中藥組方對狼瘡性腎炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的影響

中藥組方對狼瘡性腎炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的影響

夏嘉1，江麗紅2，蘇曉1*，姚重華1，夏菁1，張曉峰1，楊旭鳴1，陳薇薇1，唐華燕1，徐俊1

(1.上海中醫藥大學附屬市中醫醫院風濕病科，上海 200071；2.上海市嘉定區中醫醫院內科，上海 201800)

摘要：目的觀察自擬養陰清熱、活血利水中藥組、環磷酰胺組、中藥組方聯合環磷酰胺對狼瘡性腎炎患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1表達的影響。方法收集狼瘡性腎炎病例共95例，隨機分為中醫組、西醫組和中西醫結合組，西醫組31例，中醫組31例，中西醫結合組33例。中醫組服中藥組方每日1劑，分2次口服；西醫組靜滴環磷酰胺1.0 g/月；中西醫結合組在中藥組方的基礎上靜滴環磷酰胺0.6 g/月。分別觀察3組治療前和治療6月后外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的表達。結果治療前后中醫組、西醫組IFN-γ、IL-4、TGF-β1的組內比較(P<0.05)，中西醫組IFN-γ、IL-4、TGF-β1的組內比較(P<0.01)。治療后IL-4 3個組的組間比較結果示中西醫組在降低IL-4的水平方面分別優于中醫組和西醫組(P<0.05)。結論養陰清熱、活血利水中藥組方可能是通過改善狼瘡性腎炎患者血清中干擾素-γ、IL-4及TGF-β1的表達,從而發揮治療效果。

關鍵詞：狼瘡性腎炎；中藥組方；細胞因子

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.04.016

中圖分類號：R593.24文獻標志碼： A

文章編號：1003-5699(2015)04-0367-03

基金項目:上海市教育委員會科研項目(07cz045)。

作者簡介:夏嘉(1981-)，女，碩士，主治醫師，主要從事中醫、中西醫結合治療風濕免疫病研究。

收稿日期:(責任編輯：王丹2014-09-15)

*通信作者:蘇曉，電話-13817608102，電子信箱-tcmfengshi@163.com

Effect of herbal formula for serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis

XIA Jia2,JIANG Lihong2,SU Xiao1*,YAO Chonghua1,XIA Qing1,ZHANG Xiaofeng1,

YANG Xuming1,CHEN Weiwei1,TANG Huayan1,XU Jun1

(1.Affiliated Chinese Medicine Hospital to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine,Shanghai 200071,China;

2.Jiang Lihong for Traditional Chinese Medicine Hospital Medical Shanghai Jiading District,Shanghai 201800,China)

Abstract:ObjectiveTo observe serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in lupus nephritis patients treated with decoction of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis,cyclophosphamide or cyclophosp hamide plus the above decoction in accordance with syndrome differentiation.MethodsWe collected 95 lupus nephritis cases from rheumatology department and outpatient of shanghai municipal TCM hospital affliated to shanghai TCM University.They were divided into chinese medicine group (31 cases),western medicine group (31 cases) and integrative medicine group (33 cases) by random assignment.Chinese medicine group:traditionnal chinese medicine decoction taken twice a day;Western medicine group:intravenous cyclophosphamide 1.0 g/month;Integrative medicine group:chinese medicine decoction plus intravenous cyclophosphamide 0.6 g/month.All the patients were treated 6 months respectively.Serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 before and after treatment in the three groups was observed.ResultsBoth Chinese and western medicine groups improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment(P<0.05).Integrated medicine group improved IFN-γ,IL-4,TGF-β1 after treatment more(P<0.01).The analysis of three groups after treatment showed the integrated medicine group decreased IL-4 better than the other two (P<0.05).ConclusionHerbal formula with the function of nourishing yin and clearing away heat,activating blood and promoting diuresis may improve the expression of serum IFN-γ,IL-4,TGF-β1 in LN patients to exert therapeutic effect.

Keywords:lupus nephritis;herbal formula;cytokine

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種多系統損害的、病程反復的自身免疫性疾病，可嚴重危害患者健康，影響生活質量。狼瘡性腎炎(Lupus nephritis,LN)是其主要的預后不良因素，為我國常見的繼發性腎臟病之一。LN的病因及發病機制尚不清楚，多種細胞因子參與其中[1]。本研究擬檢測中藥組、西藥組及中西醫結合組治療前后的LN患者血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，探討LN的免疫機制，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料全部觀察病例均來自上海市中醫醫院風濕科門診及病房的病人，共95例。西醫組31例，中醫組31例，中西醫結合組33例,3組性別、年齡、病程經檢驗無統計學意義(P>0.05)。

1.2診斷標準1)納入標準：①18～65歲患者；②符合《美國風濕病協會1997年系統性紅斑狼瘡分類標準》四項或以上，并具備尿常規蛋白尿++以上或24 h尿蛋白1 g以上的患者;③經SLEDAI評分：記分統計≥5分；④中醫辨證為陰虛內熱、水瘀互結之證(參照2002年《中藥新藥臨床研究指導原則》中的相關標準)；⑤自愿作為受試對象,簽署知情同意書。2)排除標準：①不符合上述入選標準；②年齡在18歲以下或65歲以上者；③有嚴重的心腦血管疾病或并發癥或腫瘤、艾滋病、精神病患者；④出現狼瘡性腦病、腎功能不全衰竭期或尿毒癥期等嚴重內臟損害的SLE患者。

1.3治療方法3組激素的基線用量：根據SLEDAI積分，中重度患者為1 mg/(kg·d)，輕度活動≤0.5 mg/(kg·d)。1)西醫組：環磷酰胺1.0 g/月，靜滴。2)中醫組：生地黃、丹參、接骨木、貓爪草、積雪草，每日1劑，分2次口服。3)中西醫結合組：中藥組方+環磷酰胺0.6 g/月，靜滴。

1.4標本的檢測

1.4.1標本收集用真空采血管收集患者清晨空腹靜脈血5 mL，待血液凝固后，800轉離心3 min，分離血清約1 mL,置于-40 ℃低溫冰箱中保存待用。

1.4.2細胞因子測定采用流式熒光免疫微球術(flow fluorenscence immunmicrobeads assay,FFIA)檢測人外周血清 IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平，所用試劑盒購自奧地利的Bender Medsystems公司。操作步驟如下：1)抗原吸附及檢測：樣本、標準品(根據說明書配置、用于做標準基線)、空白品各12.5 μL，分別加入包被了IFN-γ、IL-4、TGF-β1的微球共12.5 μL和生物素化抗體25 μL，每管共計50 μL，混勻，溫室避光孵育2 h。2)加入Assay Buffer 1 mL洗滌2次，進行200 g 5 min離心(第一次加Assay Buffer 1 mL,移去上清液975 μL；第2次加Assay Buffer 1 mL，移去上清液1 mL)。3)標記熒光。每管分別加入25 μL Streptavidin-PE工作液(88 μL PE液+2 662 μL Assay Buffer)，混勻，溫室避光孵育1 h。4)加入Assay Buffer 1 mL洗滌2次，200 g 5 min離心，每次移去上清液1 mL。5)每管加Assay Buffer 500 μL，用流式細胞儀檢測細胞因子的熒光值(set微球用于調微球位置和基準電壓)。

2結果

3組治療前的IFN-γ、IL-4、TGF-β1的水平分別經方差分析P>0.05，組間差異無統計學意義,具有可比性。IFN-γ、TGF-β1治療后組內比較，中醫組和西醫組治療前后經t檢驗P<0.05,提示中醫組和西醫組能改善IFN-γ、TGF-β1；中西醫組治療前后IFN-γ、TGF-β1比較，t檢驗P<0.01，差異有顯著性，提示中西醫組改善IFN-γ、TGF-β1的水平較明顯。但3組治療后組間比較經方差分析P>0.05，差異無統計學意義。IL-4治療前后的組內比較，中醫組和西醫組治療前后組內經t檢驗P<0.05,提示中醫組和西醫組均能降低IL-4；中西醫組治療前后組內比較，t檢驗P<0.01,差異有顯著性，提示中西醫組能明顯降低IL-4的水平。3組治療后組間比較經方差分析P<0.05,差異有統計學意義；LSD-t檢驗兩兩比較結果顯示中西醫組分別和中醫組、西醫組比較P<0.05，差異有統計學意義，提示中西醫組在降低IL-4的水平方面分別優于中醫組和西醫組(見表1)。

表1　3組外周血清IFN-γ、IL-4、TGF-β1(pg/mL)的比較

注：與治療前比較，△P<0.05，△△P<0.01；與中醫組治療后比較，*P<0.05；與西醫組治療后比較，#P<0.05

3討論

流式熒光免疫微球分析術是建立在免疫熒光、免疫微球和流式細胞分析等實驗技術基礎上的一種血清學檢測方法。人們將不同單克隆抗體偶聯在微球表面用于自身抗原、腫瘤標志物以及病原微生物的檢測[2]，也可以將抗原結合在微球表面用于血清梅毒螺旋體抗體[3]和紅細胞血型抗體[4]以及血小板特異性抗體[5]的檢測。有報道表明[6-7]其測定的重復性、線性范圍和靈敏度均優于酶聯免疫吸附試驗，而且所需的樣本量少、特異性高。LN是SLE死亡的常見病因,中晚期的病理改變主要是彌漫性細胞增生和纖維化[8]。有資料顯示[9-10]，Th1細胞因子尤其是IFN-γ參與了LN的產生及病理過程。IL-4則屬于Th2細胞因子之一，它在BXSB狼瘡小鼠體內過度表達而加重病情[11]。因此，IFN-γ、IL-4等細胞因子不同程度的升高促進了炎癥的發生及組織損傷從而導致了LN的發病[12]。近年來的研究[13-14]發現TGF-β1與LN也密切相關。TGF-β1可直接或間接地促使Ⅰ型、Ⅳ型膠原等細胞外基質的合成與積聚，誘導炎癥細胞的浸潤、成纖維細胞的積聚和血管生成[15]。本研究提示養陰清熱、活血利水中藥組方可能是通過改善LN患者血清中上述因子的表達，從而發揮治療效果。

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