢驗，相關性采用Pearson相關分析。

2結果

2.1老年膠質瘤及正常腦組織中CIP2A和c-Myc的表達CIP2A和c-Myc蛋白陽性反應為棕黃色或棕褐色，CIP2A蛋白主要定位在細胞質和細胞膜，而c-Myc蛋白主要定位于細胞質和細胞核。CIP2A和c-Myc蛋白在老年膠質瘤組織中的陽性率分別為65.4%(34/52)和59.6%(31/52)，而兩者在正常腦組織中的陽性率分別為16.7%(2/12)和25.0%(3/12)，差異顯著(χ2=9.403,P=0.002；χ2=4.691,P=0.030)。見圖1。

圖1　CIP2A和c-Myc蛋白在各組織中的表達與 正常腦組織中的免疫組化染色(SP，×400)

2.2CIP2A和c-Myc蛋白表達與老年膠質瘤組織學分級的相關性CIP2A和c-Myc蛋白在高組織學分級(Ⅲ+Ⅳ)的膠質瘤組織中的陽性表達率分別為80.0%(20/25)和76.0%(18/25)，而在低組織學分級(Ⅰ+Ⅱ)的膠質瘤組織中陽性表達率為51.9%(14/27)和44.4%(13/27)，二者差異顯著(χ2=4.544，P=0.033；χ2=5.369，P=0.020)。

2.3老年膠質瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達相關性應用Pearson相關分析結果顯示老年膠質瘤組織中CIP2A與c-Myc蛋白表達呈顯著正相關(r=0.613，P=0.005)。

3討論

惡性神經膠質瘤如多形性膠質母細胞瘤(GBM)是最常見和高侵襲性的腦原發惡性腫瘤，盡管在過去的20年里手術、放療和化療取得了一定的進展，但GBM患者的預后仍沒有明顯的改善〔6〕。CIP2A由于具有轉化人永生化細胞的能力而被證實為一種癌蛋白，最近CIP2A過表達在多種人類腫瘤中被報道，更重要的是許多研究發現CIP2A可以充當不同實體腫瘤和血液系統腫瘤的預后分子標志物，如非小細胞肺癌、結腸癌、乳腺癌、卵巢癌、腎癌、舌癌、食管腺癌、膀胱癌和慢性髓樣白血病〔7〕。既往有學者也證實了CIP2A在大多數星形細胞瘤中表達水平異常升高〔8〕，與本研究結果一致。進一步研究發現CIP2A蛋白表達與老年膠質瘤分化程度呈顯著相關，Yi等〔8〕也發現CIP2A過表達與星形細胞瘤高腫瘤分級顯著正相關，提示CIP2A在可能作為膠質瘤潛在的預后指示標志物。

c-Myc作為一個經典的促癌蛋白參與許多生物學功能如細胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉化，而在老年膠質瘤組織中已經證實存在c-Myc蛋白過表達〔9～11〕。CIP2A是一個細胞PP2A抑制因子，通過抑制PP2A介導的c-Myc絲氨酸62號位脫磷酸化作用從而限制c-Myc蛋白水解。本文既往研究證實在膠質瘤細胞系A172和U87中干擾CIP2A表達可以導致c-Myc蛋白表達水平降低和半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3分裂體表達升高，另外干擾CIP2A導致腫瘤細胞增殖減少和凋亡增加〔11〕，提示CIP2A可能通過穩定c-Myc蛋白促進膠質瘤惡性生物學行為。

綜上所述，CIP2A和c-Myc在老年膠質瘤組織中表達升高，其高表達與老年膠質瘤分化不良相關，而且CIP2A可能是一個潛在的老年膠質瘤治療靶點。

4參考文獻

1Junttila MR,Puustinen P,Niemel M,etal. CIP2A inhibits PP2A in human malignancies〔J〕. Cell,2007;130(1):51-62.

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3Lin YC,Chen KC,Chen CC,etal. CIP2A-mediated Akt activation plays a role in bortezomib-induced apoptosis in head and neck squamous cell carcinoma cells〔J〕. Oral Oncol,2012;48(7):585-93.

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6Liu N,He QM,Chen JW,etal. Overexpression of CIP2A is an independent prognostic indicator in nasopharyngeal carcinoma and its depletion suppresses cell proliferation and tumor growth〔J〕. Mol Cancer,2014,13(1):111.

7涂康生,楊雪,宋濤,等.原發性肝細胞癌組織中CIP2A和c-myc蛋白的表達及其意義〔J〕. 中國普通外科雜志,2011;20(1):95-8.

8Yi F,Ni W,Liu W,etal. Expression and biological role of CIP2A in human astrocytoma〔J〕. Mol Med Rep,2013;7(5):1376-80.

9Ohama T,Wang L,Griner EM,etal. Protein Ser/Thr phosphatase-6 is required for maintenance of E-cadherin at adherens junctions〔J〕. BMC Cell Biol,2013;14(1):42.

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〔2013-09-15修回〕

(編輯袁左鳴)