A型肉毒毒素對神經病理性疼痛模型大鼠P物質含量的影響

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A型肉毒毒素對神經病理性疼痛模型大鼠P物質含量的影響

張曉英1，楊國棟2，潘萬龍1

(1.川北醫學院基礎醫學院;2.川北醫學院附屬醫院，四川南充637000)

【摘要】目的:研究A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTX-A)對神經病理性疼痛模型大鼠P物質(substance P，SP)含量的影響。方法: 5 ％福爾馬林50 μL皮下注射于大鼠額區及顳區，建立疼痛模型。BTX-A組局部皮下注射10 U/kg BTXA，同時設立生理鹽水組及空白對照組，放射免疫法測定SP含量。結果:生理鹽水組SP含量高于空白對照組(P＜0.05)，BTX-A組低于生理鹽水組(P＜0.05)。結論: BTX-A可能通過抑制感覺通路神經肽-SP的釋放減輕神經病理性疼痛癥狀。

【關鍵詞】A型肉毒毒素;神經病理性疼痛; P物質

肉毒毒素是由革蘭陽性厭氧肉毒桿菌(clostridium botulinum)產生的一種神經毒素，其中毒力最強的是A型肉毒毒素(botulinum toxin type A，BTXA)，其最早應用于試驗研究及臨床。BTX-A藥理機制與膽堿能神經末梢SNAP-25蛋白(synaptosomeassociated protein-25)結合，抑制乙酰膽堿釋放，減少肌肉收縮和痙攣相關，故其已廣泛用于治療肌肉活動過度性疾病及美容除皺等領域。近年來，BTX-A在神經病理性疼痛中的臨床研究也得到了人們的關注，但其機制尚在研究階段［1-7］。本研究通過測定神經病理性疼痛模型大鼠P物質(substance P，SP)含量變化，對其止痛機理進行初步研究。

1　材料與方法

1.1材料

健康雌性SD大鼠30只，體重(180±40)g，購自蘭州陸軍總院實驗動物中心; BTX-A由蘭州生物制品研究所提供; SP測試盒購自上海第二軍醫大學神經生物教研室; FJ2008型全自動γ放射免疫計數器(西安二六二廠);甲醛(山西康寶生物制品股份有限公司)。

1.2方法

分組、建模及檢測:30只成年SD大鼠隨機分為空白對照組(n =10)，5％福爾馬林50 μL皮下注射于20只大鼠額區及顳區，建立福爾馬林疼痛模型。疼痛發作后2 h分別給予生理鹽水0.05 mL、BTX-A 10 U/kg皮下注射于額區、顳區，每日1次，連續6 d。至第6天，注射2 h后取腦干(主要包括三叉神經脊束核和三叉神經腦橋核)及三叉神經節。根據試劑盒說明，測定SP的含量。

1.3統計學分析

2　結果

大鼠皮下注射福爾馬林后出現前肢頻繁搔頭、爬籠次數及往返運動增多。生理鹽水組腦干及三叉神經節內SP含量高于空白對照組(P＜0.05)，BTXA組與空白對照組無統計學意義(P＞0.05)，低于生理鹽水組(P＜0.05)。各組腦干及三叉神經節內SP含量比較，見表1。

表1　各組腦干及三叉神經節內SP含量比較(±s，n)

表1　各組腦干及三叉神經節內SP含量比較(±s，n)

* P＜0.05，與空白對照組比較; #P＜0.05，與生理鹽水組比較。

組別　(只)　腦干SP(pg/mL)三叉神經節SP(pg/mL)空白對照組10　1.42 +0.37　0.91 +0.70生理鹽水組　10　4.73 +2.14*　3.08 +0.54*BTX-A組　10　1.48 +0.57#　1.07 +0.61#

3　討論

BTX-A由一條重鏈和一條輕鏈組成，是肉毒桿菌毒素的7個分型(A、B、C、D、E、F、G)中最早被提純為結晶的蛋白酶，生產工藝最成熟。近年來報道了BTX-A對偏頭痛、緊張性頭痛、叢集性頭痛、帶狀皰疹后遺神經痛、肌筋膜疼痛綜合征及術后疼痛綜合征［1-7］。成愛霞等［8］報道給予38例慢性每日頭痛患者BTX-A 50 U，44例對照組患者給予利多卡因加潑尼松龍5 mL(2％利多卡因3 mL +醋酸潑尼松龍75 mg×2 mL)。結果顯示BTX-A對慢性每日頭痛患者治療顯示出了較好的效果，明顯減少頭痛發作天數、減輕頭痛程度，而且作用持久、不良反應輕微，對生活質量也有所改善。肉毒毒素治療組治療后僅l例(2.6％)患者出現眉毛下垂，2例(5.2％)出現注射點疼痛，無任何患者出現頸項痛、頸強直、上瞼下垂、感覺減退及其他不良反應，對照組中有6 例(13％)患者出現注射點疼痛。王晉榮等［9］也有相似報道，且表明療效可維持6個月，患者不良反應輕微。汪保華等［10］報道30例偏頭痛患者BTX-A總有效率達96.7％，與對照組口服尼莫地平片的總有效率76.7％，差異有統計學意義(P＜0.05)。宋金輝等［11］在彩超水囊引導下BTX-A聯合紅外偏振光治療慢性偏頭痛患者，結果顯示發作臨床療效及不良反應優于BTX-A治療組及紅外偏振光治療組，值得進一步研究后進行臨床推廣。BTX-A能緩解由肌肉痙攣引起的疼痛，但當肌肉張力恢復正常后，其止痛作用仍然很明顯。即BTX-A對由肌痙攣和非肌痙攣引起的疼痛均有效。這表明它的止痛作用尚存在其它的機制［12］。神經病理性疼痛可通過神經遞質的釋放(如SP、神經激肽、降鈣素基因相關肽、作用于血管的腸內多肽等)引起神經源性癥，作用于外周神經血管系統引起中樞敏化，產生神經病理性疼痛。SP作為速激肽家族中的一員，主要存在于脊髓背根神經節及初級傳入纖維［13-16］。位于三叉神經半月節內的SP能神經元以中小型為主，且SP能神經元的向心纖維終末集中在腦干三叉神經尾側脊束核內，在某些因素的刺激(如外周傷害性刺激)作用下可釋放SP。SP在下丘腦含量的多少除與外周傷害性刺激外，還與神經細胞合成速度有關，即SP屬肽類神經遞質，合成較為緩慢且無重復吸收，使傷害性信息持續傳人，導致短時間內SP含量減少。SP具有多種生物學效應，如致痛、降壓、血管擴張和毛細血管通透性增加等，而且還可以通過作用于免疫細胞引起神經源性炎癥反應。SP前體生成后與乙酰膽堿共存神經末梢的囊泡，BTX-A與囊泡上SNAP-25的C-末端相結合，致其囊泡不能釋放，同時也抑制SP的釋放，從而減輕神經病理性疼痛癥狀［17-18］。

本研究結果顯示，神經病理性疼痛的大鼠模型出現前肢頻繁搔頭、爬籠次數及往返運動增多，提示模型制備成功。生理鹽水組腦干及三叉神經節內SP含量高于對照組，BTX-A組與對照組比較無統計學差異，但低于生理鹽水組。這提示BTX-A可通過抑制感覺通路神經肽(如SP的釋放)來減輕神經病理性疼痛癥狀。

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(學術編輯:楊健)

The change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A

ZHANG Xiao-ying1，YANG Guo-dong2，PAN Wan-long1

(1.School of Basic Medicine，North Sichuan Medical College; 2.Department of Gastroenterology，Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College，Nanchong 637000，Sichuan，China)

【Abstract】Objective: To detect the change of substance P in neuropathic pain rats injected subcutaneously by botulinum toxin type A.Methods: Besides control group，neuropathic pain rats triggered by 5 ％ formalin subcutaneously injected into frontal and temporal areas，then they had been respectively treated with 0.9 ％ NaCl (n =10)and 10 U/kg BTX-A (n =10)for 6 days.All of groups were detected the content of substance P(SP)by radioimmunoassay.Results: The content of SP increased significantly in saline group than that in control group (P＜0.05)，but decreased significantly in BTX-A groups than in saline group(P＜0.05).Conclusion: BTXA could inhibit SP releasing from sensory pathways to relieve the symptoms of neuropathic pain.

【Key words】Botulinum toxin type A; Neuropathic Pain; Substance P

通訊作者:楊國棟，E-mail: ygd_ld2003@163.com

作者簡介:張曉英，(1980-)，女，山西太原人，博士，講師，主要從事A型肉毒毒素對疼痛模型作用機制的研究。

基金項目:四川省教育廳重點項目(14ZAO194);川北醫學院科研發展重點培育項目(CBY13-A-ZP21)

收稿日期:2014-09-30

doi:10.3969/j.issn.1005-3697.2015.02.08

【文章編號】1005-3697(2015)02-0163-03

【中圖分類號】R378.8

【文獻標志碼】A

網絡出版時間: 2015-5-1 01∶33網絡出版地址: http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20150501.1333.005.html