miR-200在肺癌細胞系中的表達及其對肺癌細胞遷移能力的影響

石麗娟 孫 潔 金鐵峰

(延邊大學病理學教研室 吉林 延吉 133002)

肺癌是臨床上的常見病，其發病率及致死率均高居惡性腫瘤的首位。肺癌患者在發病早期其臨床癥狀較不典型，其病情在得到確診時往往已經進入晚期，其生存率較低。肺癌患者體內的腫瘤發生轉移及復發是導致其預后極差最主要的原因。近年來的研究表明，miRNA-200可調控L1CAM的表達，促使肺癌細胞與血管壁粘附，進而可促使其發生轉移。本實驗旨在研究miRNA-200在人肺癌細胞系中表達的情況，以便為臨床上治療肺癌提供新的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料 肺癌細胞株 H1792、HCC2279、PC9、H1299、CALU-1、H2052、PC7、H2122、H322、SQ-5、A549、EBC-1、H157、 H1650均購自ATCC公司。RPMI 1640培養基、胎牛血清均購自Gibco公司。胰蛋白酶購自Santa Cruz 公司。

1.2 方法 對H1792等肺癌細胞株進行RT-PCR檢測的方法是：將H1792等肺癌細胞株置于含10%胎牛血清、1%雙抗的1640培養基中，在培養條件為37℃、5%CO2的細胞培養箱中進行常規培養。將肺癌細胞用PBS進行清洗，用Triozol進行充分裂解，在其中加入氯仿進行震蕩，加入異丙醇進行靜置，然后進行PCR處理，相關的溫度條件為：變性溫度為95℃、退火溫度為58℃、延伸溫度為72℃。對PCR產物進行凝膠電泳操作，并將其置于凝膠成像儀中分析檢測結果。

1.3 統計學分析 采用 SPSS 17.0 統計軟件對本研究中的數據進行統計，計量資料以均值±標準差（±s）表示，在進行兩組均數間的比較時采用 t 檢驗。

2 結果

2.1 對miR-200在本組肺癌細胞系中表達情況的分析 在 H1792等16種肺癌細胞系中檢測miR-200的相對表達量，如圖1所示。檢測結果表明，H1792、HCC2279、PC9、H1299、CALU-1、H2052、HCC44及 H322等 肺 癌細胞系中miR-200的表達量較高，SQ-5、A549、EBC-1、H157、H358及H1650等肺癌細胞系中miR-200的表達量較低。從這些肺癌細胞系中選擇表達量最高的H1792和表達量最低的H1650兩個肺癌細胞系進行進一步的研究。

2.2 對miR-200在肺癌細胞系中的高表達在促進其遷移方面的作用分析 將miR-200呈高表達的H1792肺癌細胞系和miR-200呈低表達的H1650肺癌細胞系在6孔板上進行培養后統一進行劃痕實驗，在48個小時后進行拍照分析，結果表明，與miR-200呈低表達的H1650肺癌細胞系相比，miR-200呈高表達的H1792肺癌細胞系其遷移的速度較快，差異有統計學意義（p＜0.05）。詳情見圖2。

圖1 對miR-200在本組肺癌細胞系中表達情況的分析

圖2 經劃痕實驗證實，miR-200的高表達可促進肺癌細胞系的遷移(* p＜0.05)

3 討論

肺癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一。早期肺原位癌患者的生存率較高，但其體內的腫瘤細胞一旦發生轉移其預后可顯著變差。找出可參與肺癌轉移相關的分子靶點和信號通路是治療肺癌的關鍵。miR-200在腫瘤發生發展的過程中可起到重要的作用，但其作用機制仍存在一定的爭議。研究發現，miR-200家族（miR-200a/miR-200b/miR-200c/miR-141/miR429）在腫瘤細胞中的表達與上皮間質轉化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的發生密切相關，在EMT的發生和腫瘤的進展中可發揮重要的作用[1]。miR-200可通過與ZEB形成負反饋回路調控EMT及腫瘤細胞的活性[2,3]。P53是miR-200的上游轉錄調節因子，可激活miR-200[4]。

我們的研究表明，在16種肺癌細胞系中miR-200的表達量各不相同。miR-200呈高表達的細胞系其遷移能力明顯較強。可見，miR-200可能在肺癌發生侵襲遷移甚至遠處轉移的過程中起到重要的作用，其具體的作用機制有待于進一步的研究加以證實。

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