濱蒿總黃酮抗炎、鎮咳、解熱作用的實驗研究

濱蒿總黃酮抗炎、鎮咳、解熱作用的實驗研究

史銀基1,2， 司麗君2, 劉燕2， 楊巧麗2， 姚華2， 史玉柱2， 王雪2， 顧政一2， 黃華2

(1新疆醫科大學研究生院， 烏魯木齊830011；2新疆維吾爾自治區藥物研究所， 烏魯木齊830004)

摘要：目的研究濱蒿總黃酮的抗炎、鎮咳、解熱作用。方法通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型和冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管炎性滲出模型，觀察濱蒿總黃酮的抗炎作用；采用氨水引咳法和枸櫞酸引咳法，觀察其鎮咳作用；通過干酵母誘導的大鼠發熱模型，考察其解熱作用。結果濱蒿總黃酮對小鼠耳廓炎性腫脹有明顯的抑制作用，0.2、0.4 g/kg濱蒿總黃酮的腫脹抑制率均為29.4%；對冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管炎性滲出也有一定的抑制作用，0.4 g/kg濱蒿總黃酮的抑制率為29.9%；濱蒿總黃酮對氨水致小鼠咳嗽反應有一定的鎮咳作用，0.2、0.4 g/kg濱蒿總黃酮對咳嗽反應的抑制率為22.2%、35.6%；濱蒿總黃酮對枸櫞酸引起的豚鼠咳嗽反應有較強的鎮咳作用，0.1、0.2、0.4 g/kg濱蒿總黃酮對咳嗽反應的抑制率分別為32.1%、41.3%、49.0%；濱蒿總黃酮還可緩解酵母引起的大鼠發熱反應，0.2、0.4 g/kg濱蒿總黃酮在大鼠致熱后5.5～7 h(即給藥后2.5～4 h)時間段有明顯的降溫作用。結論濱蒿總黃酮具有良好的抗炎、鎮咳及解熱作用。

關鍵詞：濱蒿總黃酮； 抗炎； 鎮咳； 解熱

中圖分類號：R965.1文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.05.013

[收稿日期:2015-03-10]

基金項目：烏魯木齊市科技攻關計劃(G121120002)

作者簡介：楊麗萍(1989-)，女，碩士，研究方向：新藥研發。

Effects of total flavonoids from Artemisia Scoparia on anti-inflammatory,

relieving cough and antipyretic

SHI Yinji1,2， SI Lijun2， GU Zhengyi2， LIU Yan2， YANG Qiaoli2， YAO Hua2，

WANG Xue2， SHI Yuzhu2， HUANG Hua2

(1XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China;2XinjiangInstituteofMateriaMedic,

Urumqi830004,China)

Abstract:ObjectiveTo observe the effects of total flavonoids from Artemisia Scoparia on anti-inflammatory, relieving cough and antipyretic. MethodsThrough the tests of ear conch induced by xylene and glacial acetic acid-induced mouse peritoneal capillary inflammatory exudate model, we observed the anti-inflammatory effects of total flavonoids from Artemisia Scoparia. Relieving cough caused by the irritation of ammonia water in mice and cough model induced by citric acid in guinea pigs were used to observe the antitussive action. The models of dry yeast-induced fevered rats was used to study the antipyretic effects. ResultsTotal flavonoids from Artemisia Scoparia could inhibit the degree of ear conch induced by xylene, dose of 0.2 g/kg, 0.4 g/kg could inhibit the mice auricle inflammatory swelling inhibition rate was 29.37%; Inhibit the degree of glacial acetic acid-induced mouse peritoneal capillary inflammatory exudate model also, dose of 0.4 g/kg inflammatory swelling inhibition rate was 29.9%; The mice cough response inhibition rate was 22.2% and 35.6%，with dose of 0.2 g/kg and 0.4 g/kg of total flavonoids from Artemisia Scoparia; Dose of 0.1 g/kg，0.2 g/kg，0.4 g/kg of total flavonoids from Artemisia Scoparia to guinea pig cough caused by citric acid inhibition rates were 32.1%, 41.3% and 49.0% respectively; Total flavonoids from Artemisia Scoparia have obvious antipyretic effect, dose of 0.2 g/kg，0.4g/kg of total flavonoids from Artemisia Scoparia had best cooling effect that rats fever model induced after 5.5h to 7h (I.e., 2.5 to 4 hours after administration). ConclusionThe total flavonoids from Artemisia Scoparia had better effect on anti-inflammatory, relieving cough and antipyretic.

Key words: the total flavonoids from Artemisia scoparia; anti-inflammatory; relieving cough; antipyretic

濱蒿(Artemisia scoparia Waldst.et kit)為菊科蒿屬植物，維吾爾名“西瓦克”，是傳統的維吾爾藥材，也是中藥茵陳的植物來源之一，在新疆分布極為廣泛。濱蒿具有清濕熱、利疸退黃、清熱解毒、化痰開竅、消敗津、除積物等功效[1]，民間常用濱蒿水煎劑預防感冒。為進一步研究和探討濱蒿總黃酮提取物在防治感冒方面的應用價值，本課題組前期參照相關文獻的優化工藝獲得濱蒿總黃酮的最佳提取分離條件，并通過中試設備生產取得總黃酮含量為54.2%的濱蒿總黃酮提取物。本研究在此基礎上，對濱蒿總黃酮的抗炎、鎮咳和解熱作用進行實驗研究，現報道如下。

1材料與方法

1.1藥品與試劑濱蒿總黃酮，總黃酮含量為54.2%(新疆藥物研究所植化室制備，批號20141028)，復方一枝蒿顆粒(新疆銀朵蘭維藥股份有限公司，批號140936)，羧甲基纖維素鈉(天津永晟精細化工有限公司，批號20100623)，二甲苯(西安化學試劑廠，許可證號：XK13-201-0257-154(2)，批號：20100104)，冰醋酸(天津市福晨化學試劑廠，許可證號：XK13-011-00017，批號：20130313)，檸檬酸(天津永晟精細化工有限公司，批號：20120706)；氨水(天津永晟精細化工有限公司，批號20110708)，依文思藍(上海化學試劑采購供應站分裝廠，批號：20120917)，注射用生理鹽水(NS)(新疆制藥廠，批號：140715)，20%干酵母混懸液。

1.2儀器600N型電子天平(上海菁海儀器有限公司)，BS200S型電子天平(北京賽多利斯天平有限責任公司)，YLS-8A型多功能誘咳引喘儀(山東省醫學科學院設備站)，403A型壓縮空氣式霧化器(江蘇魚躍醫療設備股份有限公司)。

1.3實驗動物健康清潔級昆明種小鼠150只，雌雄各半，體質量18～23 g，50只用于二甲苯致炎實驗，50只用于腹腔毛細血管通透性實驗，50只用于濃氨水引咳實驗；Wistar大鼠40只，體質量180～200 g；豚鼠40只，體質量250～300 g；雌雄兼用，均由新疆維吾爾自治區實驗動物研究中心提供，動物許可證號：SCXK(新)2012-0001。

1.4抗炎作用

1.4.1二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗[2-4]將健康昆明種小鼠50只隨機分為模型組、復方一枝蒿顆粒組(3.9 g/kg)及濱蒿總黃酮低、中、高劑量組(0.1、0.2、0.4 g/kg)，每組10只。各給藥組均按設定劑量灌胃給藥，模型組灌胃0.5%的羧甲基纖維素鈉。各組小鼠于給藥后1 h右耳廓兩面涂二甲苯20 μL，造成小鼠耳廓腫脹模型，以左耳作對照。30 min后脫頸椎處死小鼠，沿耳廓基線剪下左右耳，用直徑6 mm打孔器分別在左右耳對稱部位打下圓形耳片，精密稱重，計算腫脹度(左右耳片重量之差)和腫脹抑制率：腫脹抑制率=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。

1.4.2小鼠腹腔毛細血管通透性實驗[5]將昆明種小鼠50只(雌雄各半)隨機分為模型組、復方一枝蒿顆粒組(3.9 g/kg)及濱蒿總黃酮低、中、高劑量組(0.1、0.2、0.4 g/kg)，每組10只。各組小鼠于給藥后1 h，經尾靜脈注入0.5%的伊文思藍生理鹽水溶液10 mL/kg。隨即每只小鼠腹腔注射0.8%的冰醋酸溶液0.2 mL/只。20 min后脫頸椎處死小鼠，剪開腹部皮膚，用6 mL生理鹽水分3次洗滌腹腔，吸管吸出沖洗液，3 000 r/min離心10 min，取上清液，用紫外分光光度計于590 nm處測定吸光度(A)。計算藥物對小鼠腹腔毛細血管通透性增高的抑制率：抑制率=(模型組A均值-給藥組A均值)/模型組A均值×100%。

1.5鎮咳作用

1.5.1小鼠濃氨水引咳實驗[6-7]取健康昆明種小鼠50只，雌雄各半，體質量18～23 g，根據體質量、性別隨機分為5組(每組10只)，分別為模型組、復方一枝蒿顆粒(3.9 g/kg)及濱蒿總黃酮低、中、高劑量組(0.1、0.2 、0.4 g/kg)，以0.5%的羧甲基纖維素鈉配成混懸液灌胃給藥，給藥組均按設定劑量灌胃給藥，模型組給予等體積0.5%羧甲基纖維素鈉，每天1次，連續3 d。于末次給藥后1 h，將小鼠放入加有濃氨水的誘咳引喘儀內，噴霧15 s，觀察記錄小鼠的咳嗽潛伏期(從開始噴霧到產生咳嗽的時間)和2 min內咳嗽次數(典型咳嗽動作表現為腹肌收縮或縮胸，同時張大嘴，有時有咳嗽聲)。

1.5.2枸櫞酸誘發豚鼠咳嗽實驗[8-9]取豚鼠，雌雄兼用，放入誘咳引喘儀內(每次1只)，用霧化噴霧器噴入17.5%枸櫞酸溶液，篩選出5 min內咳嗽次數為10～50次的豚鼠，取合格豚鼠35只，隨機分為模型組、復方一枝蒿顆粒(2.39 g/kg)及濱蒿總黃酮低、中、高劑量組(0.06、0.12、0.24 g/kg),每組7只。各給藥組均按設定劑量給藥，模型組給予0.5%羧甲基纖維素鈉，每天1次，連續3 d。于末次給藥后1 h，將豚鼠放入誘咳引喘儀內，用霧化噴霧器噴入17.5%枸櫞酸溶液，觀察記錄豚鼠的咳嗽潛伏期(即從噴霧開始到出現咳嗽的時間)及5 min內咳嗽次數，計算抑制率：抑制率=(模型組咳嗽次數-給藥組咳嗽次數)/模型組咳嗽次數×100 %。

1.6干酵母致大鼠發熱實驗[10-11]取Wistar大鼠40只，雌雄各半，隨機分5組，分別為模型組、復方一枝蒿顆粒組(2.73 g/kg)及濱蒿總黃酮低、中、高劑量組(0.07、0.14、0.28 g/kg)，每組8只。各組在給藥前測定基礎體溫2次，后立即皮下注射20%干酵母混懸液10 mL造模，3 h后模型組灌胃給予5%羧甲基纖維素鈉(40 mL/kg)，其余各組均按設定劑量灌胃給藥，各組分別于造模后4、5.5、7、8.5 h測定體溫。

1.7統計學處理采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行統計學分析，對實驗結果采用方差分析，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1抗炎作用

2.1.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響與模型組相比，濱蒿總黃酮低、中、高劑量組小鼠耳腫脹程度明顯減輕(P<0.05或P<0.01)，濱蒿總黃酮中、高劑量組的腫脹抑制率均為29.4%，見表1。

表1　濱蒿總黃酮對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響( ±s)

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.1.2對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響濱蒿總黃酮各劑量組小鼠腹腔液吸光度A值均低于模型組，濱蒿總黃酮高劑量組與模型組相比，吸光度值明顯降低(P<0.01)，且濱蒿總黃酮高劑量組抑制率為29.9%，見表2。

表2　濱蒿總黃酮對小鼠腹腔毛細通透性的影響( ±s)

注：與模型組比較，**P<0.01。

2.2鎮咳作用

2.2.1對氨水所致小鼠咳嗽的影響與模型組比較，濱蒿總黃酮中、高劑量可明顯減少氨水引起的小鼠咳嗽次數(P<0.05，P<0.01)，見表3。

表3　濱蒿總黃酮對氨水致小鼠咳嗽反應的影響( ±s)

注：與模型組比較，**P<0.01，*P<0.05。

2.2.2對枸櫞酸誘發豚鼠咳嗽的影響與模型組比較，濱蒿總黃酮低、中、高劑量均可明顯減少枸櫞酸引起的小鼠咳嗽次數(P<0.05)，抑制率分別為32.1%、41.3%、49.0%，見表4。

表4　濱蒿總黃酮對枸櫞酸致豚鼠咳嗽反應影響( ±s, n=7)

注：與模型組比較，*P<0.05。

2.3對干酵母致大鼠發熱反應的影響濱蒿總黃酮低、中、高劑量和一枝蒿對干酵母引起的大鼠發熱反應均有一定的抑制作用，在給藥后2.5～4 h(造模5.5～7 h)其降溫效果較好，見表5。

3討論

流行性感冒(簡稱流感)是由流感病毒引起的急性病毒性呼吸道傳染病，這種病毒具有發病率高、傳染性強、傳播速度快、流行性廣、變異性大等特點[12]，臨床常表現為高熱、咳嗽、畏寒、扁桃體炎癥、疲弱乏力、全身酸痛等全身樣中毒癥狀。研究發現中藥在防治流感方面毒副作用小，具有獨特的優勢和廣闊的發展前景。隨著人們對中藥抗病毒方面的研究越來越多，發現有不少中藥材和中藥復方制劑具有良好的抗病毒作用，尤其是中藥黃酮類物質，具有抗炎、調節免疫、抗病毒等多方面的作用，是多數中藥發揮抗病毒作用的活性部位。常用的中藥抗病毒單味藥材有板藍根、大青葉、金銀花等。

表5　濱蒿總黃酮對干酵母致大鼠發熱反應的影響( ±s, n=8)

注：與模型組比較，*P<0.05。

濱蒿中含有多種化學成分，主要有黃酮、色原酮、香豆素、揮發油、有機酸、萜類等。早在50年代，就有學者根據濱蒿清熱等功效的記載提出對其進行抗流感病毒研究，并初步證明其粗體物在雞胚外對原甲型流感病毒(PR8株)具有明顯的抗病毒作用，最小抗病毒濃度為1∶490；另外亞洲甲型(張57-4)流感病毒、乙型(Lee)和丙型(1233)流感病毒以及仙臺病毒都有一定的抑制作用。另有文獻[13]報道，濱蒿水煎劑可用于預防感冒，此法于1970和1972年流感流行時給人群服用，收到了良好的預防效果，并治療流感患者18例，療效滿意。以濱蒿作主藥的中醫“茵防方”，經水提后試驗證明在雞胚外有抗甲型流感病毒(PR8)的作用，最小抗病毒濃度為1∶80，同時對溶血性鏈球菌、金葡菌、肺炎球菌等引起流感并發癥的常見致病菌均有不同程度的抑制作用，該復方臨床用于流感及乙肝等病毒性疾病的治療。

基于維吾爾醫和中醫臨床用藥經驗及有關文獻報道，課題組前期對濱蒿總黃酮的粗提物進行了初步的藥效學研究，結果表明其在體外對甲型和乙型流感病毒均有直接的抑制作用，并可調節機體的免疫功能，進一步說明濱蒿中的黃酮類成分可能是其抗流感的主要有效成分。隨著對濱蒿中黃酮類成分進行系統的分離純化研究，并得到黃酮含量達50%以上的濱蒿總黃酮提取物，有必要對濱蒿總黃酮的抗流感作用進行全面深入的藥效學研究，以探討濱蒿總黃酮提取物在防治流感方面的應用前景。本研究通過對經典的炎癥、咳嗽和解熱模型的復制，結果表明濱蒿總黃酮不僅具有抑制炎癥的作用，還可有效緩解感染引起的發熱、咳嗽等癥狀。此結果為濱蒿這一傳統維吾爾藥材在防治流感方面的應用提供了充分的實驗依據，同時也為進一步將濱蒿總黃酮作為純天然抗流感病毒藥物的研究與開發奠定了基礎。

參考文獻:

[1]謝韜,梁敬鈺,劉凈,等.濱蒿化學成分的研究[J].中國藥科大學學報,2004,35(5):401-403.

[2]楊巧芳,孟慶剛.炎癥動物模型探要[J].中華中醫藥學刊,2008,26(3):516-517.

[3]肖威,斯拉甫·艾白,李治建.新疆一枝蒿抗炎作用研究[J].時珍國醫國藥,2008,19(12):2836-2838.

[4]包翠屏,陳百泉,許啟泰.板藍根含片的解熱鎮痛及抗炎作用研究[J].河南大學學報(醫學科學版),2003,22(03):25-27.

[5]劉循,劉燕,姚華,等.復方一枝蒿顆粒對小鼠抗炎和免疫功能的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(13):185-189.

[6]Azikiwe CCA,Unekwe PC,Amazu LU, et al. Antitussive activity of Triclisia dictyophylla of the family Menispermecae[J]. Asian Pacific J Trop Med,2009,15(4):33-40.

[7]嚴浩成,劉劍勇.克咳寧顆粒鎮咳、祛痰作用的實驗研究[J].湖南中醫藥大學學報,2006,26(6):31-33.

[8]劉軍,石璐,黃雷雷,等.枸櫞酸引咳豚鼠動物模型的方法學研究[J].四川醫學,2009,30(4):462-464.

[9]張丹參.誘發咳嗽動物模型方法及評價[J].神經藥理學報,2011,1(02):35-41.

[10]劉巖崢,李雪萍,張永東,等.甘肅金銀花(盤葉忍冬)對干酵母致大鼠發熱作用研究[J].甘肅醫藥,2012,31(8):617-618.

[11]劉學偉,曹敏,劉樹民.龍膽堿的解熱作用及機制研究[J].中國實驗方劑學雜志,2011,17(24):128-131.

[12]王蓉,楊靜,黃文芳.小鼠口腔局部使用干擾素的抗流感病毒實驗研究[J].川北醫學院學報,2004,19(2):14-16.

[13]張振建，程弓清，潘望平，等，濱蒿口服液的急性毒性及藥效學實驗[J].中國醫院藥學雜志，2008,27(13):1128-1130.

(本文編輯施洋)

通信作者：高曉黎，女，教授，博士生導師，研究方向：新藥研發，E-mail:xli_g@sina.com。