小茴香揮發性成分GC指紋圖譜研究

小茴香揮發性成分GC指紋圖譜研究

楊麗萍1， 云琦2， 高曉黎1

(1新疆醫科大學藥學院， 烏魯木齊830011；2新疆特豐藥業股份有限公司， 烏魯木齊830054)

摘要：目的建立小茴香揮發性成分氣相色譜指紋圖譜分析方法，對揮發油成分進行分析，為控制小茴香揮發油質量提供依據。方法采用水蒸氣蒸餾法提取小茴香揮發油，對10個產地小茴香進行氣相色譜分析，用氣相色譜建立揮發油指紋圖譜分析法，并用GC-MS對指紋峰進行鑒別。結果指紋圖譜中共有10個共有峰，其中8個成分得到鑒定，所建立指紋圖譜分析方法學各項目符合規定，各批樣品相似度>0.95。結論所建立指紋圖譜方法分析簡便易行，為更好控制小茴香的質量提供了新的方法。

關鍵詞：小茴香揮發油； 指紋圖譜； GC

中圖分類號：R914文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2015.05.014

[收稿日期：2014-12-01]

基金項目：新疆維吾爾自治區自然科學基金(2014211C036)

作者簡介：肖開提·阿不都哈德爾(1964-), 男(維吾爾族)，本科，副主任醫師，研究方向：消化道腫瘤研究。

基金項目：天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室(北京大學)開放研究課題(20130215)

作者簡介：買爾旦·馬合木提(1960-) ,男(維吾爾族),教授,碩士生導師,研究方向:中藥民族藥，E-mail:maierdan60@sina.com。

On GC fingerprint analysis of fennel volatile constituents

YANG Liping1， YUN Qi2， GAO Xiaoli1

(1CoLLegeofPharmcy,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011China;2XinjiangTefeng

PharmaceuticalCo．Ltd，Urumqi830054,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a GC fingerprint analysis method for the quality control of fennel. MethodsFennel oil was extracted by steam distillation method. The fingerprint analysis of volatile oil was conducted by GC and the fingerprint peaks were identified with GC-MS. ResultsThe batch of fennel were analyzed by GC, and ten common peaks were shown in the fingerprints, nine of which were identified. The established fingerprint analysis method was validated .The similarities of samples were over 0.95. ConclusionThe fingerprint analysis method is simple, practical and suitable for the quality control of fennel.

Key words： fennel oil； fingerprint analysis； GC

小茴香為傘形科植物茴香(Foneiculum vulagre Mill.)的干燥成熟果實，為維吾爾醫習用藥材。其具有利尿、痛經、健胃、明目的功效[1]，主治寒性或黏液質性疾病，如癱瘓、面癱、寒性頭痛、眩暈、腹脹、耳痛、腹痛、閉尿、閉經胃虛乳少等癥[2]。

目前，小茴香主要以反式茴香腦的含量來控制質量。有研究采用指紋圖譜方法，但多未采用新疆藥材，且未對指紋成分進行鑒定，具有一定的局限性[3]。新疆獨特的氣候使不同地區小茴香成分可能有較大的差異，本實驗收集新疆代表性小茴香進行指紋圖譜研究，并采用GC-MS進行成分指認，對系統評價和控制新疆小茴香藥材質量有著重要的意義。

1儀器與材料

1.1儀器島津GC2010-plus(日本島津)，7890A-5975C 氣質聯用儀(美國安捷倫科技公司)，智能恒溫電熱套(鄭州長城科工貿有限公司)，電子天平(北京賽多利斯儀器有限公司)，KQ-500DE 數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2材料10批小茴香產地及編號分別為：湖北(1號)、哈密(2號)、博樂(3號)、阿克蘇(4號)、伊犁(5號)、和田(6號)、石河子(7號)、阿勒泰(8號)、喀什(9號)、克拉瑪依(10號)。各批藥材經新疆醫科大學藥學院帕麗達鑒別為傘形科植物小茴香(Foneiculum vulagre Mill.)干燥成熟果實；對照品反式茴香腦(純度>98.0%)、葑酮(純度>98.0%)、愛草腦(純度>97.0%)、檸檬烯(純度>95.0%)均購自梯希愛上海化成工業發展有限公司，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1樣品測試條件

2.1.1指紋圖譜測定GC條件色譜柱：rtx-5(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，升溫程序：初始溫度為80℃，保留2 min，以5℃/min的速率升至120℃保留5 min，然后以1℃/min的速率升至130℃，保留2 min。進樣量2 μL，分流比30∶1，汽化室溫度：80℃，FID溫度：275℃。

2.1.2成分指認GC-MS分析條件(1) GC條件: 色譜柱：HP-5MS毛細管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)；載氣：高純氮氣；載氣流量：1 mL/min；分流比：30∶1；進樣量：0.5 μL；進樣口溫度：250℃；檢測器溫度：300℃；升溫程序：起始溫度為50℃，然后以10℃/min的速率升至300℃，保持20 min。(2) MS條件: GC-MS接口溫度：300℃；離子源溫度：230℃；四級桿溫度：150℃；離子源：EI；電離電壓：70 eV；質量掃描范圍(m/z)：33～600 amu。

2.2對照品溶液的制備精密量取對照品適量，用二氯甲烷制成濃度為3 μL/mL的溶液，即得。

2.3供試品溶液的制備取適量小茴香，加蒸餾水用水蒸氣蒸餾提取法提取揮發油，經無水硫酸鈉干燥得淡黃色揮發油。精密量取小茴香揮發油適量，用二氯甲烷制成3 μL/mL的溶液，即得。

2.4指紋圖譜測定方法學實驗

2.4.1精密度試驗取和田供試品溶液，連續進樣6次，計算各色譜圖共有峰相對保留時間，相對峰面積RSD均<3.0%，表明精密度良好。

2.4.2重復性試驗取和田樣品，依法制備6份樣品，分別進行測定。計算各色譜圖共有峰相對保留時間，相對峰面積RSD均<3.0%，表明重復性良好。

2.4.3供試品溶液穩定性試驗取和田供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12 h進樣，計算各色譜圖共有峰相對保留時間，相對峰面積RSD均<3.0%，表明穩定性良好。

2.5指紋圖譜的建立

2.5.1指紋圖譜的測定各樣品依法測定，指紋圖譜共標定10個共有峰(圖1)。10批小茴香樣品相似度>0.95，見表1。

圖1　10批小茴香GC指紋圖譜

編號12345678910對照11.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0021.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0031.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0041.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0050.980.980.980.981.000.980.980.980.980.980.9961.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0071.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0081.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.0091.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.00101.001.001.001.000.981.001.001.001.001.001.00對照1.001.001.001.000.991.001.001.001.001.001.00

2.5.2相對保留時間與相對峰面積考察所建立的指紋圖譜10個共有峰占總峰面積95%，非共有峰占總峰面積<5%。其中與總峰面積的比值>20%的共有峰為10號峰,其他9個峰的峰面積均<5%。以7號峰為參照峰，計算各主要共有峰相對保留時間與相對峰面積，結果見表2~4。

2.6指紋成分GC-MS鑒定取6號供試品注入GC-MS分析，通過NIST質譜庫檢索，8個化學成分得到了鑒定，見表5。

表2　指紋圖譜-相對保留時間

表3　指紋圖譜-相對峰面積

表4　各批次樣品非共有峰面積比值及出峰數

表5　小茴香揮發油GC-MS鑒定結果

3討論

本實驗測定結果表明，不同產地小茴香成分差異較大，如博樂小茴香指紋峰達43個，而阿克蘇小茴香指紋峰僅為15個。湖北小茴香與新疆小茴香主要成分相同；活性成分反式茴香腦含量高(>50%)，未鑒別出松烯、香葉烯、α-非蘭烯、反式-β-羅勒烯、茴香醛等成分[4]，這可能與茴香生長的生態環境有關。

小茴香揮發油GC-MS共鑒定8個成分，分別為(1S)-(-)-α-蒎烯、鄰傘花烴、α-蒎烯、(1S)-(+)-3-蒈烯、D-檸檬烯、葑酮、愛草腦、反式茴香腦。未檢出松烯、香葉烯、α-非蘭烯等成分。與高莉等[4-7]報道的結果一致。建立的指紋圖譜中指紋峰具有多種活性作用，如反式茴香腦和檸檬烯具有抗菌、提高免疫和抗腫瘤等作用。因此，所建立指紋圖譜能夠更好地控制小茴香的質量，為小茴香藥材的質量控制提供新的方法。

參考文獻：

[1]顧永壽,顧永福.維吾爾醫常用藥材[M].烏魯木齊:新疆科技衛生出版社,1992 :12-13.

[2]中國醫學百科全書維吾爾醫學分冊[M].上海:上海科學技術出版社,2005:581-582.

[3]金宏,趙文英,公衍玲.小茴香揮發油GC指紋圖譜研究[J].西北藥學雜志,2007,22(5): 243-245.

[4]吳枚涵,聶凌云,劉云,等. 氣相色譜-質譜法分析不同產地小茴香藥材揮發油成分[J].藥物分析雜志,2001,21(6):415-418.

[5] 袁斌,王以武.鹽酸文拉法辛殘留溶劑檢測方法的建立[J].川北醫學院學報,2013,28(1) :13-16.

[6]劉密新,汪偉.小茴香揮發油的成分分析[J].中草藥,1997,28(1):14.

[7]高莉,斯拉甫·艾白.小茴香揮發油成分及抑菌作用的研究[J].中國民族醫藥雜志,2007,12(12):67-68.

(本文編輯施洋)

通信作者：張文斌，男(回族)，博士，副主任醫師，研究方向：胃腸外科， E-mail:zwb3216@sina.com。