重慶市榮昌區(qū)豬瘟病毒的分子生物學(xué)檢測

蔣夢娜 ，曹禮靜 ，李 超 ，范才良 ，蔣 慶 *

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌區(qū)職教中心，重慶 榮昌 402460；3.西南大學(xué)榮昌校區(qū)水產(chǎn)系，重慶 榮昌 402460；4.重慶市榮昌區(qū)畜牧獸醫(yī)局，重慶 榮昌 402460）

1 材料

1.1 儀器 0.1～2.5、10～100、100～1 000 μL 微量加樣器，TGL20M高速冷凍離心機(jī)，96空梯度PCR（德國），WD800D微波爐，DYY-6B穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀，ChampGel60001全自動凝膠成像系統(tǒng)，F(xiàn)A2104S電子天平。

1.2 試劑盒 豬瘟病毒通用型RT-PCR檢測試劑盒（北京世紀(jì)元亨動物防疫技術(shù)有限公司生產(chǎn)），批號：CSF20150214P，生產(chǎn)日期：20150214。

2 方法

2.1 樣品采集 2015年2月26日、3月5日、3月12日、3月19日、3月26日、4月2日于榮昌區(qū)某屠宰場進(jìn)行6次采樣，每次隨機(jī)采取5份豬淋巴結(jié)，共計(jì)30份，用滅菌自封袋統(tǒng)一編號置－20℃冰箱保存待檢。

2.2 試驗(yàn)操作 直接用RT-PCR方法檢測，具體操作根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行。

3 結(jié)果

本次試驗(yàn)共檢測30份豬淋巴結(jié)，檢測得出豬瘟病毒陽性0份，陽性率為0%，圖1、圖2、圖3分別為RT-PCR對30份淋巴結(jié)的檢測結(jié)果。

圖1 RT-PCR檢測結(jié)果

圖2 RT-PCR檢測結(jié)果

圖3 RT-PCR檢測結(jié)果

4 結(jié)論與分析

4.1 結(jié)論 本次試驗(yàn)共檢測了30份豬淋巴結(jié)樣本，結(jié)果豬瘟陽性率為0%。表明榮昌區(qū)2015年春季不存在豬瘟感染。

4.2 分析 本次檢測HCV陽性率為零的原因，筆者認(rèn)為有以下幾點(diǎn)：首先榮昌地區(qū)連續(xù)3年使用了政府采購的合格的豬瘟疫苗；二是榮昌區(qū)普遍在30～35日齡閹割仔豬時進(jìn)行豬瘟首免，散養(yǎng)戶在春秋季進(jìn)行集中免疫，同時給空懷母豬也要進(jìn)行免疫，規(guī)模養(yǎng)殖場在70～80日齡會自主進(jìn)行二次免疫；三是榮昌人有良好的養(yǎng)豬習(xí)慣和上千年的養(yǎng)豬經(jīng)驗(yàn)，懂得盡快讓仔豬吃上初乳來獲得母源抗體，使得初生仔豬具有較強(qiáng)的免疫力。

4.3 豬瘟診斷方法的選擇 傳統(tǒng)的豬瘟診斷方法主要包括兔體交叉免疫診斷、免疫酶染色試驗(yàn)、病毒分離與增毒試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)、豬瘟間接血凝試驗(yàn)等等，新發(fā)展的檢測方法有：ELISA試驗(yàn)、RT-PCR檢測試驗(yàn)、DNA探針、膠體金試紙檢測、血清中和試驗(yàn)等。常用的診斷如兔體交叉試驗(yàn)，靈敏度高，但耗時長且需要活體無抗兔；RT-PCR具有特異性強(qiáng)、快速和可靠性高的優(yōu)點(diǎn)。對豬瘟進(jìn)行診斷或流行病學(xué)調(diào)查時，應(yīng)用RT-PCR檢測是較理想的選擇[1-3]。

4.4 豬瘟疫苗品種的選擇 如亞單位疫苗、重組疫苗、DNA疫苗、標(biāo)記疫苗，目前各個養(yǎng)殖場普遍使用豬瘟兔化弱毒疫苗[4]。雖然HCV存在不同的基因群，但并未發(fā)現(xiàn)不同的血清型，說明血清學(xué)上的差異并不明顯。我國雖然存在多基因型的毒株，但是HCV已經(jīng)發(fā)生的基因變異尚未對目前的豬瘟免疫構(gòu)成威脅，豬瘟兔化弱毒苗對不同基因型毒株仍可產(chǎn)生交叉保護(hù)力[5]。

4.5 導(dǎo)致豬瘟免疫失敗的可能原因 主要受疫苗質(zhì)量、免疫操作、免疫程序、持續(xù)感染、牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）干擾、免疫抑制病干擾的影響；另外，飼養(yǎng)管理不當(dāng)、豬的營養(yǎng)狀況和人為因素等也會影響免疫成敗。

[1] 胡曉苗，張丹俊，汪麗，等.豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室診斷研究進(jìn)展[J].畜禽業(yè)，2007（3）：21-23.

[2] 曲春玲.豬瘟診斷技術(shù)的比較[J].中國動物保健，2014，16（6）：55-56.

[3] 杭麗，皇甫抗棟，沈玉磊.豬瘟診斷技術(shù)的研究進(jìn)展[J].中國畜禽種業(yè)，2013（1）：46-48.

[4] 羅廷榮，莫揚(yáng)，吳文德，等.RT-PCR技術(shù)檢測豬瘟病毒的應(yīng)用研究[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報，2004，26（4）：307-312.

[5] 涂長春，萬遂如.我國豬瘟的流行現(xiàn)狀、原因與防制對策[A].豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜傳染病學(xué)分會第五屆理事會第二次全體會議暨防檢疫專業(yè)委員會第7次學(xué)術(shù)交流會論文集[C].2002：5-8.