蒙藥額日敦烏日勒對大鼠周圍神經損傷早期c-fos表達及神經功能的影響

蒙藥額日敦烏日勒對大鼠周圍神經損傷早期c-fos表達及神經功能的影響

額爾敦朝魯，包春生，周鐵寶，趙福全，胡玉榮，李立

(內蒙古民族大學附屬醫院，內蒙古 通遼 028007)

摘要：目的觀察額日敦烏日勒對大鼠坐骨神經損傷早期c-fos表達及神經功能的影響，探討其療效及作用機理。方法將64只SD大鼠隨機分為假手術組、模型組、陽性對照組、額日敦烏日勒組。除了假手術組外建立坐骨神經夾持損傷模型，陽性對照組大鼠每日給予維生素B1和維生素B12各3 mg/kg、10 μg/kg；額日敦烏日勒組大鼠每日給予額日敦烏日勒0．3 g/kg，灌胃體積均為2 mL/100 g，觀察造模后1周、4周每組大鼠坐骨神經功能指數(SFI)、神經傳導速度(NCV)及坐骨神經中c-fos表達變化。結果治療1周后，假手術組、陽性對照組、額日敦烏日勒組SFI值較模型組差異有統計學意義(P<0．05),且額日敦烏日勒組優于陽性對照組 (P<0．05) ；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，NCV值有所上升(P<0．05)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，c-fos蛋白表達灰度值均明顯增高(P<0．05)。治療4周后，模型組、假手術組、陽性對照組、額日敦烏日勒組SFI值差異無統計學意義(P> 0．01)，額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，NCV值明顯提高(P<0．05)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較,c-fos蛋白表達灰度值均明顯增高(P<0．05)。結論額日敦烏日勒對周圍神經損傷有一定的療效，其作用機制可能是通過抑制c-fos表達,從而起到促進坐骨神經感覺和運動功能恢復的作用。

關鍵詞：額日敦烏日勒；坐骨神經損傷；坐骨神經功能指數；免疫組化；c-fos蛋白

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.11.022

中圖分類號：R722.14文獻標志碼： A

基金項目：內蒙古自治區衛生廳項目(2005061)。

作者簡介：額爾敦朝魯(1963-)，男,醫學碩士，教授，主任醫師，主要從事神經系統感染免疫性疾病研究。

收稿日期:(責任編輯：張瑞彬2014-11-14)

Erdunwurile on C-fos expression and nerve function of early peripheral nerve injury in rats

Eerdunchaolu, BAO Chunsheng, ZHOU Tiebao, ZHAO Fuquan, HU Yurong, LI Li

(Affiliated Hospital of Inner Mongolia University for Nationalities, Tongliao 028007,

Inner Mongolia Autonomous Region,China)

Abstract：ObjectiveThe effects of Eridunwurile on c-fos expression and the neural function of Early stage following sciatic nerve injury in rats are observed through experiments, to explore the effects and mechanism of it. MethodsThe 64 SD rats were randomly divided into sham-operated group,model group, positive control group and Eridunwurile group. In addition to sham-operated group was established sciatic nerve injury model,positive control group's rats was given 3 mg/kg,10 μg/kg of vitamin B1,and vitamin B12;Erdunwurile group’s rats was given 0.3 g/kg,2 mL/100 g.At 1st and 4th weeks after treatment, 8 rats from each group detected sciatic nerve function index(SFI), and nerve conduction velocity (NCV) and grey value of c-fos positive expression. ResultsSFI: At 1st week after treatment, the recovery of Eridunwurile low-dose group, Eridunwurile high-dose group and positive control group was obviously superior to the model group,there is statistically significant (P<0．05); Eridunwurile low-dose group was significantly different from positive control group (P<0．05). TWL: At 1st week after treatment, compared with model group, TWL of Eridunwurile low-dose group were significantly prolonged. (P<0．05). NCV: At 1th and 4th weeks after treatment, compared with the model group, the NCV of Eridunwurile low-dose group and positive control group were obviously accelerated(P<0．05). After 4 weeks treatment Model group, control group, positive control group, the forehead, SFI value, le group no significant statistically(P> 0．01), Grey value of C-FOS positive expression：At 1st and 4th weeks after treatment, Gray value of Eridunwurile low-dose group, Eridunwurile high-dose group and positive control group was significantly higher than the model group (P<0．05); Gray value of Eridunwurile low-dose group was significantly higher than the positive control group(P<0．05). ConclusionErdunwurle to be effective treat sciatic nerve injury in rats, its mechanism is improve the conductive function, analgesia and recovery of sciatic nerve functional by inhibited c-fos expression.

Keywords：Eridunwurile;sciatic nerve injury; thermal withdrawal latency;sciatic nerve cduction velocity;c-fos protein

周圍神經損傷是因直接或間接因素(如外傷、感染、免疫、代謝障礙等)引起神經干或其分支損傷而導致神經功能缺失。周圍神經損傷再修復是一個復雜的過程，研究表明c-fos 表達參與軸突對傷害性刺激的反應，對神經受到外界刺激后能夠迅速作出反應而進行表達[1]。蒙藥額日敦烏日勒治療周圍神經損傷療效確切，具有清毒熱、殺粘疫、開竅、調理體質、清血熱等功效，前期研究已證實額日敦烏日勒對坐骨神經損傷后的修復及神經功能的恢復具有明顯的促進作用[2]。本研究觀察藥物干預下坐骨神經中c-fos表達變化，為蒙藥治療周圍神經損傷提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組實驗動物采用SD大鼠64只，體質量170～230 g，雌雄各半，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號:SCXK(北京)2006-0009。應用EXCEL軟件將動物按體質量隨機分組，分為假手術組、模型組、陽性對照組、額日敦烏日勒組等4組，每組16只。

1.2模型制作大鼠稱重后，用新配制的10%水合氯醛 (10 mL/kg)腹腔注射麻醉，剪去手術區域的毛，俯臥位固定在自制的鼠板上，并消毒手術區域。消毒完后于右股骨后外側縱行切口，鈍性分離肌肉組織，暴露坐骨神經，用特制的止血鉗擠壓坐骨神經(扣到止血鉗的第一扣)10 s后松解止血鉗并關閉切口，注射青霉素0．15×106U/(kg·d)防止感染。假手術組僅暴露坐骨神經，不造模。術后觀察各組大鼠一般情況。

1.3處理方法額日敦烏日勒組灌胃額日敦烏日勒0．3 g/kg，陽性對照組灌胃維生素B13 mg/kg+維生素B1210 μg/kg，灌胃體積為2 mL/100 g， 2次/d灌胃，連續灌胃4周。假手術組和模型組灌胃同體積蒸餾水。

1.4標本制作分別在造模1周、4周時，將各組大鼠隨機選取8只，用10%水合氯醛 (10 mL/kg)腹腔注射麻醉，將含有4%多聚甲醛溶液和0．9%氯化鈉溶液的灌注針插入左心室，打開灌流器用0．9%氯化鈉溶液進行灌注，同時剪開右心耳，當肝臟發白時將其關閉，打開含有4%多聚甲醛溶液進行灌注，待大鼠全身變硬后結束灌注。剪開大鼠右側臀股交界處皮膚，鈍性分離肌肉、筋膜等組織，取出損傷區1 cm的坐骨神經。

1.5行為學檢測自制長59．5 cm、寬10 cm、高10 cm的大鼠行走箱，箱底鋪一張標記好的白紙后將大鼠雙側后肢沾上墨水放進行走箱內。將印有大鼠雙后肢足印的白紙取出后選取最清楚的足印，用0．02 mm精度的游標卡尺測量雙后肢1～5、2～4足趾的間距和足印長度。用Bain[3-4]公式計算SFI。

1.6免疫組化檢測分別在1周、4周時，各組取8只大鼠坐骨神經置于4%多聚甲醛固定液中固定24 h。常規脫水透明后石蠟包埋組織，切4 μm厚的切片。用SP免疫組化染色方法檢測坐骨神經干中c-fos蛋白的表達情況。在200倍鏡下每張切片連續選取5個視野進行灰度值測定，并取其平均值。

2結果

2.1坐骨神經功能指數(SFI)檢測治療1周后，與假手術組比較其他3組SFI均明顯降低 (P<0.05) ；與模型組比較，額日敦烏日勒組和陽性對照組SFI恢復明顯優于模型組(P<0．05) ；額日敦烏日勒組優于陽性對照組(P<0．05)。治療4周后，各組大鼠坐骨神經功能基本恢復正常，各組間差異無統計學意義(P>0．05)。見表1。

表1　各組SFI結果比較

注：與假手術組比較，#P<0．05；與模型組比較，△P<0．05；與陽性對照組比較，▲P<0．05

2.2坐骨神經傳導速度(NCV)檢測治療1周，與假手術組比較，模型組和陽性對照組NCV明顯減慢(P<0．05)；與模型組比較，額日敦烏日勒組NCV明顯加快 (P<0．05) ；與陽性對照組比較，額日敦烏日勒組NCV明顯加快 (P<0．05)。治療4周，與假手術組比較，模型組和陽性對照組NCV明顯減慢 (P<0．05)；與模型組比較，額日敦烏日勒組NCV明顯加快 (P<0．05)；與陽性對照組比較，額日敦烏日勒組NCV也明顯加快(P<0．05)。見表2。

表2　各組NCV結果比較

注：與假手術組比較，##P<0．01；與模型組比較，△△P<0．01；與陽性對照組比較，▲P<0．05

2.3免疫組化檢測治療1周后，與假手術組比較，額日敦烏日勒組差異無統計學意義(P>0．05)，而其他2組灰度值明顯降低(P<0．05)；與模型組比較，額日敦烏日勒組和陽性對照組灰度值明顯增高(P<0．05)；與陽性對照組比較，額日敦烏日勒組灰度值也明顯增高(P<0．05)。治療4周后，各組間的比較與造模1周相同。見表3，圖1、圖2。

表3　各組坐骨神經c-fos表達灰度值比較 ± s)

注：與假手術組比較，#P<0．05；與模型組比較，△P<0．05；與陽性對照組比較，▲P<0．05

(400倍，A：假手術組，B：模型組，C：陽性對照組，D：額日敦烏日組) 圖1　治療1周后c-fos免疫組化結果

(400倍，A：假手術組，B：模型組，C：陽性對照組，D：額日敦烏日組) 圖2　治療4周后c-fos免疫組化結果

3討論

周圍神經通過神經元將信息沿著感覺和運動纖維傳遞，參與軀體與內臟的運動、感覺和植物功能調節[5]。體內外環境發生劇烈變化時可使其受到損傷，神經損傷段的近、遠端出現一系列復雜的病理生理變化，其神經元及微環境發生改變，從而發生運動和感覺功能的障礙[6]。c-fos作為在原癌基因家族中快速反應基因，參與神經纖維對傷害性刺激的反應，啟動c-fos的靶基因使NGFmRNA 轉錄增加，促進NGF的合成，從而促進損傷神經的修復[1]。

本實驗研究結果表明，治療1周后，額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，SFI值高于模型組(P<0．05)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，NCV值有所上升(P<0．05)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，c-fos蛋白表達灰度值均明顯增高(P<0．05)。治療4周后，模型組、假手術組、陽性對照組、額日敦烏日勒組SFI值無顯著差異(P>0．01)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，NCV值明顯提高(P<0．05)；額日敦烏日勒組、陽性對照組與模型組比較，c-fos蛋白表達灰度值均明顯增高(P<0．05)，表明額日敦烏日勒具有抑制c-fos蛋白表達的作用，從而促進損傷神經的修復，提高神經傳導速度，促進坐骨神經損傷大鼠運動功能的恢復。

參考文獻：

[1] NARITA M, OZAKI S, NARITA M, et al Change in the expression of c-fos in the rat brain following sciatic nerve legation [ J] . Neu rosci Lett, 2003, 352: 231.

[2] 烏查日拉圖,喜杰.蒙藥珍寶丸對大鼠坐骨神經擠壓損傷的修復作用研究[J].中國民族醫藥雜志,2011,4(4):48-50.

[3] BAIN J R, MACKINNON S E, HUNTER D A. Functional evaluation of complete sciatic, peroneal and posterior tibial nerve lesions in the rat[J]. Plast Reconstrsurg, 1989, 83(1): 129.

MN-DE LA GARZA.Celecoxib accelerates functional recovery after sciatic nerve crush in the rat[J].Journal of Brachial Plexus and Peripheral Nerve Injury ,2008,3:25.

[5] 張立新,佟曉杰,賈樺,等.超短波對大鼠周圍神經缺損修復術后神經再生的影響[J].中國康復醫學雜志,2009,24(8):695-698.

[6] TOM V J,SANDROW-FEINBERG H R,MILLER K,et al.Combining peripheral nerve grafts and chondroitinase promotes functional axonal regeneration in the chronically injured spinal cord[J].J Neurosis,2009,29(47):14881-14890.