DC-CIK治療老年惡性腫瘤的臨床療效

DC-CIK治療老年惡性腫瘤的臨床療效

韓立春陳文慶1張雪瑩1孫寶盛1

(青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東青島266021)

摘要〔〕目的探討樹突細(xì)胞(DC)聯(lián)合細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)治療對(duì)老年惡性腫瘤的免疫功能影響。方法選取2013年3月至2014年3月吉林省腫瘤醫(yī)院收治的老年惡性腫瘤患者60例，DC-CIK治療1個(gè)療程，治療前后行免疫功能指標(biāo)及生活質(zhì)量指標(biāo)自身對(duì)照。結(jié)果與治療前相比，治療后外周血總T淋巴細(xì)胞、T輔助細(xì)胞、自然殺傷(NK)樣T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞均較前明顯增高、抑制性T細(xì)胞明顯下降(P<0.05) ，生活質(zhì)量評(píng)分較前明顯改善(P<0.05)。結(jié)論DC聯(lián)合CIK細(xì)胞免疫治療能顯著提高老年惡性腫瘤患者的免疫功能。

關(guān)鍵詞〔〕DC-CIK；惡性腫瘤；免疫功能

中圖分類號(hào)〔〕R730.51〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)有關(guān)。樹突細(xì)胞(DC)是機(jī)體內(nèi)重要的抗原提呈細(xì)胞，可激發(fā)T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。細(xì)胞因子誘導(dǎo)殺傷細(xì)胞(CIK)是將人外周血單個(gè)核細(xì)胞在體外與多種細(xì)胞因子及抗體共同培養(yǎng)一段時(shí)間后獲得的一群殺傷樣T細(xì)胞，對(duì)腫瘤細(xì)胞具有高效的溶解毒性。DC能夠識(shí)別出腫瘤細(xì)胞，并把腫瘤細(xì)胞的相關(guān)信號(hào)傳遞給 CIK 細(xì)胞，使之發(fā)揮殺傷腫瘤細(xì)胞的功能。因此，DC 能顯著提高 CIK 細(xì)胞針對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷活性。CIK細(xì)胞治療作為目前腫瘤生物治療的首選方案，已在惡性腫瘤治療中取得較好的療效〔1,2〕。老年惡性腫瘤患者年老體弱，自體培養(yǎng)出的DC-CIK細(xì)胞質(zhì)量欠佳，本文嘗試?yán)卯愺w臍帶血DC-CIK細(xì)胞對(duì)這類患者進(jìn)行輔助治療，并就其臨床療效進(jìn)行觀察。

1材料與方法

1.1研究對(duì)象本研究選取2013年3月至2014年3月吉林省腫瘤醫(yī)院收治的老年惡性腫瘤患者60例，均經(jīng)細(xì)胞或病理學(xué)確診，甲狀腺癌9例、肺癌15例、乳腺癌12例、胃癌11例、肝癌6例、結(jié)腸癌7例，男40例，女20例，年齡65～85歲，CIK治療1個(gè)療程以上，每天CIK輸注1次， 10次為1個(gè)療程。

1.2主要試驗(yàn)儀器及試劑雙色熒光標(biāo)記抗體CD 分子單克隆抗體 CD4-FITC /CD8-PE、CD3-FITC/CD16 +CD56-PE、CD25-FITC、CD127-PE、CD4-PC5 購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司，實(shí)驗(yàn)選用美國(guó)貝克曼公司 XLMCL 流式細(xì)胞儀。

1.3CIK制備與回輸CIK由本院腫瘤研究所實(shí)驗(yàn)室規(guī)范制備：采異體臍帶血50 ml，利用淋巴細(xì)胞分離液分離血液中的單核細(xì)胞，按照2×106ml濃度分裝至培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)液含有人白細(xì)胞介素(rhIL)-2,CD3,γ-干擾素(IFN)-γ，在5% CO2、37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，24 h后進(jìn)行細(xì)菌、內(nèi)毒素檢測(cè)無(wú)污染后進(jìn)行下一步DC、CIK的誘導(dǎo)。將培養(yǎng)6 d的DC與CIK按1∶5的比例混合培養(yǎng)，在混合培養(yǎng)的第3天檢測(cè)細(xì)胞活性，并做細(xì)菌和內(nèi)毒素檢測(cè)，無(wú)問(wèn)題給患者使用。

1.4治療方案采用CIK靜脈輸注,每次輸注細(xì)胞數(shù)以1×108～2×108為1個(gè)單位進(jìn)行靜脈輸注，根據(jù)情況進(jìn)行，10次輸注為1個(gè)療程。治療后1 w評(píng)價(jià)療效。

1.5療效評(píng)價(jià)

1.5.1細(xì)胞免疫功能評(píng)價(jià)分別于治療前 1 d及治療結(jié)束后1 w采集清晨空腹外周靜脈血 5 ml，用淋巴瘤細(xì)胞分離液分離出單個(gè)核細(xì)胞后，每個(gè)試管分裝105/100 μl細(xì)胞，分別有各自的抗體4 μl后4℃孵育30 min后，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗2次后流式細(xì)胞儀測(cè)定，計(jì)數(shù)10 000個(gè)細(xì)胞，測(cè)定總T淋巴細(xì)胞、T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞、T抑制/細(xì)胞毒細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞、NK樣T淋巴細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)率及免疫狀態(tài)。

1.5.2生存質(zhì)量評(píng)價(jià)記錄患者食欲、睡眠、精神、體力的變化，以數(shù)字0～5表示，0為無(wú)干擾，5為嚴(yán)重干擾；血常規(guī)、肝、腎功、離子、血糖變化；癥狀、體征的變化及不良反應(yīng)。

1.6安全性評(píng)價(jià)記錄患者癥狀體征的變化及不良反應(yīng)。

2結(jié)果

2.1治療前后T細(xì)胞亞群比例比較患者行DC-CIK細(xì)胞治療后，免疫功能檢測(cè)的各項(xiàng)指標(biāo)均增高，其中CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD56+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+值明顯增高(P<0.05)。見表1。

時(shí)間CD3+CD3+CD4+CD3+CD8+CD3+CD56+CD3-CD56+CD4+/CD8+治療前54.73±3.0731.21±3.0526.09±8.052.1±0.9813.61±4.531.08±0.11治療后63.27±2.5238.35±3.2328.70±7.813.8±1.2521.96±5.981.47±0.13P值<0.05<0.05>0.05<0.05<0.05<0.05

1吉林省腫瘤醫(yī)院

第一作者：韓立春(1974-)，女，碩士，副主任醫(yī)師，主要從事腫瘤內(nèi)科學(xué)研究。

2.2治療前后生活質(zhì)量評(píng)分比較60例患者經(jīng)DC-CIK細(xì)胞治療后，生活質(zhì)量指標(biāo)中食欲不振、失眠、精神萎靡、乏力癥狀均明顯改善(均P<0.05)。見表2。

時(shí)間食欲不振失眠精神萎靡乏力治療前3.78±1.013.31±1.133.59±1.093.72±0.87治療后2.09±0.832.22±0.802.58±0.922.28±0.81P值<0.05<0.05<0.05<0.05

2.3安全性評(píng)價(jià)結(jié)果細(xì)胞回輸后大多數(shù)無(wú)明顯不良反應(yīng)，只有5例患者發(fā)熱，體溫最高達(dá)38.5℃，為一過(guò)性，對(duì)癥處理后可降至正常。血常規(guī)及肝、腎功、離子、血糖未見明顯異常。

3討論

CIK臨床應(yīng)用的研究建立在過(guò)繼性細(xì)胞免疫療法的機(jī)制基礎(chǔ)上，旨在消除腫瘤免疫抑制影響，增加CIK數(shù)量和細(xì)胞毒效應(yīng)，其發(fā)展經(jīng)歷了從NK療法到CIK細(xì)胞以及 DC與CIK聯(lián)合使用的過(guò)程〔3〕。常規(guī)的方法是從患者外周血提取單核淋巴細(xì)胞(PBMC)，或因自體細(xì)胞采集困難可以從臍帶血中獲取，這些細(xì)胞在體外一方面接受腫瘤抗原的刺激分化為抗原提呈的DC細(xì)胞，另一方面經(jīng)過(guò)IFN-γ、IL-2和抗CD3抗體等誘導(dǎo)刺激，成為具有免疫活性CIK細(xì)胞。自體回輸后，這些活化的CIK細(xì)胞不產(chǎn)生明顯的副作用，但可以直接殺傷、抑制腫瘤細(xì)胞，或通過(guò)刺激免疫系統(tǒng)，提升機(jī)體整體抗瘤免疫力。

CIK細(xì)胞兼具T淋巴細(xì)胞組織相容性復(fù)合體(MHC)限制性和NK細(xì)胞非MHC性的殺瘤活性，是廣譜的效應(yīng)細(xì)胞，對(duì)肺癌、結(jié)直腸癌、胃癌、腎癌、乳腺癌、宮頸癌等腫瘤細(xì)胞以及許多耐藥腫瘤細(xì)胞均有顯著殺傷活性。隨著對(duì)CIK的深入研究，目前已有大量文獻(xiàn)報(bào)道將其應(yīng)用于惡性腫瘤治療的臨床研究〔4～7〕。CIK殺瘤機(jī)制是通過(guò)釋放胞質(zhì)顆粒酶B作用于腫瘤靶細(xì)胞；亦可通過(guò)FasL-Fas途徑誘導(dǎo)Fas+腫瘤細(xì)胞凋亡；另外，CIK產(chǎn)生許多炎性細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-2和IFN-α等，可以有效抑制周邊腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)〔8〕。研究〔9〕表明，CIK的應(yīng)用還可以協(xié)同化放療的抗瘤作用。最新文獻(xiàn)〔10〕報(bào)道，體外活化時(shí)加入IL-12因子能明顯增強(qiáng)CIK細(xì)胞的殺傷效應(yīng)；而且， CIK富集培養(yǎng)時(shí)間也得到明顯縮短。

腫瘤形成的一個(gè)重要因素就是失去機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，晚期惡性腫瘤病人表現(xiàn)為逐漸的免疫反應(yīng)不全，腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)引起T 細(xì)胞增殖抑制，免疫系統(tǒng)功能不全，活化和(或)增加免疫細(xì)胞的凋亡達(dá)到削弱機(jī)體免疫功能，逃避免疫監(jiān)視〔11〕。研究顯示，腫瘤患者體內(nèi)CD4+CD25+調(diào)節(jié)T 細(xì)胞明顯高于正常人，從而抑制了機(jī)體免疫功能。李敏等〔12〕顯示治療后的CD4+CD25+T 比例降低，故認(rèn)為CIK 細(xì)胞能在一定程度上提高腫瘤機(jī)體的免疫功能，改善免疫抑制狀態(tài)。

本研究表明患者治療后免疫功能得到改善。由此可見， 經(jīng)過(guò)CIK 細(xì)胞回輸治療后機(jī)體除直接殺傷腫瘤細(xì)胞的能力較治療前獲得提高外， CIK細(xì)胞還通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體其他免疫細(xì)胞的功能， 包括增強(qiáng)抗腫瘤活性、刺激NK 細(xì)胞生長(zhǎng)、改變T 細(xì)胞亞群比率、刺激機(jī)體T 細(xì)胞增殖等方式使患者增強(qiáng)免疫監(jiān)視作用， 維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡， 增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。治療過(guò)程中，部分患者出現(xiàn)發(fā)熱、畏寒等不適，可能是由于治療后大量細(xì)胞因子釋放作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生的體溫上調(diào)反應(yīng)。

綜上所述，CIK易于體外培養(yǎng)、增生速度快，可提高機(jī)體免疫力，安全性高，不良反應(yīng)少，用于治療老年惡性腫瘤可改善患者的生活質(zhì)量和延長(zhǎng)其生命。

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〔2014-05-07修回〕

(編輯袁左鳴)