Src同源2結構域轉化蛋白和環(huán)氧化酶－2在大腸癌組織中的表達及意義

Src同源2結構域轉化蛋白和環(huán)氧化酶-2在大腸癌組織中的表達及意義

宮健劉石張博李雪松張慧宇陳爾東王明濤李曉紅張曉明

(齊齊哈爾醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院,黑龍江齊齊哈爾161000)

摘要〔〕目的探討Src 同源 2 結構域轉化蛋白(Shc)和環(huán)氧化酶(COX)-2在大腸癌的表達及意義。方法選擇2010年1月至2013年10月在該院收治的資料完整的經(jīng)病理學確認的大腸癌標本158例。采用免疫組化發(fā)檢測大腸癌和癌旁組織的Shc和COX-2表達。結果Shc表達在大腸癌組織中的細胞質和細胞核，COX-2表達在大腸癌組織中的細胞質。分化程度越低、浸潤越深、遠處轉移和淋巴結轉移的Shc和COX-2表達均有差異(P<0.05)，不同性別、TNM分期Shc和COX-2表達無差異(P>0.05)，Shc在年齡較高者表達較高 (P>0.05)，Shc和COX-2呈正相關(r=0.52，P<0.05)。結論Shc與COX-2可能通過某種機制相互促進功能，共同參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展。

關鍵詞〔〕Src同源2結構域轉化蛋白；環(huán)氧化酶-2；大腸癌

中圖分類號〔〕R735.3+4〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：黑龍江省教育廳2012年度科學技術研究(面上)項目計劃(No.12521618)

通訊作者：劉石(1978-)，女，主治醫(yī)師，博士，主要從事消化道腫瘤研究。

第一作者：宮健(1976-)，男，副主任醫(yī)師,博士,主要從事消化道腫瘤研究。

大腸癌的發(fā)生發(fā)展機制較復雜。Src 同源 2 結構域轉化蛋白(Shc)和環(huán)氧化酶-2(COX-2)可能參與腫瘤發(fā)生〔1,2〕，Shc作為一種細胞質信號轉導器，將炎癥、分化、增殖和腫瘤形成的信號傳遞至下游效應器，COX-2可抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤浸潤與轉移。文旨在探討大腸癌的Shc和COX-2表達和意義，為大腸癌的治療提供參考。

1對象與方法

1.1對象選擇2010年1月至2013年12月在我院收治的資料完整的經(jīng)病理學確認的原發(fā)性大腸癌標本158例，所有患者治療前均未接受過放化療且未合并其他原發(fā)性腫瘤。大腸癌病人的一般情況見表1。

1.2試驗方法

1.2.1標本保存和免疫組化技術檢測選取新鮮冰凍組織，石蠟包埋、切片，按免疫組化試劑盒的說明，分別滴加Shc抗體(購于Santa Cruz,USA)稀釋液和COX-2抗體(購于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司)，4℃孵育過夜，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗，分別滴加生物素標記羊抗兔的二抗IgG 37℃，孵育30 min，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，陰性對照組使用PBS代替一抗反應，染色后200倍顯微鏡下觀察。

1.2.2指標判斷采用半定量積分法判定染色結果，0分：≤5%，1分：6%~25%，2分：26%~50%，3分：51%~75%，4分：>75%，0分：無著色，1分：淺黃色，2分：黃色，3分：棕黃色。染色強度陽性細胞百分數(shù)，“-”：0分，“+”：1~4分，“”：5~8分，“”：9~12分。由2名經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師獨立對免疫組化染色結果分別進行評分，取均值為該病例的終評分。

2結果

2.1Shc和COX-2在大腸癌組織和癌旁組織的表達Shc表達陽性呈棕色顆粒狀，位于大腸癌組織中的細胞質和細胞核。與癌旁組織相比，Shc在大腸癌組織的表達較強(P<0.05)；COX-2表達陽性呈黃色顆粒，位于大腸癌組織中的細胞質，與癌旁組織比較，COX-2在大腸癌組織的表達較強(P<0.05)，見圖1。

2.2大腸癌病人的一般病理資料與Shc和COX-2表達的關系分化程度越低、浸潤越深、遠處轉移和淋巴結轉移的Shc和COX-2表達均有差異(P<0.05)，不同性別、TNM分期Shc和COX-2表達無差異(P>0.05)，Shc在年齡較高者表達較高 (P>0.05)，見表1。

2.3Shc和COX-2在大腸癌組織表達的的相關性Shc陽性132例中122例COX-2呈陽性表達，Shc陰性26例中18例COX-2呈陰性表達，Spearman相關性分析顯示，Shc和COX-2呈正相關關系(r=0.52，P<0.05)。

圖1　Shc和COX-2在大腸癌組織和癌旁組織的表達(×200)

參數(shù)n(%)Shc-+χ2值P值COX-2-+χ2值P值年齡(歲) ≥5084(53.2)62052619.3<0.0510482426.2>0.05 <5074(46.8)20243001834220性別 男118(74.7)16326644.1>0.0520603621.3>0.05 女40(25.3)1012162822100分化程度 高20(12.7)6102227.6<0.051082028.7<0.05 中70(44.3)16203221440142 低68(43.0)414482434300TNM分期 Ⅱ78(49.4)10253946.2>0.0510442224.9>0.05 Ⅲ52(32.9)8142821224160 Ⅳ28(17.7)8515061480浸潤深度 黏膜層0(0.0)000021.1<0.05000021.9<0.05 肌層90(57.0)24244202450160 漿膜層68(43.0)220406432302遠處轉移 是28(17.7)6412631.2<0.052420232.2<0.05 否130(82.3)20407002678260淋巴結轉移 是88(55.7)83044621.7<0.0584236220.1<0.05 否70(44.3)18361602040100

3討論

Shc與大腸癌的關系：(1)Shc作為銜接分子能夠激活Raf和MAPK信號通路，起到調(diào)控淋巴細胞活化的作用，在惡性腫瘤細胞的增殖、分化、轉化及侵襲進程密切相關〔3〕，另外，Shc與生長因子受體蛋白(Grb)2耦聯(lián)，激活受體蛋白酪氨酸激酶，從而進一步將信號傳遞給下游效應器，如炎癥、分化、增殖。(2)Shc Tyr239/240位點磷酸化引起Rho-GTPase依賴的細胞骨架的重新組織，導致細胞能動性增強。(3)Shc基因座在進化上高度保守，編碼3 種重疊蛋白，分子量分別為52、46和66 kD(p52Shc、p46Shc 和p66Shc)，p52Shc和p46Shc基因均定位于1q21染色體上，此染色體區(qū)域與許多人類腫瘤的增殖相關聯(lián)〔4〕。(4)Shc參與介導了由載體激素調(diào)控的細胞增殖和癌變過程中的絡氨酸磷酸化信號與甾體信號之間的交互作用，Shc可感受應激上調(diào)細胞內(nèi)活性氧簇(ROS)，ROS升高又可誘導Shc位點磷酸化，進一步促進ROS產(chǎn)生，導致細胞增殖，移行甚至凋亡〔5〕?？梢奡hc蛋白表達參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程，對大腸癌的治療方案和預后判斷具有重要作用〔6〕。

COX-2是完整的膜結合誘導型蛋白，是哺乳動物體內(nèi)花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在正常組織中不表達或弱表達，但在多種腫瘤中表達較強，尤其在消化系統(tǒng)腫瘤中研究較多，雖然COX-2與腫瘤的確切機制尚不明確，但有研究顯示：(1)COX-2可上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，VEGF表達增高可增加微血管的通透性，促進內(nèi)皮細胞分裂增殖和遷移，誘導和調(diào)節(jié)腫瘤血管形成。(2)COX-2可促進前列腺素(E2)和組胺增加，誘導白細胞介素(IL)-10表達，抑制腫瘤壞死因子(TNF)-α和IL-12產(chǎn)生，使機體免疫監(jiān)控能力降低，降低細胞殺傷能力，有利于腫瘤發(fā)生。(3)COX-2可促進細胞中膜金屬蛋白酶(MMP)-2、尿激酶纖溶酶原激活物(μpa)和膜型金屬蛋白酶(MT-MMP)1的表達，促進腫瘤的侵襲轉移〔7~9〕。

Shc與COX-2的關系較為復雜。研究顯示，磷酸酶和張力蛋白同源物(PTEN)為腫瘤抑制基因，Shc表達與PTEN呈負相關關系，CCRCC 細胞中 PTEN 通過其蛋白磷酸酶活性使 Shc 脫磷酸調(diào)控細胞遷移運動，當CCRCC 細胞轉染PTEN 表達質粒，Shc表達下調(diào)，但轉染磷酸酶活性缺失的 PTEN，Shc表達無變化，說明PTEN抑制細胞遷移通過抑制Shc 磷酸化達到的。COX-2表達與PTEN呈負相關關系，PTEN可通過調(diào)控Akt的表達而影響COX-2的表達，在PTEN突變的細胞中，Akt磷酸化水平較高的細胞COX-2表達較高，PTEN轉染能抑制Akt磷酸化載體，下調(diào)COX-2表達〔10,11〕。

綜上所述，相比于癌旁組織，Shc與COX-2在大腸癌組織中呈現(xiàn)高表達，Shc與COX-2在大腸癌的表達呈正相關關系，但Shc與COX-2均為具有腫瘤抑制作用的PTEN下游蛋白，目前證據(jù)尚不能證明兩者具有因果關系，可能通過某種機制共同參與大腸癌的發(fā)生發(fā)展，Shc與COX-2的關系有待進一步的研究。

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〔2014-04-12修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)