肺腺癌中肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶29、組織蛋白酶D和血管內(nèi)皮生長因子表達的關(guān)系

肺腺癌中肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶29、組織蛋白酶D和血管內(nèi)皮生長因子表達的關(guān)系

王麗紅

(河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北石家莊050030)

摘要〔〕目的檢測肺腺癌術(shù)后組織中肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶(TRIM)29蛋白(TRIM29)、組織蛋白酶(Cath)-D和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達特征。方法132例肺腺癌術(shù)后留取的蠟塊及臨床資料作為觀察組，以距腫物邊緣>5 cm，并經(jīng)病理醫(yī)師證實為正常的肺組織78例作為對照組。采用免疫組織化學方法檢測兩組中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達。結(jié)果觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的陽性率明顯高于對照組，觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的陽性率與腫瘤的最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤和KI67的表達密切相關(guān)。觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF的表達均正相關(guān)。觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF高表達患者生存時間短。結(jié)論肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表達且具有協(xié)同作用，共同促進腫瘤的發(fā)生和進展。術(shù)后檢測TRIM29、Cath-D和VEGF高表達提示肺腺癌患者預后不良。

關(guān)鍵詞〔〕肺腺癌；TRIM29；組織蛋白酶(Cath)-D；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)；免疫組化

中圖分類號〔〕R73〔

第一作者：王麗紅(1979-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事肺循環(huán)研究。

肺腺癌常為周圍型肺癌。病變發(fā)展中多種基因和蛋白出現(xiàn)變化，近年來學者關(guān)注肺腺癌的血管生成作用，并發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)高表達可以促進肺腺癌間質(zhì)血管的新生〔1〕，此時腫瘤細胞中VEGF的表達升高，間質(zhì)中CD31、CD34和CD105陽性的血管明顯增多〔2〕。學者們也發(fā)現(xiàn)，VEGF的作用不是單獨的，其他相關(guān)影響因素多，使其表達過程更復雜〔3〕。組織蛋白酶(Cath)-D是癌細胞合成的水解酶之一，是分子量為34 kD的糖蛋白，具有肽鏈內(nèi)切酶的活性，其不僅可以對血管生成有一定影響，還具有調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)降解等多種生物學功能〔4〕。肌肉細胞特異性泛素蛋白連接酶(TRIM)29蛋白是TRIM家族的重要成員，含有多個鋅指基序，其可能對轉(zhuǎn)錄調(diào)控和脈管的重建有一定作用〔5〕。本文關(guān)注肺腺癌術(shù)后組織中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達。

1材料和方法

1.1臨床資料2009年1月至2011年4月我院行肺腺癌切除的術(shù)后組織及臨床資料作為觀察組，共132例，男70例，女62例；年齡53～85歲，平均69.6歲；納入均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合WHO中關(guān)于肺腺癌的診斷標準。同時選取距腫物邊緣>5 cm的正常肺組織78例作為對照組，男40例，女38例；年齡54～81歲，平均69.0歲。兩組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1.2免疫組化檢測TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的表達TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白的檢測均應(yīng)用免疫組化EnVision二步法染色。濃縮抗體均由北京中杉金橋公司代購。正式應(yīng)用前均進行預實驗確定最理想的配比濃度。正式實驗操作均由同一主管技師完成，嚴格按實驗步驟進行，嚴格質(zhì)量控制，努力減少誤差。

1.3TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白檢測結(jié)果的判定方法TRIM29、Cath-D和VEGF均以細胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，每張切片選擇5個400倍的高倍視野(觀察組為腫瘤細胞密集區(qū)，對照組為上皮細胞分布區(qū))，分別計數(shù)陽性細胞和總細胞數(shù)，計算陽性率，取平均值。以陽性細胞≥5%定為陽性，以陽性細胞<5%定為陰性。

1.4統(tǒng)計學方法采用SAS6.12軟件進行χ2檢驗、線性相關(guān)分析、生存分析。

2結(jié)果

2.1兩組TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白表達陽性率的比較觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達的陽性率明顯高于對照組(P<0.000 1)。見表1。

表1　兩組TRIM29、Cath-D和VEGF蛋白

2.2TRIM29、Cath-D和VEGF在觀察組不同臨床特征中表達觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達與腫瘤最大徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸潤和Ki67的表達密切相關(guān)。見表2。

2.3觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達相關(guān)性觀察組TRIM29和VEGF(r=0.46，P=0.021 4)、TRIM29和Cath-D(r=0.45，P=0.027 4)、Cath-D和VEGF(r=0.53，P=0.011 2)的表達均具有正相關(guān)性。

表2　TRIM29、Cath-D和VEGF陽性表達在觀察組不同

2.4觀察組TRIM29、Cath-D和VEGF表達的生存分析隨訪2～36(平均13.9)個月。肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF的表達均與患者預后相關(guān)(P<0.05)，即TRIM29、Cath-D和VEGF高表達患者的生存時間短，預后差。

3討論

研究顯示當腫瘤增長的速度超過其脈管系統(tǒng)的蔓延能力時，由缺氧誘導因子調(diào)控的VEGF高表達，加速腫瘤間質(zhì)中血管新生和成熟能力〔6〕。此時腫瘤細胞為了存活而更易于獲得侵襲轉(zhuǎn)移的潛能。Cath-D具有肽鏈內(nèi)切酶活性，可以調(diào)節(jié)VEGF的高表達，加速血管的生成。也有觀點認為Cath-D活化后，可以活化尿激酶型纖溶酶原激活因子(uPA)前體，從而引發(fā)鏈式反應(yīng)，使腫瘤的浸潤和侵襲能力增強〔7，8〕。TRIM29定位在11q23，TRIM29包含保守結(jié)構(gòu)、環(huán)結(jié)構(gòu)、B1和B2箱型結(jié)構(gòu)，同時具有多種鋅指序列〔9，10〕。應(yīng)用酵母雙雜交分析技術(shù)觀察TRIM29的功能時發(fā)現(xiàn)其能與TIP60結(jié)合，此時TRIM29可以引起TIP60的下調(diào)，使p53中存在的K120位點乙酰化的數(shù)量明顯減少，引發(fā)由p53介導的細胞增殖〔11〕。Kanno等〔12〕觀察TRIM29在前列腺癌中的表達，認為TRIM29還可以標記基底細胞，并認為其與34BE12有一致的表達，因此認為其有助于判斷腫瘤的生物學性質(zhì)。TRIM29的作用可能是多元性的，其在不同腫瘤中表達的作用可能不盡相同〔13，14〕。

本研究中應(yīng)用的是較為成熟的免疫組化技術(shù)，其標記部位準確，客觀性強，判讀一致性高，說服力強。本實驗結(jié)果提示肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF在腫瘤形成過程中起促進作用，三者具有協(xié)同正向作用，共同促進腫瘤的進展。由于腫瘤的生長、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤均為判斷腫瘤生物學行為和預后的重要指標，因此三者高表達可能提示臨床中有不良的預后。TRIM29、Cath-D和VEGF高表達，類似癌基因的作用，其實質(zhì)是三種蛋白調(diào)節(jié)細胞間的物質(zhì)代謝，進而使細胞間、基質(zhì)間的信息傳遞時出現(xiàn)失控性增生和分化成熟障礙，引起腫瘤的形成和進展〔15～17〕。TRIM29可以促進VEGF為代表的血管生成，促進腫瘤血管的新生，Cath-D對VEGF也有明顯的調(diào)節(jié)作用，因此TRIM29/Cath-D對腫瘤發(fā)生發(fā)展的促進作用也可能是以VEGF作為中介因子，調(diào)節(jié)三者的關(guān)系及協(xié)同作用。腫瘤細胞外(間質(zhì)成分中)也有少量TRIM29和Cath-D的表達，認為此時TRIM29、Cath-D的作用為促進腫瘤細胞與其鄰近的成纖維細胞和上皮細胞耦合，使細胞間質(zhì)的環(huán)境發(fā)生變化，加速腫瘤進展〔18，19〕，此時腫瘤細胞的侵襲及遷移能力均增強，浸潤及轉(zhuǎn)移潛能高〔20〕。

總之，肺腺癌中TRIM29、Cath-D和VEGF高表達且具有協(xié)同作用，共同促進腫瘤的發(fā)生和進展。術(shù)后檢測TRIM29、Cath-D和VEGF高表達提示肺腺癌患者預后不良。

4參考文獻

1Yu W，Chen L，Yang YQ，etal.Cytochrome P450 ω-hydroxylase promotes angiogenesis and metastasis by upregulation of VEGF and MMP-9 in non-small cell lung cancer〔J〕.Cancer Chemother Pharmacol，2011；68(3):619-29.

2張凡，常永霞.小鼠黑色素移植瘤血管生成擬態(tài)CD31、CD34、組織蛋白酶表達意義〔J〕.中國老年學雜志，2010；30(15):2189-91.

3杜曉燕，孔衛(wèi)平，張景麗，等.宮頸鱗癌組織中MMP-9和VEGF的表達與微血管密度相關(guān)性研究〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013；22(26):2856-7.

4趙輝明，楊文婧，劉輝，等.喉鱗癌中組織蛋白酶D和MMP-7表達的研究〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012；21(33):3665-70.

5Tang ZP，Dong QZ，Cui QZ，etal.Ataxia-telangiectasia group D complementing gene(ATDC) promotes lung cancer cell proliferation by activating NF-κB pathway〔J〕.PLoS One，2013；8(6):e63676.

6任旭升，王慶華，孟祥睿，等.TAM與VEGF在外周T細胞淋巴瘤非特指型中表達及臨床意義〔J〕.中國腫瘤臨床，2012；39(21):1635-8.

7徐遠坤，陳久毅.老年骨肉瘤組織中生存素與組織蛋白酶D的表達及關(guān)系〔J〕.中國老年學雜志，2012；32(3):509-10.

8烏拉木，余科達，沈鎮(zhèn)宙，等.組織蛋白酶D在乳腺導管內(nèi)癌及伴早期浸潤中的表達及其與復發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系〔J〕.中國癌癥雜志，2010；20(4):247-50.

9Huang W，Williamson SR，Rao Q，etal.Novel markers of squamous differentiation in the urinary bladder〔J〕.Hum Pathol，2013；44(10):1989-97.

10周志毅，楊國儀，孫榮超，等.TRIM29基因表達在非小細胞肺癌臨床病理診斷中的意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2011；21(25):3143-5.

11Sho T，Tsukiyama T，Sato T，etal.TRIM29 negatively regulates P53 via inhibition of Tip 60〔J〕.Biochim Biophys Acta，2011；1813(6):1245-53.

12Kanno Y，Watanabe M，Kimura T，etal.TRIM29 as a novel prostate basal cell marker for diagnosis of prostate cancer〔J〕.Acta Histochem，2014；29(3):132-4.

13Zhou ZY，Yang GY，Zhou J，etal.Significance of TRIM29 and β-catenin expression in non-small-cell lung cancer〔J〕.J Chin Med Assoc，2012；75(6):269-74.

14錢妍娟，周志毅，馮一中.非小細胞肺癌中TRIM29與p53、β-catenin表達及意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2014；30(3):283-7.

15張娟，陳旻靜，王大偉，等.組織蛋白酶D和基質(zhì)金屬蛋白酶-9在皮膚惡性黑色素瘤中的表達〔J〕.第三軍醫(yī)大學學報，2012；34(10):1002-5.

16Xiao Z，Jiang Q，Willette-Brown J，etal.The pivotal role of IKKα in the development of spontaneous lung squamous cell carcinomas〔J〕.Cancer Cell，2013；23(4):527-40.

17陳平鋒，李解方.前列腺癌中Survivin與VEGF蛋白表達及其相關(guān)性研究〔J〕.中南醫(yī)學科學雜志，2012；40(5):465-8.

18盛立紅，王輝，楊平.ATDC蛋白在卵巢癌組織中的表達及其與β-catenin蛋白的關(guān)系〔J〕.贛南醫(yī)學院學報，2011；31(3):337-9.

19董莉蒔，王海琳.STAT3及VEGF在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達研究〔J〕.中國婦幼保健，2008；23(33):4762-4.

20Kapoor S.Promising，new prognostic markers of esophageal carcinomas〔J〕.APMIS，2013；121(10):1011.

〔2013-07-14修回〕

(編輯苑云杰)