高效液相色譜法測定保泰松片的有關物質

李 玲 姜 燕 陳乃江

江蘇省連云港市藥品檢驗所，江蘇連云港 222006

保泰松片為非甾體類抗炎鎮痛藥，用于治療類風濕性關節炎、風濕性關節炎及痛風。保泰松片的質量標準收載于衛生部藥品標準二部第5冊［1］，但現有質量標準中未收載其有關物質檢查項，本研究查閱相關文獻［2-6］，發現目前國內還沒有文獻報道保泰松片的有關物質。保泰松片在生產過程中可能會引入工藝雜質，也可能會產生降解產物［7］，而且本品不良反應發生率較高［8-11］，為了更好地控制本品的質量，我們采用高效液相色譜法對保泰松片中的工藝雜質及可能降解雜質進行了測定和方法學考察，并對收集到的2個廠家的4批樣品進行了檢驗，結果表明該方法專屬性強，操作簡便，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀、Waters 2996 DAD檢測器，Empower色譜工作站，Sartorius BP-211D電子天平，PHS-3C型酸度計，BRANSON B5500S-MT型超聲儀。

對照品保泰松（批號100481-200601，含量99.9％）購自中國食品藥品檢驗研究院；保泰松片（A廠家，國藥準字H41024168，批號13082702，14043001，15012101；B廠家，國藥準字H41025373，批號20141001），規格均為0.1g；乙腈、甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

采用Phenomenex Luna C18（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱；流動相為乙腈-水（磷酸調pH至3.0）（50∶50）；流速為1.0mL/min；檢測波長為239nm；柱溫為30℃；進樣量為10μL。理論板數按保泰松峰計算不低于4000，保泰松與相鄰雜質峰的分離度應符合要求。

2.2 溶液的制備

取本品20片，除去包衣后，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲處理30min，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液適量，用甲醇定量稀釋制成每1mL約含保泰松20μg的溶液，作為對照溶液。

精密稱取保泰松對照品10.0mg，置100mL量瓶中，加甲醇超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

3 方法

3.1 強制降解試驗

取A企業樣品（批號：13082702）進行高溫、水浴、光照、酸、堿和氧化破壞的強制降解試驗［12-15］。

3.1.1 高溫破壞 取本品細粉適量，105℃放置2h，精密稱取適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，照“2.3”項下配制供試品溶液。

3.1.2 水浴破壞 精密稱取本品細粉適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約20mL，超聲處理30min，水浴溫度加熱3h，放冷，用甲醇稀釋定容，搖勻濾過，取續濾液。

3.1.3 光照破壞 取本品供試品溶液置4500lx日光燈下，照射24h。

3.1.4 酸破壞 精密稱取本品細粉適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加1mol/L鹽酸溶液2mL，放置6h，加1mol/L氫氧化鈉溶液2mL中和，用甲醇稀釋定容，搖勻濾過，取續濾液。

3.1.5 堿破壞 精密稱取本品細粉適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加1mol/L氫氧化鈉溶液2mL，放置7h，加1mol/L鹽酸溶液2mL中和，用甲醇稀釋定容，搖勻濾過，取續濾液。

3.1.6 氧化破壞 精密稱取本品細粉適量（約相當于保泰松50mg），置25mL量瓶中，加甲醇約10mL，超聲處理30min，再加30％過氧化氫溶液2mL，放置5h，用甲醇稀釋定容，搖勻濾過，取續濾液。

3.1.7 輔料干擾試驗 取不含保泰松的空白輔料適量，制成空白輔料溶液。

3.1.8 強制降解試驗結果 按“2.1”項下色譜條件測定上述溶液，記錄色譜圖，見圖1，試驗結果表明：各降解產物峰與保泰松主峰完全分離，輔料無干擾。說明本法專屬性強，適用于保泰松片有關物質的測定。

3.2 檢測限和定量限

精密吸取保泰松對照品溶液適量，加甲醇逐步稀釋至色譜圖中保泰松峰高分別為噪音的3倍和10倍，測得保泰松的檢測限和定量限分別為0.2μg/mL和0.5μg/mL。

3.3 精密度試驗

取樣品測定項下的對照溶液，照“2.1”項下的色譜條件，連續進樣測定6次，保泰松峰面積的RSD為0.7％。結果表明儀器精密度符合要求。

3.4 穩定性試驗

取樣品測定項下的供試品溶液在0、2、4、8h分別測定保泰松與各雜質的峰面積。結果單個最大未知雜質均為0.09％，雜質總量均為0.22％，說明溶液在8h內穩定。

圖1 強制降解試驗色譜圖

3.5 樣品有關物質檢測

根據供試品溶液中的有關物質含量和強制降解試驗條件下的雜質降解情況，制定保泰松片的有關物質限度。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的0.5倍（0.5％），各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積（1.0％）。結果批號分別為13082702、14043001、15012101、20141001的樣品中單個最大未知單雜分別為0.09％、0.09％、0.05％、0.07％，雜質總量分別為0.22％、0.19％、0.18％、0.15％。

4 討論

4.1 流動相的選擇

考察緩沖液-乙腈、水-甲醇系統在不同pH條件下對峰型的影響，對雜質與主峰的分離及雜質之間的分離情況的影響。發現在pH3.0條件下，雜質均能完全分離；雜質在乙腈系統下，雜質的分離情況優于甲醇系統；在水系統與緩沖液系統下，雜質分離情況基本相當?？紤]流動相操作簡便，且對色譜柱損害最小原則，選擇乙腈-水（pH 3.0）作為流動相。

4.2 檢測波長的確定

本研究通過DAD檢測器進行光譜掃描，結果顯示保泰松的最大吸收波長為239nm，按規定貯存的樣品雜質和強制降解試驗條件下的降解雜質的最大吸收波長均在236～239nm之間；可見各種雜質的最大吸收波長均非常接近保泰松的最大吸收波長，所以試驗選擇在保泰松的最大吸收波長239nm下測定有關物質。

4.3 雜質譜分析

不同條件下的降解試驗表明，保泰松片在堿性條件下較穩定，在光照、氧化條件下略有降解，在酸、高溫、水浴條件下降解嚴重；各個降解試驗條件下的降解雜質為光照（RRT=0.52）、氧化（RRT=0.52、1.47）、酸（RRT=0.60、1.47）、高溫（RRT=0.52）、水?。≧RT=0.52）；供試品溶液放置48h，有輕微降解，降解雜質為RRT=0.52、1.47，而在兩個廠家4批供試品溶液中單個最大未知雜質均為RRT=0.52，該雜質在光照、氧化、高溫、水浴條件下均有降解，要進一步確認主要降解產物的結構，應用LC-TOF-MS，LC-MS-MS聯用技術分析。

本研究采用的高效液相色譜法能夠較準確地測定保泰松片中的有關物質，各雜質峰均能有效分離，方法專屬性強，靈敏度高，操作簡便，方法可靠。

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