辛伐他汀對急性血栓性肺栓塞兔血清肝細胞生長因子的影響

辛伐他汀對急性血栓性肺栓塞兔血清肝細胞生長因子的影響

楊永張艷敏1梁明亭駱峰武蕾李義波

(聊城市人民醫院心內科，山東聊城252000)

摘要〔〕目的初步探討辛伐他汀對急性血栓性肺栓塞兔血清肝細胞生長因子(HGF)濃度變化的影響。方法采用兔自體血栓回輸法建立急性肺栓塞模型。選用30只健康新西蘭白兔，隨機分為對照組、模型組、辛伐他汀組，每組10只。采用酶聯免疫吸附試驗檢測血清中HGF、腫瘤壞死因子(TNF)-α及白細胞介素(IL)-1β濃度。實驗結束后取兔肺組織觀察其病理變化。結果模型組肺栓塞后1 h HGF水平開始升高；于12 h達到高峰，與同期對照組相比有顯著差別(P<0.000 1)；模型組與同期辛伐他汀組相比，栓塞后1 h及6 h差異顯著(P=0.011 6,P=0.001)。實驗中觀察到，血清TNF-α、IL-1β于栓塞后1 h明顯升高，于栓塞后3 h達高峰；與同期辛伐他汀組、對照組比較差異顯著(P<0.01)。肺組織病理變化顯示，模型組和辛伐他汀組可見肺動脈內均見多處血栓，肺泡萎陷、水腫，肺泡腔內可見炎性細胞浸潤和少量紅細胞滲出液，而辛伐他汀組炎性反應較模型組減輕。結論急性血栓性肺栓塞后，血清HGF及促炎細胞因子濃度升高；辛伐他汀可能通過抑制促炎細胞因子的釋放從而降低HGF的水平；HGF有望成為早期提示肺栓塞的生物學指標之一。

關鍵詞〔〕肺栓塞；動物模型；細胞因子；辛伐他汀；肝細胞生長因子(HGF)

中圖分類號〔〕R332；R563.5〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：張艷敏(1981-)，女，主治醫師，碩士，主要從事急診心肺血管各種急危重癥及急性中毒患者的搶救研究。

1聊城市人民醫院急診科

第一作者：楊永(1977-)，男，碩士，主治醫師，主要從事心血管急癥危重病的綜合搶救及心律失常的介入治療研究。

肺栓塞癥是一種嚴重威脅人類健康的常見的、多發的外周血管病之一〔1〕，由于其臨床表現各異，早期迅速作出診斷較困難。常規實驗室檢查沒有特異的生化指標，常規胸片、血氣分析和心電圖有助于該病的診斷，但在確診肺栓塞時常常不可靠。肺動脈造影是診斷肺栓塞的金標準，但要求昂貴的設備及有經驗的放射科醫師，且有其患者對造影劑過敏，限制了其廣泛應用。肝細胞生長因子(HGF)是一種多功能性的間質細胞源性細胞因子。目前，關于肺栓塞與HGF、促炎細胞因子與HGF的關系以及辛伐他汀對它們影響的研究較少。本文探討辛伐他汀對急性血栓性肺栓塞兔血清HGF的影響。

1資料與方法

1.1動物分組健康新西蘭白兔30只(山東大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK20040013)，雌雄不限，體重(3.2±0.3)kg，月齡4～6個月，隨機分為對照組、模型組、辛伐他汀組，每組10只。制模前治療組飼喂辛伐他汀(舒降之)10 mg·kg-1·d-1持續4 w〔2〕，模型復制成功后，繼續飼喂至實驗結束。

1.2動物模型的制備〔3〕稱取兔體重，用苯巴比妥鈉150 mg/kg腹腔注射麻醉后置于固定架上，在腹股溝區剪毛，用碘伏局部消毒，觸摸到股動脈波動，沿股動脈走向穿刺股靜脈成功后，將5F鞘管擴張鞘經股靜脈插至右心房。將預先制備好的栓子注入，每次注入栓子0.5 ml，并用2 ml生理鹽水沖注，防止栓子嵌留在鞘管中，每隔5 min重復注入，栓子總量1 ml/mg。對照組以相同方式注入等量生理鹽水。通過導管注入造影劑及病理切片證實肺栓塞模型復制成功。

1.3實驗方法每組于栓塞前1 h、栓塞后1、3、6、12、24、48、72 h取血1 ml，用4℃低溫離心機以3 000 r/min，10 min離心，收集上清液。樣本儲存在-80℃條件下待測。采用酶聯免疫吸附試驗測定血清中腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β及HGF的濃度，操作按試劑盒說明書進行。

1.4形態學觀察實驗結束時殺死家兔，開胸取肺組織, 觀察肺血管中栓子的形態及分布。于栓塞區取肺組織，10%甲醛固定，石蠟包埋，切片HE染色，光鏡下觀察肺組織病理變化。

2結果

2.1各組HGF濃度變化模型組肺栓塞后1、3、6、12、24、48 h HGF濃度開始明顯升高，于12 h達到高峰，分別與同期對照組相比有顯著差別(P<0.000 1)。模型組與同期辛伐他汀組相比，在栓塞后1、3、6 h差異均有統計學意義(P=0.011 6,P=0.018 2,P=0.001)。栓塞后12 h HGF濃度達高峰，但此時模型組與辛伐他汀組相比沒有統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2各組TNF-α、IL-1β變化結果模型組與辛伐他汀組TNF-α、IL-1β濃度在肺栓塞1 h已經升高，3 h濃度達到高峰，6 h基本恢復到正常水平。栓塞后1 h，模型組分別與同期對照組和辛伐他汀組相比差別有統計學意義(P<0.01,P<0.05)。栓塞后3 h達高峰，與同期辛伐他汀組和對照組比較差異有統計學意義(P<0.01，P<0.01)。見表2，表3。

2.3肺組織病理變化結果見圖1。模型組和辛伐他汀組可見到肺表面凹凸狀，肺膨脹不全，有肺萎陷、散在暗紅色灶性出血現象。肺動脈內均見多處血栓，栓子結構致密。肺泡萎陷，呈肺不張現象，部分肺泡水腫，肺泡腔內可見大量炎性細胞浸潤和少量紅細胞滲出液。部分鏡檢可見肺靜脈淤血現象。辛伐他汀組雖有上述病理變化，但炎性反應減輕。對照組兔肺未見上述病理變化。

表1　各組兔血清HGF的濃度變化

與同期對照組比較：1)P<0.01;與同期辛伐他汀組比較：2)P<0.05, 3)P<0.01

表2　各組兔血清TNF-α的濃度變化(ng/ml， x± s， n=10)

與同期對照組相比較:1)P<0.05,2)P<0.01；與治療組比較:3)P<0.05,4)P<0.01

表3　各組兔血清IL-1β的濃度變化(pg/ml， x± s， n=10)

與同期對照組相比較:1)P<0.05,2)P<0.01；與治療組比較:3)P<0.05,4)P<0.01

對照組(×4)

模型組(×10)

辛伐他汀組(×10)

3討論

急性肺栓塞是涉及細胞因子網絡的多種炎癥介質參與的病理生理過程。近年來研究發現，HGF在肺動脈結扎后肺缺血模型中表達異常，提示HGF參與了肺缺血損傷的病理生理過程〔4〕。HGF是一種間質細胞源性的促進細胞有絲分裂的多功能因子，其合成、分泌受TNF-α、IL-1β因子的調節。研究顯示，HGF分泌與急性肺損傷患者支氣管肺泡灌注液中IL-β水平相關，給予IL-β抗體可一定程度抑制HGF的分泌〔5〕； TNF-α可促進人類間充質干細胞遷移并合成、分泌HGF，TNF受體Ⅱ抗體可抑制上述效應〔6〕。本實驗結合文獻報道的TNF-α、IL-1β有HGF的合成、分泌的效應，提示在急性血栓性肺栓塞時TNF-α、IL-1β可能參與了上調HGF的表達。

他汀類藥物是HMG-COA還原酶抑制劑，常用來調脂，近年來研究顯示它具有獨立于調脂外的作用，如抗炎、免疫抑制、抑制血小板聚集、保護血管內皮、減輕心肌缺血再灌注性損傷等作用。有研究證實在炎癥反應中，辛伐他汀可通過抑制TNF-α、IL-1α誘導的細胞凋亡有效地保護內皮祖細胞〔7〕。本研究結果提示辛伐他汀可能通過抑制促炎細胞因子TNF-α、IL-1β降低了它們對HGF的刺激誘導作用，但具體機制有待進一步探討。

目前，HGF在肺栓塞動物模型的研究中較少，Nagai等〔4〕結扎肺動脈建立的肺缺血模型與肺栓塞還不完全相同。臨床上關于肺栓塞患者血漿及肺組織HGF水平變化規律及意義國內外均未見相關報道，因此有待進一步探討。急性肺栓塞后血清HGF濃度升高，辛伐他汀抗感染治療后可降低其水平，因此HGF有可能成為診斷并評價肺血栓栓塞預后的新生物學指標之一。

4參考文獻

1翟振國, 王辰. 肺栓塞-深靜脈血栓形成的研究現狀與展望〔J〕. 中國實用內科雜志,2006;26(14):1050-2.

2Yao HW, Mao LG, Zhu JP. Protective effects of pravastatin in murine lipopolysaccharide-induced acute lung injury〔J〕. Clin Exp Pharmacol Physiol,2006;33 (9): 793-7.

3季穎群, 高鶴立, 張中和. 家兔自體血凝塊制備肺栓塞模型的探討〔J〕.實驗動物科學與管理, 2001;18(4):1-4.

4Nagai K, Aoe M, Shimizu N. Rapid response of hepatocyte growth factor in pulmonary ischemia in a rat model〔J〕. Acta Med Okayama, 2004;58(3):119-25.

5Quesnel C, Marchand-Adam S, Fabre A,etal. Regulation of hepatocyte growth factor secretion by fibroblasts in patients with acute lung injury〔J〕. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol, 2008;294(2):L334-43.

6Zhang A, Wang Y, Ye Z,etal. Mechanism of TNF-α-induced migration and hepatocyte growth factor production in human mesenchymal stem cells〔J〕.J Cell Biochem, 2010;111(2):469-75.

7Henrich D, Seebach C, Wilhelm K,etal. High dosage of simvastatin reduces TNF-α-induced apoptosis of endothelial progenitor cells but fails to prevent apoptosis induced by IL-1beta in vitro〔J〕.J Surg Res, 2007;142(1):13-9.

〔2014-01-12修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)