5種洗劑類醫療機構制劑微生物限度檢查方法驗證

5種洗劑類醫療機構制劑微生物限度檢查方法驗證

劉廣楨，張冕，胡文紅，國明

(山東省食品藥品檢驗研究院，山東 濟南 250101)

摘要：目的建立5種洗劑類醫療機構制劑微生物限度檢查法。方法細菌、真菌和酵母菌計數方法的驗證分別采用平皿法、培養基稀釋法和薄膜過濾法；控制菌檢查法的驗證分別采用直接接種法、培養基稀釋法和薄膜過濾法。結果1種洗劑的細菌、真菌和酵母菌計數可采用培養基稀釋法，控制菌檢查可采用直接接種法。另4種洗劑的細菌、真菌和酵母菌計數和控制菌檢查均需采用薄膜過濾法。結論5種洗劑類醫療機構制劑微生物限度檢查法均通過驗證。

關鍵詞：醫療機構制劑；洗劑；微生物限度檢查；方法驗證

作者簡介：劉廣楨，男，主管藥師，研究方向：藥品檢驗，E-mail：l_guangzhen@sina.com

中圖分類號：R927.1文獻標識碼：A

Validation of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions

LIUGuang-zhen,ZHANGMian,HUWen-hong,GUOMing

(ShandongInstituteforFoodandDrugControl,Jinan250101,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method of microbial limit test for 5 kinds of hospital preparation with lotions.MethodsThe validation on plate count method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with bacterium count,total combined molds and yeasts count.The validation on routine method,culture medium diluting method and membrane filtration method was conducted in accordance with absence of specified microorganisms.ResultsThe one kind can be tested with culture medium diluting method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and can be tested with routine method on absence of specified microorganisms.The other 4 kinds can be tested with membrane filtration method on bacterium count,total combined molds and yeasts count,and absence of specified microorganisms.ConclusionThe validation results of microbial limit tests of 5 kinds of hospital preparation with lotions met the requirement.

Key words:Hospital preparation;Lotions;Microbial limit test;Validation of method

醫療機構制劑指醫療機構臨床需要而市場上沒有供應的品種，具有用量小、貯存期短、市場供應缺乏、臨床必需等特性。醫療機構制劑須經藥品監督管理部門批準后方可配制，并須按照規定進行質量檢驗，包括有效性和安全性指標的檢驗。其中微生物限度檢查是醫療機構制劑一項重要的安全性指標。

由于醫療機構制劑種類比較復雜，藥效成分經常具有抑菌作用，其中溶液型制劑中又經常添加抑菌劑防止微生物污染。所以常用的微生物限度檢查方法(平皿法)不完全適用于醫療機構制劑的微生物限度檢查，有必要對醫療機構制劑中的每個品種的微生物限度檢查方法進行驗證，確保其采用的方法適合于微生物限度檢查的要求。本文選取了5種常用的溶液型洗劑類醫療機構制劑，包括1種中藥制劑和4種化學藥制劑，參照有關文獻[1～3]，分別對其不同的微生物限度檢查法進行了驗證，確定了最佳的微生物限度檢查方法。

1儀器與材料

1.1儀器HFsafe-1200型生物安全柜(上海力申科學儀器有限公司)；Equinox集菌儀(默克化工技術有限公司)；CH-4103型恒溫培養箱(伊孚森生物技術有限公司)。

1.2樣品復方伸筋洗劑、苯酚樟腦洗劑、復方酮康唑洗劑、止癢洗劑和復方間苯二酚洗劑均為山東省內各家醫療機構提供。

1.3培養基營養肉湯培養基(批號：130717)和營養瓊脂培養基(批號：140514)均購于北京三藥科技開發公司；改良馬丁培養基(批號：3102637)、玫瑰紅鈉瓊脂培養基(批號：3102345)、膽鹽乳糖培養基(批號：3102534)和pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液(批號：3103696)均購于廣東環凱微生物科技有限公司。

1.4菌種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、白色念珠菌、銅綠假單胞菌0代凍干菌種均購于中國食品藥品檢定研究院。

2方法[1～3]

2.1菌液的制備按照《中國藥典》2010年版附錄要求制備。

2.2供試液的制備取本品10 mL，加pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100 mL，振搖，制成1∶10的供試液。

2.3細菌計數、真菌和酵母菌計數

2.3.1檢查方法

2.3.1.1平皿法取1∶10的供試液1 mL，注入平皿中，加入培養基，按規定進行培養，計數。

2.3.1.2培養基稀釋法取1∶10的供試液1 mL，分別注入5個平皿中，每皿中0.2 mL，加入培養基，按規定進行培養，計數。

2.3.1.3薄膜過濾法取1∶10的供試液1 mL，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100 mL/膜，共3次，取出濾膜，菌面朝上貼于培養基平板上，按規定進行培養，計數。

2.3.2方法驗證按《中國藥典》2010年版采用平皿法、培養基稀釋法和薄膜過濾法，用規定的5株菌逐一進行驗證，每個供試品均進行3次獨立的平行試驗，各菌回收率均應大于70%。

2.4控制菌檢查

2.4.1檢查方法

2.4.1.1直接接種法取1∶10的供試液10 mL，加至增菌培養基100 mL中，按規定進行培養，觀察結果。

2.4.1.2培養基稀釋法取1∶10的供試液10 mL，加至增菌培養基200 mL中，按規定進行培養，觀察結果。

2.4.1.3薄膜過濾法取1∶10的供試液10 mL，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗濾膜，每次100 mL/膜，共3次，加入增菌培養基100 mL，按規定進行培養，觀察結果。

2.4.2方法驗證按《中國藥典》2010年版采用直接接種法、培養基稀釋法和薄膜過濾法，用規定的2株菌分別進行驗證，驗證組應檢出相應控制菌。

3結果

細菌計數、真菌和酵母菌計數驗證結果見表1。控制菌檢查驗證結果見表2。

4討論

由于醫療機構制劑經常具有抑菌作用，因此需要采用適宜的方法消除或降低其抑菌作用，使其對供試品中污染菌的生長無抑制作用或其抑制作用可以忽略不計，從而保證微生物限度檢查的準確性。建立驗證的方法時，應在科學性的基礎上，堅持簡便易行的原則，避免不必要的浪費。微生物限度檢查法由簡到繁的順序為平皿法或直接接種法、培養基稀釋法和薄膜過濾法。

本次試驗中復方伸筋洗劑含有地黃、川芎、紅花和荊芥等中藥材，有一定的抑菌作用，細菌計數采用平皿法有干擾，但其抑菌作用較弱可采用培養基稀釋法就可消除抑菌活性。本次試驗中樟腦苯酚洗劑(含樟腦和苯酚)、復方酮康唑洗劑(含酮康唑、苯甲酸、水楊酸)、止癢洗劑(含水楊酸、薄荷腦和苯酚)、復方間苯二酚洗劑(含間苯二酚、硼酸和苯酚)為抑菌作用較強的品種，細菌計數、真菌和酵母菌計數采用平皿法和培養基稀釋法均有干擾，需要采用薄膜過濾法才能消除抑菌活性[4～6]。

表1　細菌計數、真菌和酵母菌計數驗證的回收率(%)

表2　控制菌驗證的結果

控制菌檢查中因有增菌培養，很多在細菌計數時有抑菌的品種(如復方伸筋洗劑)，在控制菌檢查中采用直接接種法就能檢出試驗菌。對抑菌活性較強的品種(如樟腦苯酚洗劑、復方酮康唑洗劑、止癢洗劑、復方間苯二酚洗劑)，采用直接接種法和培養基稀釋法均有干擾，需要采用薄膜過濾法才能取得好的效果[7～10]。

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