GC法同步測定桉薄溶液中桉油精、薄荷腦的含量

GC法同步測定桉薄溶液中桉油精、薄荷腦的含量

董宏偉，呂淑榮，劉哲林

(煙臺綠葉動物保健品有限公司，山東 煙臺 264003)

摘要：目的建立中藥制劑中桉油精、薄荷腦的含量測定方法。方法采用氣相色譜法，ZB-WAX彈性石英毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；環己酮為內標。結果桉油精和薄荷腦的線性范圍分別為0.146～2.555 mg·mL-1(R2=0.999 9)、0.198～3.465 mg·mL-1(R2=0.999 8)；平均加樣回收率分別為99.8%、99.5%(n=9)，桉油精與薄荷腦的最低定量限濃度分別為6.27、9.90 μg·mL-1；最低檢測限濃度分別為1.044、1.65 μg·mL-1。結論方法簡便、快速、準確、分離度好、其他成分無干擾，適用于復方制劑中多成分的質量控制。

關鍵詞：氣相色譜；桉薄溶液；桉油精；薄荷腦

基金項目：國家星火計劃項目(No.2013GA740037)；煙臺市科技發展計劃(No.2012055)

作者簡介：董宏偉，男，研究方向：藥物分析，E-mail：weid8848@163.com

中圖分類號：R927.2文獻標識碼：A

Determination of eucalyptol and menthol in eucalyptol and menthol solution by GC

DONGHong-wei,LVShu-rong,LIUZhe-lin

(YantaiLvyeAnimalHealthProductsLimitedCompany,Yantai264003,China)

Abstract：ObjectiveTo establish a method for the derermination of eucalyptol and menthol in Chinese medicine preparations.MethodsGas chromatography,the ZB-WAX elastic quartz capillary column(30 m×0.25 mm,0.25 μm);Cyclohexanone as internal standard.ResultsThe linear range of eucalyptol and menthol was 0.146～2.555 mg·mL-1 (R2=0.999 9),0.198～3.465 mg·mL-1 (R2=0.999 8);The average sample recovery rates were 99.8%,99.5%,respectively (n=9),the minimum quantitative limit concentrations of eucalyptol and of menthol were 6.27,9.90 μg·mL-1;The minimum detection limit concentrations were 1.044,1.65 μg·mL-1.ConclusionThe method was simple,rapid,accurate,good separating degree,no interfere with other ingredients and was applicable to many ingredients in the compound preparation of quality control.

Key words:GC;Eucalyptol and menthol solution;Eucalyptol;Menthol

桉油為桃金娘種植物藍桉和樟科植物或上述兩科同屬其他植物經蒸餾得到的揮發油，桉油中主要含桉油精，還含有檸檬烯、α-蒎烯等成分。桉油[1，2]具有抗菌消炎、平喘鎮痛、止咳祛痰、減輕水腫等作用。薄荷腦為唇形科植物薄荷的新鮮莖和葉經水蒸氣蒸餾、冷凍、重結晶得到的一種飽和的環狀醇。其味辛，性涼，能疏風、清熱，可治外感風熱、頭痛、咽喉腫痛、牙痛、皮膚風癢、口瘡[3，4]。桉薄溶液包含桉油與薄荷腦2種成分能用于改善和治療由病毒感染或免疫應激等引發的雞的呼吸道癥狀，療效確切?！吨袊幍洹?000年版(一部)采用復合柱對桉油精進行測定[9]，方法實用性低，本方法采用ZB-WAX柱對2種成分同時進行分離與檢測，方法快速、靈敏，分離度好、專屬性好，能有效地控制藥品質量。

1儀器與試藥

Agilent 7890N氣相色譜儀：FID檢測器，A.01.12.1色譜工作站；SGH-300高純氫氣發生器(北京東方精華科技苑科技有限公司)；色譜柱彈性石英毛細管柱(30 m×0.25 mm，0.25 μm)；梅特勒-托利多十萬分之一電子分析天平；桉油精對照品(批號：110788-201105，含量99.9%，中國食品藥品檢定研究院)；薄荷腦對照品(批號：110728-200506，含量99.9%，中國食品藥品檢定研究院)；桉薄溶液(煙臺綠葉動物保健品有限公司)，試劑：環己酮，無水乙醇均為色譜純。

2色譜條件

色譜柱：ZB-WAX彈性石英毛細管柱 (30 m×0.25 mm，0.25 μm)；載氣：N2，1.0 mL·mL-1；氫氣，40 mL·mL-1；空氣，400 mL·min-1；分流比：10∶1；進樣口溫度：250 ℃，檢測器溫度300 ℃；程序升溫：初始80 ℃，每分鐘5 ℃升至120 ℃，每分鐘10 ℃升至180 ℃，保持3.5 min；內標法。

3試驗方法與結果

3.1內標溶液的制備取環己酮適量，加無水乙醇溶解并稀釋制成每1 mL含12.5 mg的溶液，搖勻，作為內標溶液。

3.2供試品溶液的制備精密量取本品1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，再精密量取1.0 mL，置10 mL容量瓶中，精密加入內標溶液1.0 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻。

3.3對照品儲備溶液的制備 精密稱取桉油精對照品、薄荷腦對照品適量，加無水乙醇溶解并稀釋制成含桉油精7.301 mg·mL-1及薄荷腦9.901 mg·mL-1的對照品儲備液，備用。

3.4陰性對照溶液的制備取按處方中未加桉油精與薄荷腦的空白溶液，按“3.2”項下制備方法，制成陰性對照溶液。

3.5 線性關系的考察 分別精密移取0.2、0.5、1.0、1.5、3.5 mL對照品儲備液于10 mL容量瓶中，加內標溶液1.0 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，分別取1 μL進樣，記錄色譜圖，以桉油精、薄荷腦與內標的峰面積比值為縱坐標(Y)，濃度(C)為橫坐標(X)，分別繪制標準曲線，得回歸方程分別為：Y桉油精=1.114 8X-0.001 6，R2=0.999 9，桉油精濃度在0.146～2.555 mg·mL-1范圍內，線性關系良好；Y薄荷腦=1.134 7X+0.003 5，R2=0.999 8，薄荷腦濃度在0.198～3.465 mg·mL-1范圍內，線性關系良好。

3.6精密度試驗取桉油精濃度為0.730 mg·mL-1和薄荷腦濃度為0.990 mg·mL-1的對照品溶液，重復進樣6次，記錄峰面積，分別計算2種成分與內標的峰面積比值(A/A內標)，桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.24%和1.2%(n=6)。

3.7重復性試驗取同一批樣品，按樣品測定項下的方法重復測定6次，結果桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.36%、1.8%(n=6)。

3.8穩定性試驗取同一批樣品溶液，分別在室溫下放置0、2、4、6、8、12 h后測定，結果按桉油精、薄荷腦的RSD分別為0.38%、1.7%，說明樣品溶液在12 h內測定，結果穩定。

3.9加樣回收率試驗取已知含量的樣品溶液9份，并加入適當的低、中、高對照品溶液，按樣品測定法測定桉油精、薄荷腦含量，分別計算回收率，結果見表1。

表1　回收率測定結果( n=9，%)

結果表明，本方法的回收率較好，桉油精的回收率分別在99.4%～100.2%，薄荷腦的回收率在98.1%～100.7%之間，相對標準偏差分別為0.28%與0.86%，本測定方法能滿足桉薄溶液中桉油精與薄荷腦的含量測定。

3.10定量限與檢測限 采用 “信噪比法”來確定本研究的定量限和檢測限，取線性標準溶液適量，采用加無水乙醇逐步稀釋法進行稀釋，當進樣濃度為6.27、9.90 μg·mL-1時，取1 μL進樣，連續進樣3次，得到桉油精、內標、薄荷腦信噪比平均值分別接近10.0，可以以此濃度為定量限；繼續稀釋進樣，當進樣濃度為1.044、1.65 μg·mL-1，連續進樣3次，得到桉油精、內標、薄荷腦信噪比平均值接近3.0，可以以此濃度為檢測限。

3.11耐用性試驗經不同色譜柱考察和溶液穩定性考察，以及柱溫，進樣口溫度和檢測器溫度考察，表明本方法耐用性良好，適用于桉薄溶液中兩組分的含量測定。

3.11.1色譜柱的影響 選用3根不同商品規格的色譜柱，測定同一批樣品的含量，計算含量值的RSD%分別為1.3、1.7、1.6。結果表明，樣品用不同的PEG色譜柱測定含量，桉油精、薄荷腦與內標均可有效分離，說明方法耐用性良好。

3.11.2柱溫的影響[5，6]柱溫對分離的影響主要為影響主峰的出峰時間，溫度越高，主峰出峰時間越短，在第一階段為80 ℃時，桉油精主峰桉油精與雜質峰能保證基線分離，第二階段120 ℃時薄荷腦主峰與雜質峰能保證基線分離，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.3進樣口溫度的影響[7，8]進樣口溫度高于柱溫時，桉油主峰桉油精與雜質峰能夠保證基線分離，薄荷腦與雜質分離良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.11.4檢測器溫度的影響[10]檢測器溫度高于進樣口溫度時，桉油主峰桉油精與雜質峰能夠保證基線分離，薄荷腦與雜質分離良好，且各溫度下含量的RSD小于2.0%。

3.12樣品含量測定結果 經過方法學驗證，本含量測定方法操作簡便、準確度高、重現性好，能更有效地控制產品質量。因此應用該方法對10批樣品(批號：110701～110715)，按照前述方法采用內標法進行含量測定，結果見表2。

表2　樣品含量測定結果

4討論

4.1系統適應性試驗在本試驗氣相色譜系統下，分別吸取樣品測定用混合對照品溶液、供試品溶液與陰性對照溶液各1 μL，記錄色譜圖(見圖1)。可見2種組分與內標物均能夠較好地分離，陰性無干擾。該系統適應性結果見表3。

A

B 圖3　空白對照色譜圖 A.混合對照品溶液；B.供試品溶液

名稱保留時間(min)柱效分離度桉油精4.2831098322.65環己酮5.5351489118.67薄荷腦11.5155223636.59

4.2內標物的選擇曾試用過環己酮、萘、聯苯、水楊酸甲酯等，因樣品揮發性成分多，結果以環己酮的保留時間及分離效果最合適。

4.3柱溫的選擇 桉油精、環己酮和薄荷腦的沸點相差比較大，柱溫低時，薄荷腦的保留時間過長，柱溫高時，桉油精與雜質不能有效分離，經采用兩段程序升溫方式能滿足兩種成分的同時分析。

4.4由10批次產品測定結果，暫定本品的含量限度為：本品每1 mL含桉油以桉油精(C10H18O)計，不得少于84.0 mg，含薄荷腦(C10H20O)不得少于88.0 mg。

參考文獻：

[1] 陳宇.桉葉揮發油制劑開發及其抗慢性支氣管炎的藥效研究[D].天津:天津大學，2008.

[2] 宋希明.植物精油的藥用價值與特性[J].海峽藥學，2007，19(5)：88-91.

[3] 李祥，刑文峰.薄荷的化學成分及臨床應用研究進展[J].中南藥學，2011，9(5)：362-365.

[4] 陳光亮，姚道云，汪遠金，等.薄荷油藥理作用和急性毒性的研究[J].中藥藥理與臨床,2001,17(1):10-12.

[5] 侯美琴，陳佩蕃.氣相色譜法測定清涼油中三組分的含量[J].藥物分析雜志，1990,10(3)：160-161.

[6] 孫秀燕，劉桂，王素娟.GC-MS、GC法在“十滴水”制劑質量分析研究中的運用[J].分析實驗室，2002,21(5)：36-38.

[7] 閻正，劉鵬巖,張建申.氣相色譜法測定冠心膏中樟腦，薄荷腦，異龍腦，龍腦的含量[J].色譜,1998,16(5)：411-413.

[8] 許毅，張思群.采用氣相色譜法同步測定糖果內薄荷醇和桉葉油含量[J].食品科學,2003,24(2)：113-115.

[9] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2000年版(一部)[S].北京:化學工業出版社,2000.

[10] 于軍亭，馬桂霞，王珊珊.復方薄荷腦軟膏中α-蒎烯和桉油精的含量測定[J].山東建筑大學學報，2007,22(4)：304-306.