馬齒莧水提取物對咳嗽小鼠模型的鎮咳祛痰作用

馬齒莧水提取物對咳嗽小鼠模型的鎮咳祛痰作用

王國玉1王浩宇1孫嘉楠1佟繼銘

(承德醫學院附屬醫院，河北承德067000)

摘要〔〕目的觀察馬齒莧水提取物(WEPO)的鎮咳祛痰作用。方法采用超聲霧化氨水引咳法誘發小鼠咳嗽，將咳嗽次數合格的小鼠隨機分為WEPO 小、中、大(1.25、2.5、5.0)g/kg劑量組、生理鹽水對照組、咳必清陽性對照組。以引咳潛伏期及咳嗽次數/2 min為指標，評價WEPO的鎮咳作用。采用小鼠氣管酚紅分泌量法，以氣管分泌液中酚紅分泌量為指標，觀察WEPO祛痰作用。結果WEPO 大、中、小劑量組引咳潛伏期分別為(38.54±5.63)s、(30.97±4.78)s、(19.58±4.32)s，均明顯長于生理鹽水對照組〔(15.43±3.49)s，P<0.05或P<0.01〕；咳嗽次數分別為(10.40± 2.07)、(12.88± 3.37)次/2 min，顯著低于生理鹽水對照組〔(20.32±6.48)次/2 min，P<0.01〕。WEPO 大、中劑量組氣管酚紅分泌量為(1.45±0.41)μg/ml、(1.15±0.34)μg/ml，明顯高于對照組〔(0.79±0.28)ug/ml，P<0.01〕，小劑量組為(0.96±0.31)μg/ml，與生理鹽水對照組比較無顯著差異無(P>0.05)。結論WEPO具有明顯鎮咳祛痰作用。

關鍵詞〔〕馬齒莧；水提取物；鎮咳；祛痰

中圖分類號〔〕R285.5〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：承德市科技局資助項目(20122158)

通訊作者：佟繼銘(1951-)，女，教授，碩士生導師，主要從事中藥藥理與毒理學研究。

1承德醫學院中藥研究所 河北省主要研究與開發重點實驗室

第一作者：王國玉(1980-)，女，碩士，主要從事呼吸病學研究。

馬齒莧(Portulaca oleracea L.) 又名馬齒菜、 螞蟻菜、 長壽菜、 五行草等， 屬馬齒莧科一年生肉質草本植物，在許多國家作為藥食兩用植物使用，其性寒味酸，歸肝、大腸經，有清熱解毒，涼血止血，止痢的功效〔1〕，用于熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血和崩漏下血 。馬齒莧資源豐富， 各地均有分布，馬齒莧不僅藥用廣泛而且歷來是人們的食用植物之一。它耐干旱、耐強光、抗病蟲害、易繁殖、生命力強、生長迅速〔2]，據《本草綱目》記載,馬齒莧臨床可用于“散血消腫，利腸滑胎，解毒通淋，治產后虛汗”。現代藥理學研究表明其具有抗菌抗病毒〔3〕，興奮子宮平滑肌松弛骨骼肌，降血糖，降血脂，抗動脈粥樣硬化〔4，5〕，抗氧化抗衰老，提高機體免疫力〔6〕以及促進傷口愈合〔7〕等多種作用。但國內對其鎮咳作用的研究報道較少，本實驗采用傳統方法對其鎮咳作用進行觀察，為馬齒莧藥食作用的進一步研究開闊思路。

1材料與方法

1.1 藥品、試劑及儀器馬齒莧，采自河北省承德市。經承德醫學院藥用植物研究室趙春穎副研究員鑒定為馬齒莧科植物Portulaca oleracea L.的干燥地上部分。藥材標本保存于承德醫學院中藥研究所藥理毒理研究室。氨水(28%)，北京化工廠生產，批號：20101180；咳必清，上海全宇生物科技鄉內制藥有限公司生產，批號：100401。JSC-OK型雙頭式多功能超聲霧化噴霧器，遼寧鞍山市電子醫療儀廠。

1.2 實驗動物昆明種小白鼠，體重22～24 g，雌雄各半，由天津山川紅實驗動物科技有限公司提供，合格證號：SCXK(津)2009-0001。

1.3 馬齒莧水提取物(WEPO)的制備〔8〕取50 g干燥馬齒莧干燥地上部分，加入8倍量的蒸餾水浸泡3 h，煎煮30 min，過濾。濾渣加適量蒸餾水再煎煮30 min，過濾，合并濾液，減壓濃縮至200 ml，得馬齒莧水提取液(含生藥0.25 g/ml)，臨用時用蒸餾水稀釋為0.25、0.125、0.063 g/ml液備用。

1.4 鎮咳實驗〔9]昆明種小鼠，禁食12 h，自由飲水。置于500 ml玻璃鐘罩內，用超聲波霧化器噴霧28% 的氨水5 s，立即取出小鼠。記錄2 min內咳嗽次數。選取2 min內咳嗽次數大于10次為合格，3 d后將合格小鼠50只，隨機分為大、中、小(WEPO 5.0、2.5及1.25 g/kg)劑量組(以生藥計)、咳必清20 mg/kg陽性對照組及生理鹽水對照組，每組10只，雌雄各半，灌胃給藥，給藥容積為20 ml/kg。連續給藥3 d，1次/d，末次給藥45 min后，按用藥前同樣方法噴霧氨水，記錄引咳潛伏期和2 min內咳嗽次數，并計算抑制率。

1.5 祛痰實驗

1.5.1 酚紅標準曲線的繪制精密稱取酚紅1.0 mg，置于10 ml棕色容量瓶內，加2.24 mmol/L NaHCO3溶液至刻度，充分混勻，酚紅濃度為100 μg/ml。再用2.24 mmol/L NaHCO3溶液依次稀釋成酚紅含量為10.0、5.0、2.5、1.0、0.5、0.3、0.1 μg/ml溶液。用721分光光度計于546 nm處測定吸光度(A)。以酚紅濃度為X軸，A值為Y軸，繪制標準曲線。

1.5.2 祛痰實驗昆明種小鼠50只，隨機分為大、中、小WEPO(5.0、2.5和1.25 g/kg)劑量組(以生藥計)、氯化銨15 mg/kg 陽性對照組及生理鹽水對照組，連續灌胃3 d，末次給藥后45 min，腹腔注射0.5% 酚紅20 ml/kg，30 min處死動物，分離氣管，在環狀軟骨下第3～4節處剪一小口，向心方向插入無尖7號針頭插入氣管1 mm，用棉線結扎固定于氣管，用1 ml注射器吸取2.24 mmol/L NaHCO3溶液0.2 ml，緩慢注入氣管內，然后輕輕吸出，反復3次。同樣方法重復3次，合并沖洗液，1 500 r/min離心，紫外分光光度計于546 nm處，以5%NaHCO3溶液為空白對照，測定吸光度(A)。通過酚紅標準曲線計算氣管沖洗液中酚紅含量〔10〕。

2結果

2.1 鎮咳實驗大、中劑量WEPO組小鼠咳嗽次數顯著低于生理鹽水對照組，與生理鹽水對照組比較差異顯著(P<0.05,P<0.01)，小劑量WEPO 組小鼠咳嗽次數低于生理鹽水對照組，但差異無統計學意義(P>0.05)，各劑量WEPO組引咳潛伏期均明顯長于生理鹽水對照組(P<0.05,P<0.01)。見表 1。

2.2 祛痰實驗大、中WEPO劑量組小鼠氣管液中酚紅分泌量顯著高于生理鹽水對照組〔(1.45±0.41)、(1.15±0.34)μg/ml vs (0.79±0.28)μg/ml，P<0.01〕，小劑量WEPO組酚紅排泌量高于生理鹽水對照組，但差異無統計學意義〔(0.96±0.31)μg/ml，P>0.05〕。

表1 　WEPO 對氨水誘發小鼠咳嗽

與生理鹽水對照組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3討論

咳嗽是由于呼吸道上的感受器受到炎癥、異物、分泌物等刺激，由傳入神經傳入延髓或延髓臨近的呼吸中樞的部位，中樞做出指令，傳出神經作用于氣管平滑肌、膈、呼吸肌等，產生咳嗽動作。咳嗽是一種保護性反射動作，但長期、劇烈咳嗽可引起多種并發癥。

臨床常用的鎮咳藥根據其作用機制可分為中樞性鎮咳藥和外周性鎮咳藥兩大類，其中中樞性鎮咳藥，主要通過抑制延髓咳嗽中樞，同時抑制支氣管腺體分泌，鎮咳作用較強而且迅速。外周性鎮咳藥，通過抑制咳嗽反射弧中的某個環節，如感受器、傳入神經或傳出神經等而發揮鎮咳作用。

目前現代醫學治療咳嗽，所應用鎮咳藥多通過抑制咳嗽反射弧中的某個環節，西藥近期療效顯著，迅速緩解癥狀，多需與病因治療聯合應用。中醫藥治療咳嗽，兼鎮咳、平喘、抗菌、抗病毒等多方面作用，標本兼治，遠期療效可靠。

本研究采用霧化氨水引咳法評價其鎮咳效果，其引咳機制是由于氨水刺激呼吸道上皮下能感受化學刺激的感受器誘導咳嗽反射。以咳嗽次數為指標，篩選藥物的鎮咳作用，具有鎮咳作用的藥物可明顯減少動物的咳嗽次數。中樞和外周性鎮咳藥，對該咳嗽模型的咳嗽反射均有抑制作用。本研究結果顯示，WEPO對氨水誘發的咳嗽有顯著的抑制作用，減少咳嗽次數，提示其具有鎮咳作用。

痰、咳、喘是呼吸系統疾病常見3種癥狀，痰刺激呼吸道，誘發咳嗽，久咳引起喘息。大多數祛痰藥物通過增加呼吸道分泌液，覆蓋于黏膜，保護黏膜免受有害刺激引起的咳嗽。分泌液增加亦可稀釋痰液，促進痰排出，減輕其對呼吸道的刺激，緩解咳嗽。本研究結果顯示，WEPO可促進酚紅排泌量，提示WEPO有祛痰作用。

傳統醫學認為馬齒莧具有清熱解毒，利水消腫等作用。現代植物化學和藥理學研究證明馬齒莧含多種化學成分，如生物堿、黃酮苷、蒽醌苷等，它不但可以藥用，還是難得的食用保健食品〔11，12〕。綜上所述，WEPO具有較好的祛痰和鎮咳作用，有效成分及機制有待進一步研究。

4參考文獻

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〔2013-11-07修回〕

(編輯趙慧玲/曹夢園)