惡性卵巢上皮性腫瘤組織中Gab2蛋白的表達變化及意義

惡性卵巢上皮性腫瘤組織中Gab2蛋白的表達變化及意義

王哲1，劉欣2

(1濰坊醫學院，山東濰坊261000；2濰坊市人民醫院)

摘要：目的觀察惡性卵巢上皮性腫瘤組織中Grb2協同結合蛋白2(Gab2)蛋白的表達變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法對惡性卵巢上皮性腫瘤組織(75例份)、良性卵巢上皮性腫瘤組織(20例份)、正常卵巢組織(20例份)中的Gab2蛋白進行檢測。結果惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白的陽性表達率分別為61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢組織中3例呈弱陽性(陽性表達率為0)；組間Gab2陽性表達率相比，P<0.05；惡性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽性表達率與良性卵巢上皮性腫瘤組織及正常卵巢組織相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2陽性表達率與正常卵巢組織相比，P>0.05。Gab2蛋白陽性表達與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學分級、FIGO分期及淋巴結轉移相關(P均<0.05)。結論 Gab2蛋白在惡性卵巢上皮性腫瘤組織中高表達，其高表達可能預示著該腫瘤侵襲性高、預后差、易復發。

關鍵詞：卵巢腫瘤；惡性卵巢上皮性腫瘤；卵巢癌；Grb2協同結合蛋白2蛋白

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.023

中圖分類號：R737.31文獻標志碼：B

收稿日期：(2015-07-11)

通信作者：劉欣

惡性卵巢上皮性腫瘤發病隱匿，發病機制尚不清楚，診斷及治療效果不理想。在人類惡性腫瘤中，DNA的擴增是導致癌基因活化的一種普遍機制。Grb2協同結合蛋白2(Gab2)基因定位于染色體長臂11q14.1，而11q13～11q14.1段的擴增則常發生于人類的惡性腫瘤中[1]。研究[2]發現，約15%的惡性卵巢上皮性腫瘤患者存在Gab2基因組的擴增，其中漿液性囊腺癌細胞的Gab2 mRNA和多種卵巢癌細胞系的Gab2蛋白呈過度表達。本研究采用免疫組織化學PV-9000二步法對惡性卵巢上皮性腫瘤組織中的Gab2蛋白進行了檢測，觀察其表達變化，并探討其意義。

1材料與方法

1.1標本來源2012～2015年濰坊市人民醫院病理科保存的經病理檢查確診的惡性卵巢上皮性腫瘤組織75例份(漿液性卵巢上皮性癌30例份，黏液性卵巢上皮性癌24例份，子宮內膜樣癌12例份，透明細胞癌9例份)，良性卵巢上皮性腫瘤組織20例份，正常卵巢組織20例份。75例份惡性卵巢上皮性腫瘤組織的組織學分級為G1級27例份、G2級23例份、G2級25例份，FIGO分期為Ⅰ期18例份、Ⅱ期21例份、Ⅲ期24例份、Ⅳ期12例份。

1.2受檢標本Gab2蛋白檢測方法采用免疫組化PV-9000二步法。兔抗人Gab2多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，免疫組化檢測試劑盒PV-9000、DAB顯色試劑盒、PBS購自北京中杉金橋生物技術有限公司。具體操作參照說明書進行，用PBS液代替一抗作為陰性對照。Gab2蛋白定位于細胞質。根據陽性細胞所占百分比及著色強度分別計分。先在低倍鏡下尋找細胞著色最強區域，然后選5個高倍視野(200×)，各計數100個細胞，陽性細胞<10%計0分、10%～25%計1分、26%～50%計2分、>50%計3分；細胞著色弱計1分，著色中等計2分，著色強計3分；上述兩分值相加得0分為陰性(-)、1～2分為弱陽性(+)、3～4分為陽性(++)、5～6分為強陽性(+++)，++、+++判為陽性。

1.3 統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計數資料比較用χ2檢驗及Fisher確切概率法。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織、正常卵巢組織Gab2蛋白的表達比較惡性卵巢上皮性腫瘤組織、良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白的陽性表達率分別為61%(46/75)、15%(3/20)，正常卵巢組織中僅3例呈+(陽性表達率為0)；組間Gab2蛋白陽性表達率相比，P<0.05；惡性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽性表達率與良性卵巢上皮性腫瘤組織及正常卵巢組織相比，P均<0.05；良性卵巢上皮性腫瘤組織Gab2蛋白陽性表達率與正常卵巢組織相比，P>0.05。

2.2Gab2蛋白表達與惡性卵巢上皮性腫瘤臨床病理參數的關系Gab2蛋白陽性表達與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學分級、FIGO分期及淋巴結轉移相關(P均<0.05)，與病理類型無關(P>0.05)，詳見表1。

表1　 Gab2蛋白表達與惡性卵巢上皮性腫瘤

3討論

Gab2基因是一個重要的癌癥相關基因。在對乳腺癌、卵巢癌、白血病和黑色素瘤的研究中，Gab2基因被鑒定為一個潛在的致癌基因[3，4]。本觀察結果表明，Gab2蛋白在61.33%的惡性卵巢上皮性腫瘤組織中高表達，而在正常卵巢組織中不表達或僅呈弱表達，提示Gab2與惡性卵巢上皮性腫瘤的發生密切相關，同時支持Gab2的原癌基因特性。Gab2蛋白是一種支架協調蛋白，這類蛋白含有多個蛋白結合位點，可形成多蛋白復合體，為信號的連接和傳導提供一個平臺[5]。通過創傷修復和侵襲小室試驗測定，Gab2蛋白高表達可以促進細胞的遷移和侵襲、下調E-鈣黏蛋白的表達，與之相反，將Gab2沉默后，則抑制細胞的遷移和侵襲、上調E-鈣黏蛋白的表達[2]。Gab2蛋白的作用主要通過激活PI3K信號通路來完成。Gab2/PI3K/ZEB1信號通路可以作為治療由Gab2所誘發惡性卵巢上皮性腫瘤的一個新靶點。

Fleuren等[6]在研究Gab2與乳腺癌的關系中發現，Gab2蛋白高表達于腫瘤發展階段的后期。本觀察發現，Gab2蛋白陽性表達與惡性卵巢上皮性腫瘤組織學分級、FIGO分期及淋巴結轉移相關，表明Gab2蛋白高表達可能預示著該腫瘤侵襲性高、預后差、易復發。

參考文獻：

[1] Schwab M. Amplification of oncogenes in human cancer cells [J]. Bioessays, 1998,20(6):473- 479.

[2] Wang Y, Sheng Q, Spillman MA, et al. Gab2 regulates the migratory behaviors and E-cadherin expression via activation of the PI3K pathway in ovarian cancer cells[J]. Oncogene, 2012,31(20):2512-2520.

[3] Bocanegra M, Bergamaschi A, Kim YH, et al. Focal amplification and oncogene dependency of Gab2 in breast cancer [J]. Oncogene, 2010,29(5):774-779.

[4] Horst B, Gruvberger-Saal SK, Hopkins BD, et al. Gab2-mediated signaling promotes melanoma metastasis[J]. Am J Pathol, 2009,174(4):1524-1533.

[5] Sarmay G, Angyal A, Kertesz A, et al. The multiple func-tion of Grb2 associated binder (Gab) adaptor/scaffolding protein in immune cell signaling [J]. Immunol Lett, 2006,104(1-2):76-82.

[6] Fleuren ED, O′ Toole S, Millar EK, et al. Overexpression of the oncogenic signal transducer Gab2 occurs early in breast cancer development [J]. Int J Cancer, 2010,127(6):1486-1492．