甲基強的松龍預處理大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓的相關分析

孟志強　郭斌　吳若丹　白云鶴　周三國

【摘要】 目的 通過對比分析熱休克蛋白（HSP27）表達的變化并探討甲基強的松龍（MP）在預防脊髓缺血再灌注損傷脊髓中的最佳用藥時間。方法 30只 SD大鼠， 分為甲、乙、丙、丁、戊組， 每組6只。甲組暴露腹主動脈， 無其他治療；乙、丙、丁、戊組關閉30 min主動脈造成脊髓缺血再灌注損傷， 乙組在損傷前30 min尾靜脈注射生理鹽水， 丙、丁、戊組分別與損傷前30、60、180 min尾靜脈注射生理30 mg/kg的MP。甲組于術后、其他組于損傷后180 min行免疫組化染色檢測， 觀察對比各組HSP27的相對含量。結果 HSP27相對含量比較， 乙組和戊組比較， 差異無統計學意義（P>0.05）；丙組和丁組比較， 差異無統計學意義（P>0.05）；丙組和丁組的HSP27表達強于乙組和戊組， 比較差異均具有統計學意義（P<0.05）。結論 在脊髓缺血再灌注損傷前30 min應用MP， 可減輕脊髓缺血再灌注損傷， 提升HSP27的表達強度， 具有極高的應用價值。

【關鍵詞】 熱休克蛋白；大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓；甲基強的松龍

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.01.214

脊髓缺血再灌注損傷指的是脊髓功能沒有在去除脊髓缺血因素后恢復正常， 嚴重情況下脊髓神經元發生不可逆的遲發性死亡。作為一種保護性蛋白， HSP27具有廣泛且關鍵的作用， 能增強細胞在不利環境下的適應能力。相關的研究證實[1]， MP可增強急性脊髓損傷局部脊髓組織中的HSP27表達， 但其脊髓缺血再灌注損傷局部脊髓組織中HSP27表達的影響研究較少。本研究旨在通過對比分析HSP27表達的變化并探討MP在預防脊髓缺血再灌注損傷脊髓中的最佳用藥時間[2， 3]。現報告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 選用由某動物實驗中心提供的30只純種SD大鼠作為研究對象， 均為雄性， 4月齡， 平均體重（252±18）g。隨機將其分為甲、乙、丙、丁、戊組， 每組6只。甲組暴露腹主動脈， 無其他治療；乙、丙、丁、戊組關閉30 min主動脈造成脊髓缺血再灌注損傷， 乙組在損傷前30 min尾靜脈注射生理鹽水， 丙、丁、戊組分別與損傷前30、60、180 min尾靜脈注射生理30 mg/kg的MP。

1. 2 動物模型制作及標本制備 脊髓缺血再灌注損傷動物模型通過關閉主動脈的方式建立[4， 5]， 腹腔麻醉以6 ml/kg注射7%水合氯醛完成。按照無菌操作打開腹腔， 暴露主動脈， 于右腎動脈分支下、左腎動脈分支， 夾閉腹主動脈， 停止血流， 維持30 min。甲組大鼠于術后、其他組大鼠于缺血再灌注后180 min處死大鼠， 取圓錐上l cm處的脊髓做常規石蠟橫切片， 每個標本4張， 3張備用， 1張行免疫組化染色檢測。

1. 3 組織學檢查 每只大鼠取1張切片行免疫組化染色， 采用計算機圖像分析系統測量， 400倍光鏡下6個不同視野中的染色陽性物質的吸光度A， 以吸光度表示HSP27的相對含量。

1. 4 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件對數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；免疫組化陽性物質吸光度A， 用LSD分析組間差異。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

組間吸光度值差異用LSD分析， 乙組和戊組差異無統計學意義（P>0.05）， 丙組和丁組差異無統計學意義（P>0.05）， 且丙組和丁組的HSP27表達強于乙組和戊組， 比較差異均具有統計學意義（P<0.05）。

3 討論

有多種途徑和因素可導致脊髓缺血再灌注損傷， 歸納包括：①細胞內Ca2+在興奮性氨基酸的誘導下大量堆積， 引發介導神經細胞的凋亡；②細胞膜的組成成分（酶、RNA、DNA）與細胞內形成的氧自由基共價結合， 引發細胞膜功能和結構的變化；③白細胞在白細胞介素-1、白細胞介素-8以及細胞間黏附分子-1水平升高的情況下， 其不斷聚集并相互粘附， 引發炎癥。臨床上尚無治療脊髓缺血再灌注損傷的特效藥， MP、地塞米松可在損傷早期有效減輕炎癥反應。近年來， 不斷有治療脊髓缺血再灌注損傷的新藥， 比如強力霉素、右羥嗎喃、尼莫地平、放線菌酮環己酰亞胺等， 盡管在促進神經功能恢復上有所療效， 但其他療效并不明顯， 有待進一步研究。而MP的應用較為廣泛， 其療效明顯， 其抗炎作用是氫化可的松的4倍、鹽皮質激素的5倍。MP是一種合成糖皮質激素， 不僅能抗氧化、抗炎， 還能減少興奮性氨基酸的釋放和細胞內Ca2+的水平， 在脊髓缺血再灌注損傷的臨床治療中具有廣泛的應用， 但學界對MP在預防脊髓缺血再灌注損傷的作用研究尚少。

HSP27是一種小分子熱休克蛋白， 能保護細胞， 增強細胞的適應力， 可用染色陽性物質的吸光度A表示其表達強度， 學界通常以HSP27的表達強度來量化MP的療效。在本次研究中， HSP27表達強度比較， 乙組和戊組差異無統計學意義（P>0.05）， 丙組和丁組差異無統計學意義（P>0.05）， 且丙組和丁組的HSP27表達強于乙組和戊組， 比較差異均具有統計學意義（P<0.05）。

綜上所述， 在脊髓缺血再灌注損傷前30 min應用MP， 可減輕脊髓缺血再灌注損傷， 提升HSP27的表達強度， 具有極高的應用價值。

參考文獻

[1] 齊兵獻.參附注射液對大鼠脊髓缺血再灌注損傷NF-κBp65和IκB-α影響的實驗研究.甘肅中醫學院， 2012.

[2] 周若南.甲基強的松龍上調缺血再灌注損傷脊髓熱休克蛋白27表達的劑量研究.鄭州大學， 2010.

[3] 張子峰， 白玉樹， 侯鐵勝， 等.甲基強的松龍與鈣蛋白酶抑制劑對大鼠缺血再灌注損傷脊髓保護作用比較.中國矯形外科雜志， 2011， 19（12）：1026-1029.

[4] 孟志強.甲潑尼松龍預干預脊髓缺血再灌注損傷對Caspase-3表達的影響.鄭州大學， 2011.

[5] 王文剛， 夏磊， 劉國強， 等.早期應用甲基強的松龍上調受損脊髓細胞內hsp27蛋白的表達醫藥論壇雜志， 2007， 28（3）：6-8.

[收稿日期：2015-07-17]