電針“三陰穴”對慢性非細菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影響

電針“三陰穴”對慢性非細菌性前列腺炎大鼠免疫功能的影響

嚴興科董莉莉劉安國韓林王軍燕馬重兵朱田田何天有

(甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000)

摘要〔〕目的探討電針“三陰穴”對慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型的免疫調節機制。方法將48只雄性SD大鼠隨機分為空白組、模型組、藥物組、電針組，皮內注射同種異體雄性SD大鼠前列腺蛋白提純液，輔以雙重免疫佐劑復制自身免疫性慢性非細菌性前列腺炎大鼠模型。造模后電針組、藥物組分別給予電針“三陰穴”、舍尼通灌胃治療15 d。觀察各組動物前列腺組織濕重及系數、形態結構；放免法檢測前列腺組織中抗體IgG、局部組織細胞因子白介素(IL)-2、IL-8的變化。結果造模后模型組前列腺重量及系數與空白組相比顯著增高(P<0.05)，病理觀察顯示，模型組動物前列腺組織形態及結構明顯受損。與空白組比較，模型組大鼠前列腺組織勻漿中IgG含量明顯增高(P<0.05)，IL-2、IL-8高表達(P<0.05，P<0.01)。治療后，電針組動物腺體濕重及系數均明顯下降(P<0.05，P<0.01)，病理變化明顯減輕；局部前列腺組織IgG含量明顯降低(P<0.05)，IL-2、IL-8表達顯著減輕(P<0.05，P<0.01)。結論電針“三陰穴”能夠減少局部抗體IgG的分泌，調節局部細胞因子IL-2、IL-8的表達，減輕組織局部免疫亢進，抑制前列腺組織形態結構的損傷，從而起到治療慢性非細菌性前列腺炎的作用。

關鍵詞〔〕慢性非細菌性前列腺炎；電針；“三陰穴”； IgG；IL-2；IL-8

中圖分類號〔〕R245〔

基金項目：國家自然科學

The impact of electroacupuncture at Sanyin points on the immunologic function of chronic abacterial prostatitis rat

YAN Xing-Ke,DONG Li-Li,LIU An-Guo,etal.

Gansu University of TCM,Lanzhou 730000,Gansu,China

Abstract【】ObjectiveTo study the immunologic mechanism of electroacupuncture at Sanyin points on chronic abacterial prostatitis rat. Methods48 male rats were divided randomly into normal,model,drug and electroacupuncture groups,12 rats in each group. The animal models were made by SC purified prostate protein twice with immunologic adjuvant,and the rats in electroacupuncture and drug groups were treated by electroacupuncture at Sanyin points and fed Cernilton for 15 d. The changes of prostate weight,coefficient,pathology and contents of IgG,expressions of IL-2 and IL-8 in prostate homogenate were observed. ResultsCompared with those of normal group,the prostate weight and coefficient were significantly increased in model group(P<0.05),the content of IgG was significantly increased(P<0.05),the levels of IL-2,IL-8 were highly expressed(P<0.05,P<0.01),prostate tissue's morphology and structure were significantly impaired in model group;compared with those of model group,the prostate weight and coefficient were significantly decreased in electroacupuncture group after treatment (P<0.05 or P<0.01),pathological changes were reduced significantly,the content of IgG was decreased significantly(P<0.05),the expressions of IL-2,IL-8 were significantly decreased(P<0.05 or P<0.01),and the pathological manifestation of chronic inflammation was significantly improved. ConclusionsElectroacupuncture at Sanyin points could effectively improve the immune function of chronic abacterial prostatitis and promote the recovery of inflammation.

【Key words】Chronic abacterial prostatitis;Electroacupuncture;Sanyin points;IgG;Interleukin-2;Interleukin-8

第一作者：嚴興科(1974-)，男，教授，博士，碩士生導師，主要從事針灸調節效應的生物學機制研究。

慢性非細菌性前列腺炎(CAP)是泌尿科的常見病、多發病〔1〕，但病因目前尚不明確，其中自身免疫反應因素在CAP發病機制中的作用日益受到重視。近年來國內報道針灸治療CAP具有明顯優勢〔2〕。本項目組在臨床中總結出的“三陰穴”治療本病具有特殊療效，總有效率達85%〔3〕。本文擬進一步通過動物實驗探討其作用機制。

1材料與方法

1.1實驗動物雄性SD大鼠(SPF級)48只，3月齡，體重(240±20)g；另取20只體重240～300 g SD大鼠，用于取前列腺組織勻漿制作前列腺蛋白。SD大鼠均由甘肅中醫學院動物實驗中心提供，實驗動物質量合格證：SCXK(甘)2004-0006。

1.2主要實驗藥品和試劑Freund完全佐劑(美國Sigma公司提供，批號：F-5506)；蛋白定量測試盒(雙縮脲法)(南京建成生物制品所提供，批號：20070125)；舍尼通(普適泰)(南京美瑞制藥有限公司，批號：國藥準字H20000486)；白百破疫苗(甘肅省衛生防疫站)；白介素(IL)-2、IL-8放免試劑盒(蘭州軍區總醫院安寧分院核檢驗科提供，批號：S20063090、S20063089)；IgG放免試劑盒(中國原子能科學研究所提供，批號：S10940082)

1.3主要儀器Biofuge Fresco低溫高速離心機〔德國賀力氏(Heraeus)公司〕；Uv-2401 PC型紫外分光光度計〔日本島津(SHIMADZU)公司〕；MDF-71超低溫冰箱〔日本三洋(SANYO)公司〕；G6805 型電針治療儀(上海醫療器械高技術公司)；華佗牌針灸針(0.32 mm×15 mm；蘇州醫療用品廠有限公司)

1.4實驗場所甘肅中醫學院SPF級動物實驗室，設施使用合格證為SYXK(甘)2004-0006。

1.5實驗方法

1.5.1動物分組48只SD大鼠依體重編號，按隨機數字表法分為空白組、模型組、藥物組、 電針組，每組12只。

1.5.2模型復制〔4〕(1)大鼠前列腺蛋白提純液的制作：取240～300 g雄性大鼠10只，脫頸椎處死，在無菌條件下剝取前列腺組織，用冷生理鹽水洗凈，加入含0.5%Triton100的生理鹽水溶液，在冰水浴上用玻璃勻漿器制成勻漿，10 000 r/min離心，30 min，取上清液；用721分光光度計，以牛血清白蛋白溶液為標準蛋白溶液，采用雙縮脲法進行蛋白含量測定；最后用0.1 mol/L pH7.2的PBS緩沖液稀釋為15 mg/ml濃度。(2)免疫注射：除空白組外，其他各組大鼠以乙醚麻醉，腹腔注射白百破疫苗0.5 ml，多點皮內注射大鼠前列腺蛋白提純液和Freund氏完全佐劑(比例為1∶1的混懸液)1.0 ml，正常對照組分別行腹腔及皮內多點注射0.9%生理鹽水注射液0.5、1.0 ml，以上各組均分別于第0、30天2次注射。

1.5.3選用穴位三陰穴(左右兩側夾陰穴和重陰穴)定位參照有關文獻〔5〕。夾陰1位于平恥骨聯合上緣左側腹股溝處；夾陰2位于平恥骨聯合上緣右側腹股溝處；重陰在會陰穴與陰囊根部之間取穴。

1.5.4處理方法造模完成后第1日開始，電針組給予電針三陰穴處理。電針組大鼠以仰臥位捆綁于鼠板上，以棉簽蘸碘伏擦拭三陰穴，消毒局部皮膚，以32號1寸毫針針刺夾陰1、夾陰2穴，進針1 cm；以32號1寸毫針針刺重陰穴，進針1.5 cm。接通電針儀，為統一刺激標準，規定：重陰(左正，右正)，左夾陰(左負)，右夾陰(右負)，疏密波，頻率10 Hz，強度以針柄或肌肉微顫，動物保持安靜為度。留針20 min，每日1次，共15次。藥物組大鼠用舍尼通普適泰片研末，蒸餾水溶解，灌胃喂飼，給藥劑量按動物體表面積比率換算等效劑量為13 mg/kg，給藥體積為1 ml/100 g，每日1次，連續15 d；正常組和模型組同樣抓取，但不予任何治療。

1.5.5標本采集及檢測方法在末次給藥、針刺后，稱量各組大鼠體重，各組動物禁食禁水24 h，脫頸處死各組動物。取出前列腺組織，剝離被膜及周圍脂肪組織，生理鹽水涮洗，濾紙吸干，電子天平稱重，計算各組大鼠前列腺指數。前列腺指數=〔前列腺濕重(g)/大鼠體重(g)〕×100%。將各組大鼠前列腺以中軸均分兩份，右側部分保存于4%多聚甲醛/0.1 mol/L PBS(pH7.2)固定液中，室溫下經水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后，切片備用。HE染色制作病理切片，鏡下觀察前列腺局部病理變化。將各組動物脫頸處死，取前列腺組織，沿腹葉中線取左半側組織勻漿，將勻漿液以3 000 r/min離心15 min，將上清液分裝3個試管，IgG、IL-2、IL-8按照試劑盒說明書采用放免法檢測。

2結果

2.1一般狀態觀察造模期間，空白組動物毛色光澤，食欲良好，活動自如，墊料干濕適中；造模動物逐漸顯現食欲減少，毛色略顯枯槁，自主活動減少，墊料明顯偏濕，氣味腥臊。治療開始后藥物組及電針組動物經處理狀態逐漸恢復。實驗期間各組動物均無死亡。實驗前后各組動物體重無顯著差異(P>0.05)。見表1。

2.2電針“三陰穴”對前列腺濕重及系數的影響造模后模型組前列腺重量及系數與空白組相比顯著增高(P<0.05)；而治療后藥物組及電針組前列腺重量及系數較模型組均明顯降低(P<0.05,P<0.01)，藥物組與電針組比較無顯著差異(P>0.05)。見表2。

表1　實驗前后各組動物體重比較

表2　各組動物前列腺濕重及前列腺系數 ± s， n=12)

與空白組比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05，3)P<0.01；下表同

2.3電針“三陰穴”對前列腺組織學的影響空白組：大鼠前列腺被膜、縱隔均正常，腺上皮為單層柱狀上皮，位于基底部，腺泡腔內有少量淡紅色分泌物，腺泡之間排列緊密。模型組：前列腺組織血管擴張，腺上皮增生，可見立方、柱狀、高柱狀、假復層等表現，腺上皮細胞核染色深淺不一，胞質嗜堿性，腺腔擴張，腔內有分泌物，間質疏松，有大量慢性炎癥細胞浸潤。藥物組：可見部分腺上皮細胞增生，排列紊亂，腺腔增大，部分含有分泌顆粒和慢性炎癥細胞，間質散見血管充血及纖維組織增生。電針組：腺上皮細胞增生改善，排列整齊,間質水腫、充血，炎細胞浸潤較模型組明顯減輕，腺泡中央未見炎細胞充盈。

2.4前列腺組織勻漿中IgG及IL-2水平變化模型組大鼠前列腺組織勻漿中IgG、IL-2的含量明顯高于空白組(P<0.05)；與模型組相比，電針組大鼠前列腺局部IgG、IL-2水平明顯降低(P<0.05)；藥物組大鼠IL-2水平也明顯降低(P<0.05)；藥物組與電針組大鼠前列腺局部IgG及IL-2水平均無顯著性差異(P>0.05)。見表3。

2.5前列腺組織勻漿中IL-8的變化模型組大鼠前列腺組織勻漿中IL-8(ng/mg)的含量(0.151 0±0.010 2)明顯高于空白組(0.130 2±0.012 0)(P<0.01)；與模型組相比，藥物組(0.135 9±0.174 8)及電針組大鼠前列腺組織勻漿中IL-8水平(0.132 5±0.018 2)均顯著降低(P<0.01)；藥物組與電針組比較無顯著差異(P>0.05)。

表3　各組前列腺組織勻漿中IgG、IL-2

3討論

本實驗表明，造模后前列腺組織以慢性炎癥的病理變化為主，以上皮細胞和腺體的增生與間質部分的纖維化增生為主要特點，炎性細胞多以淋巴細胞和巨噬細胞的浸潤為主。電針三陰穴可以改善血管的通透功能，影響組織的滲出、增生、變質過程，使前列腺濕重及系數下降，改善前列腺組織的病理變化。

IgG是血清中含量最高的抗體，為機體抗感染的主要抗體，當機體罹患某些疾病或機體內外環境發生了某些特定的變化，可以導致前列腺局部抗原(PSA)的暴露，刺激血液、組織中的淋巴細胞通過釋放細胞因子而調節抗體的生成，發揮免疫調理及ADCC作用，也可通過經典途徑活化補體。本實驗結果提示前列腺局部處于炎癥狀態；針刺有助于改善局部的體液免疫反應；電針三陰穴在改善慢性非菌性前列腺炎癥方面取得了與口服舍尼通相近的療效。

IL-2主要由活化T淋巴細胞產生。CAP患者前列腺液(EPS)中含有較高水平IL-2，由此推測，CAP的發病與IL-2介導參與的細胞免疫有一定的相關性。IL-8是一種強效相對低分子質量炎癥趨化因子。針刺有助于降低局部細胞因子的表達，從而發揮其治療作用；本研究表明電針三陰穴可取得和舍尼通相近甚至優于舍尼通的療效。

由上表明：電針三陰穴可明顯改善自身免疫性CAP大鼠前列腺組織的炎癥狀態及病理損傷，降低前列腺局部IgG水平，降低相關細胞因子IL-2、IL-8的表達。即電針三陰穴通過調節CAP大鼠的免疫功能，改善炎癥對前列腺組織的病理損傷，起到防治前列腺炎的作用。

4參考文獻

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2嚴興科，崔海福，陳程，等.針灸治療慢性前列腺炎臨床隨機對照文獻的Meta分析〔J〕.時珍國醫國藥，2012；23(10)：2592-3.

3何天有，趙耀東，雒成林.針刺三陰穴治療慢性前列腺炎臨床觀察〔J〕.中國針灸，200；24(10):697-8.

4葉偉成，薛慈民，徐兆東，等.免疫佐劑法制作慢性非細菌性前列腺炎小鼠模型的方法〔J〕.中國男科學雜志，2001；15:29-32.

5何天有，韓林，李海.針刺“三陰穴”對慢性非細菌性前列腺炎大鼠局部免疫功能的影響〔J〕.甘肅中醫學院學報，2007；24(5):9-11.

〔2013-07-30修回〕

(編輯曲莉)