用T-SPOT.TB試驗(yàn)診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的效果探析

鄭 宏 袁 瑛 王肇華 明湘虹

（江蘇省南通市第六人民醫(yī)院 江蘇 南通 226011）

我國(guó)是活動(dòng)性肺結(jié)核的高發(fā)國(guó)家之一。相關(guān)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，近年來(lái)，活動(dòng)性肺結(jié)核在我國(guó)的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅患者的身體健康及生命安全。過(guò)去，傳統(tǒng)的結(jié)核診斷技術(shù)如痰結(jié)核菌檢查等均存在一定的局限性。近年來(lái)，隨著臨床診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，T-SPOT.TB試驗(yàn)在診斷活動(dòng)性肺結(jié)核方面的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。為了進(jìn)一步探討用T-SPOT.TB試驗(yàn)診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的臨床效果，我們對(duì)近年來(lái)我院收治的300例疑似活動(dòng)性肺結(jié)核患者的臨床資料進(jìn)行回顧性研究。現(xiàn)介紹如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究的對(duì)象為2011年1月～2016年6月期間我院收治的300例疑似活動(dòng)性肺結(jié)核患者。在這些患者中，排除臨床資料不完整的患者，排除在進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)前3周內(nèi)接受過(guò)抗結(jié)核治療的患者，排除非自愿參與此項(xiàng)研究的患者。其中，男女患者分別有193例和107例，其年齡區(qū)間為22～81歲，平均年齡為（48.69±11.21）歲。

1.2 研究方法 我們對(duì)這300例患者均進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)與綜合診斷（X線片檢查、痰結(jié)核菌檢查等），然后將進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)與綜合診斷的結(jié)果進(jìn)行比較，評(píng)估用T-SPOT.TB試驗(yàn)診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的臨床效果。同時(shí)，我們采用單因素分析法與多因素logistic回歸分析法對(duì)影響T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果的因素進(jìn)行分析和總結(jié)。對(duì)這300例患者進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的具體方法是：①抽取患者清晨空腹的外周靜脈血10ml，在血液標(biāo)本中加入10ml的肝素進(jìn)行抗凝處理。在血液標(biāo)本中加入FICOLL淋巴細(xì)胞分離液后進(jìn)行離心處理，分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCS），然后用細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)PBMCS進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)[1]。②在培養(yǎng)板上的每組條孔中加入50μl的細(xì)胞培養(yǎng)基，將其當(dāng)作空白對(duì)照。在培養(yǎng)板上的每組條孔中加入50μl的植物血凝素，將其當(dāng)作陽(yáng)性對(duì)照。在培養(yǎng)板上的每組條孔中加入50μl的結(jié)核分枝桿菌特異性抗原ESAT-6與50μl的CFP-10，將其當(dāng)作刺激原。最后，在培養(yǎng)板上的每組條孔中加入100μl的PBMCS懸液[2]。③完成上述操作后，將培養(yǎng)板放置于37℃的恒溫孵育箱中進(jìn)行培養(yǎng)，等待16～20h后，將培養(yǎng)板取出，并用PBS緩沖液進(jìn)行4次的沖洗，沖洗結(jié)束后，加入第二抗體（二抗），將二抗用堿性磷酸酶進(jìn)行標(biāo)記，將加入二抗的培養(yǎng)板在2℃～8℃的條件下進(jìn)行孵育，孵育的時(shí)間為1h。④用PBS緩沖液對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行沖洗，在培養(yǎng)板上滴入50μl的顯色液，在室溫條件下靜置7min后再用PBS緩沖液對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行沖洗，待培養(yǎng)板的反應(yīng)終止后，將其放在室溫條件下靜置2h，最后記錄空白對(duì)照孔上的斑點(diǎn)數(shù)。

1.3 判定T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性的標(biāo)準(zhǔn) 符合下述兩項(xiàng)中的一項(xiàng)條件：①培養(yǎng)板空白對(duì)照孔上的斑點(diǎn)數(shù)為6～10個(gè)，同時(shí)，抗原1孔、抗原2孔的斑點(diǎn)數(shù)≥空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)×2。②培養(yǎng)板空白對(duì)照孔上的斑點(diǎn)數(shù)為0～5個(gè)，同時(shí)抗原1孔、抗原2孔的斑點(diǎn)數(shù)≥空白對(duì)照孔的斑點(diǎn)數(shù)+6[3]。即可判定進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果呈陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用SPSS17.0軟件對(duì)本研究中的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用（%）表示，用χ2檢驗(yàn)。同時(shí)采取單因素分析法和多因素logistic回歸分析法對(duì)影響T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果的因素進(jìn)行分析，當(dāng)自變量的單因素分析結(jié)果顯示P＜0.2時(shí)，對(duì)該自變量進(jìn)行多因素分析，進(jìn)行多因素分析的結(jié)果顯示P＜0.05時(shí)，表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[4]。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)這300例患者進(jìn)行綜合診斷的結(jié)果 對(duì)這300例患者進(jìn)行綜合診斷的結(jié)果顯示，有114例患者患有活動(dòng)性肺結(jié)核，其余的186例患者均未患有活動(dòng)性肺結(jié)核。

2.2 對(duì)這300例患者進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果在114例被確診患有活動(dòng)性肺結(jié)核的患者中，進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果呈陽(yáng)性的患者有95例，呈陰性的患者有19例，進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的真陽(yáng)性率為85.71%。在186例未患有活動(dòng)性肺結(jié)核的患者中，進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果呈陰性的患者有149例，呈陽(yáng)性的患者有37例，進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的的真陰性率為89.78%。這表示進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的敏感度為87.02%，特異度為89.78%。

2.3 影響T-SPOT.TB試驗(yàn)結(jié)果的因素 對(duì)T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行單因素分析和logistic多因素回歸分析顯示，年齡、性別及基礎(chǔ)疾病等因素均與T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果無(wú)關(guān)。詳見(jiàn)表1、表2。

表1 導(dǎo)致進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果呈假陰性的影響因素[n（%）]

表2 導(dǎo)致進(jìn)行T-SPOT.TB試驗(yàn)的結(jié)果呈假陽(yáng)性的影響因素[n（%）]

3 討論

相關(guān)的調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)目前約有500萬(wàn)活動(dòng)性肺結(jié)核患者。臨床研究表明，活動(dòng)性肺結(jié)核患者越早得到確診，其治愈率就越高。過(guò)去，臨床上常采用痰液涂片檢查和TST檢查等方法診斷活動(dòng)性肺結(jié)核，但診斷的敏感度和特異度較低。近年來(lái)，隨著臨床診斷技術(shù)的不斷發(fā)展，T-SPOT.TB試驗(yàn)在診斷活動(dòng)性肺結(jié)核中得到了廣泛的應(yīng)用，且取得了良好的效果。

本次研究的結(jié)果證實(shí)，用T-SPOT.TB試驗(yàn)診斷活動(dòng)性肺結(jié)核的臨床效果顯著，具有較高的敏感度和特異度，且受患者的性別、年齡和基礎(chǔ)疾病等因素的影響較小。

[1] 盧青純,唐小燕,熊恬園,黃驥翀,楊旻,童翔,范紅. T-SPOT.TB試驗(yàn)在活動(dòng)性結(jié)核診斷中的價(jià)值及其影響因素分析[J]. 中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志,2014,05:522-526.

[2] 藺詠梅,江自成,皇甫彤,候軒,張久聰,辜依海. T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)AB抗原檢測(cè)結(jié)果對(duì)結(jié)核感染患者診斷意義探討[J]. 臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,20:1674-1678.

[3] 葉綏艷,劉曉鶯,樊海燕. T-SPOT.TB聯(lián)合降鈣素原檢測(cè)在結(jié)核感染臨床診斷中的應(yīng)用分析[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版),2016,08:119-122.

[4] 阮琰,嚴(yán)紅梅,林偉,唐偉偉,熊麗君,林劍東,陳曉紅. 結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)、PPD、CRP在兒童結(jié)核診治的臨床意義[J].中外醫(yī)療,2016,20:1-5.