體外釋放度測定方法的探討

摘要：目的 研究體外釋放度測定方法。方法 探討體外釋放度的研究概況，主要包括體外釋放度實驗條件如釋放裝置、取樣時間和取樣方法等對緩、控釋制劑體外釋放度的影響以及體外釋放度測定的方法。結(jié)果 裝置共有七種，釋放度測定中紫外分光光度法使用較多。結(jié)論 體外釋放度檢查條件更加多樣，測定方法更加完善。

關(guān)鍵詞：釋放度；檢查條件；測定方法；探討

釋放度系指藥物從緩釋制劑、控釋制劑、腸溶制劑及透皮貼劑等在規(guī)定條件下釋放的速率和程度[1]。體外釋放度檢查不僅是制劑質(zhì)量控制的重要手段，并在體內(nèi)外相關(guān)性建立以后更加成為對制劑體內(nèi)藥物生物利用度進行研究、評價與預(yù)測的有效的、不可或缺的替代方法。可保證藥物不會突釋最終釋放完全，并減少\"峰谷\"現(xiàn)象，平穩(wěn)血藥濃度，藥物治療作用持久，避免毒副作用等。

1釋放度檢查方法在我國的確立和發(fā)展

隨著緩控釋技術(shù)的迅速發(fā)展，直至20世紀80年代，釋放度的概念在溶出度的意義基礎(chǔ)上提出[2]。美國藥典1985年版率先引入釋放度檢查法[3]，并對緩控釋、腸溶制劑的溶出進行評價。中國藥典在1995年版中引入釋放度檢查法，釋放度的檢測方法在我國確立之后，2005年版收載釋放度檢查品種26個，2010年版收載釋放度檢查品種38個，其中緩釋制劑21個，腸溶制劑16個，貼劑1個。隨著品種的增加釋放度測定方法也越來越多，對有關(guān)藥物的釋放度研究將有助于完善我國的藥品檢驗標準，提高藥物制劑研制水平，確保藥物的臨床療效。

2釋放度檢查條件

2.1裝置 目前，用于釋放度測定的裝置共有7種，分別是裝置1（轉(zhuǎn)籃法），裝置2（槳法），裝置3（往復(fù)筒法），裝置4（流通池法），裝置5（槳碟法），裝置6（轉(zhuǎn)筒法），裝置7（往復(fù)架法）。美國藥典收錄了以上7種裝置，英國藥典共收錄了4種釋放度的測定裝置：轉(zhuǎn)籃法，槳法，往復(fù)筒法，流通池法，中國藥典共收錄了3種裝置：籃法、槳法、小杯法，日本藥典共收錄了3種釋放度的測定裝置：轉(zhuǎn)籃法，槳法，流池法。

裝置1和2最適合緩釋制劑（腸溶制劑）釋放度的測定，片劑多選擇槳法，轉(zhuǎn)籃法多用于膠囊劑、丸劑或漂浮的制劑，裝置3或4適用于研究溶解性較小的緩釋藥物制劑的體外釋放度，只用于透皮給藥系統(tǒng)釋放度的測定裝置是5和6，以上裝置中不僅能夠測定緩釋制劑還可測定透皮給藥系統(tǒng)釋放度的是裝置7。適用于小劑量藥物或測定響應(yīng)值小的藥物[4]，類似于一個小型的槳法：溶出杯只有250ml，它也可用于緩釋制劑和透皮給藥系統(tǒng)釋放度的測定。

轉(zhuǎn)籃法和槳法是常用的兩種裝置，景秋芳[5]等考察了轉(zhuǎn)籃法和槳法對葛根素緩釋片釋放度的影響，結(jié)果顯示兩者之間沒有明顯差異，而奚煒[6]等對三七總皂苷脈沖遲釋片體外釋放度影響因素的研究中則發(fā)現(xiàn)使用槳法藥片會出現(xiàn)上浮，并且由于有藥片與容器壁碰撞發(fā)生裂片導致試驗失敗，如美國藥典中鹽酸普魯卡因胺緩釋膠囊的測定中就使用了不銹鋼圈。

往復(fù)筒法適用于在釋放度測定過程中需要有pH變化的劑型，它擁有生物相關(guān)性、靈活性、順應(yīng)性、裝置簡單等特征，相對于裝置1和2來說，裝置3不會受介質(zhì)中氣體含量的影響[7]，Satish Perivilli[8]等利用USP3研究浸率對模擬流體動力學的影響，發(fā)現(xiàn)在USP3中流體動力學具有復(fù)雜性和周期性流動結(jié)構(gòu)。

流通池法與常用的籃法和槳法相比，具有更好的體內(nèi)外相關(guān)性，它通過在測試中改變pH值來適應(yīng)生理條件，并設(shè)置了多種流通池可對多種劑型進行測試，Upkar Bhardwaj[9]等為USP4研制了一個新型滲析適配器，結(jié)果表明該裝置對于脂質(zhì)體和其它分散劑型的體外釋放測定是可行且有辨別力的。在口腔薄膜體外溶出測試中，Alessandra Adrover[10]等利用USP1、USP2和流池法進行了比較，結(jié)果為流池法測定的數(shù)據(jù)比其它兩種方法更具重現(xiàn)性和可靠性。

同樣是用于透皮貼劑釋放度測定的槳碟法裝置，中國藥典的碟片尺寸比美英兩國藥典的大，造成碟片與轉(zhuǎn)槳的相對距離不同，從而使溶出介質(zhì)的流體力學特征發(fā)生改變，杯底的介質(zhì)流動變得緩慢，待測物質(zhì)在介質(zhì)中的擴散受到影響，造成了\"死體積\"[11]。對槳碟法不適用的制劑應(yīng)采用轉(zhuǎn)筒法裝置測定釋放度[12]，陳華[13]等報道了丁丙諾啡透皮貼劑在釋放度測定中槳碟法與轉(zhuǎn)筒法的差異，結(jié)論為中國藥典槳碟法裝置在測量透皮貼劑的釋放度時不能完全替代美國藥典轉(zhuǎn)筒法裝置。

往復(fù)架法為美國藥典專有，其優(yōu)點是可以在規(guī)定的時間點上自動轉(zhuǎn)換到新的溶劑杯中，不需人工看管，所有取樣點的樣品可在最后一起進行測定，節(jié)省了測定的時間[14]。但是，只有極少數(shù)廠商生產(chǎn)裝置USP7[15]，因此實踐中具體選擇哪種裝置，應(yīng)結(jié)合藥物需求和裝置的特點來進行篩選。

2.2取樣時間及方法 釋放度測定過程中一般取樣3～5次，至少取3次，第1次用于檢查所測藥物是否具有緩釋性，確保不會有突釋現(xiàn)象（累積釋放率約30%），時間是開始釋放的第0.5～2h；第2次的取樣在累積釋放率約50%時（不同劑型、不同釋藥特性的藥物釋放達到50%所用時間不同），第3次的取樣是為了考察藥物的釋放是否能夠基本完全（累積釋放率≥80%）。由于緩控釋制劑的釋放比較緩慢，整個測定需要十多個小時甚至更長，其耗時耗力的缺點給測定帶來不便，自動取樣器的出現(xiàn)提供了更便捷的方法，減少了諸多取樣操作，相應(yīng)的人為操作誤差也減少，同時提高實驗效率。但是自動過濾取樣器對于某些藥物具有吸附作用，會影響測定結(jié)果。

李詩薈[16]等研究了不同取樣方法對萬古霉素植入劑體外釋放度的影響，有順序取樣法[17]、部分換液法[18]和等時間間隔全換液取樣法，順序取樣法：在每個預(yù)定的取樣時間點終止一個釋放體系，取上清液置-20℃冰箱中保存待測，每個點平行操作3次。部分換液取樣法：在預(yù)定的取樣時間點取出10%的釋放液（并補充同溫等量的新鮮介質(zhì)），置-20℃冰箱中保存待測，每個點平行操作3次。等時間間隔全換液取樣法：每隔相同時間（如，24h）取樣一次，每次把所有釋放液都取出，同時補加同溫新鮮介質(zhì)。研究結(jié)果顯示24 h內(nèi)不同的取樣方法對測定結(jié)果影響較小。但在實際釋放度測定操作中，部分換液取樣法更加簡捷，操作起來更加方便，使用率更頻繁。

3釋放度測定方法

3.1高效液相色譜法（HPLC法） 高效液相色譜法由于其專屬性好、分辨率高、靈敏度高、操作自動化，常用于釋放度的測定。中國藥典2010年版收載的38個釋放度品種中有14個品種采用此法測定釋放度。此法的應(yīng)用可提高測定的準確性。其缺點是分析成本高，分析時間長。

3.2紫外分光光度法（UV法） 由于紫外分光光度法靈敏度高、儀器設(shè)備簡單，操作簡便、快速，釋放度的測定大多采用UV法，中國藥典2010年版收載的38個釋放度品種中有20個品種采用此法測定釋放度，其中主要為吸收系數(shù)法和標準品對照法，對無化學對照品的多組分藥物及僅有微生物效價標準品而無化學對照品的抗生素采用自身對照法。缺點是專屬性差和線性范圍窄。

3.3其它方法 在2010版中國藥典中釋放度的測定其它方法采用較少，只有個別品種，硫酸亞鐵緩釋片和碳酸鋰緩釋片采用原子吸收分光光度法，硫酸慶大霉素緩釋片采用一階導數(shù)光譜法，氯化鉀緩釋片采用顯色法（鉻酸鉀作為指示液，用硝酸銀滴定液滴定至溶液顯橙黃色）。

4結(jié)論

體外釋放實驗的目的是評價緩控釋制劑質(zhì)量并預(yù)測其體內(nèi)效應(yīng)，建立體內(nèi)外相關(guān)性。釋放度裝置還要不斷改善以適用于多種劑型的測定，對于難溶性的藥物應(yīng)側(cè)重介質(zhì)的選擇，如加入表面活性劑等，使其可以更好地建立體內(nèi)外相關(guān)性，隨著測定設(shè)備更趨于自動化，這將大大有助于對現(xiàn)代制劑的客觀評價和提高制劑的質(zhì)量，但實際上，選擇一種適宜的釋放度測定方法，客觀的評價并盡可能的反映制劑的內(nèi)在質(zhì)量仍然是我們努力的方向。

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編輯/申磊