胃癌組織中Ki-67、p63和p16的表達變化及意義

甘亞平，李敏才，朱小龍，蔣偉，廖文莉，李素琴，黃海燕(湖北科技學院基礎醫學院，湖北咸寧43700;咸寧市第一人民醫院)

胃癌組織中Ki-67、p63和p16的表達變化及意義

甘亞平1，李敏才1，朱小龍1，蔣偉1，廖文莉1，李素琴1，黃海燕2
(1湖北科技學院基礎醫學院，湖北咸寧437100;2咸寧市第一人民醫院)

摘要:目的觀察胃癌組織中Ki-67、p63和p16的表達變化，并探討其意義。方法收集58例胃癌患者手術切除標本，另取胃鏡檢查組織學相對正常的胃黏膜組織標本20份作為正常對照。采用免疫組化法檢測胃癌組織及正常胃黏膜組織中Ki-67、p63和p16表達。結果Ki-67、p63和p16在正常胃黏膜組織中的陽性表達率分別為25%(5/20)、15%(3/20)、60%(12/20)，在胃癌組織中的陽性表達率分別為76%(44/58)、78%(45/58)、40%(34/ 58)。胃癌組織中Ki-67和p63陽性表達率顯著高于、p16陽性表達率顯著低于正常胃黏膜組織(P均＜0.05)。胃癌組織中Ki-67蛋白陽性表達率與浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。p63陽性表達率與胃癌的浸潤深度與分化程度有關(P均＜0.05)，與淋巴結轉移無明顯相關性。p16陽性表達率與淋巴結轉移有關(P＜0.05)，與浸潤深度、分化程度無明顯關系。在胃癌組織中，Ki-67表達與p63表達呈正相關(r =0.560，P =0.044); Ki-67表達與p16表達無相關性(r =0.472，P =0.111)。結論胃癌組織中Ki-67、p63和p16表達明顯升高，三者表達與胃癌的浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移有關; Ki-67、、p63、p16可作為胃癌診斷的選擇性標記物。

關鍵詞:胃腫瘤; Ki-67蛋白; p63蛋白; p16蛋白

原發性胃癌是多種致癌因子協同作用的結果［1］。探討胃癌中致癌因子的蛋白表達、作用機制及相互之間的聯系，對闡明胃癌的發生、發展、生物學行為與病理特征具有重要價值［2］。同時檢測特異性生物學標記物有助于胃癌早期診斷、治療和預后評估［3］。2014年6月～2015年3月，我們采用免疫組化法檢測了Ki-67、p63和p16蛋白在胃癌組織中的表達，分析三種蛋白在胃癌發生、發展過程中的意義，旨在為胃癌臨床診斷和治療提供依據。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集2012年1月～2014年12月咸寧市第一人民醫院病理科檢查的58例胃癌患者手術切除癌組織標本，患者男38例、女20例，年齡34～63歲、平均55歲。切片均經HE染色觀察并確診為腺癌，按WHO標準分類診斷標準，經病理學檢查確診，其中高中分化35例，低分化23例;侵及漿膜及漿膜以外者22例，未及漿膜者36例(其中侵及黏膜8例，侵及肌層28例);有淋巴結轉移22例，未見淋巴結轉移36例。另取胃鏡檢查組織學相對正常的胃黏膜組織標本20例作為正常對照，其中男12例、女8例，年齡平均50歲。兩組年齡、性別等具有可比性。

1.2胃癌組織及正常胃黏膜組織中Ki-67、p63、p16蛋白表達檢測標本均經10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋。APES涂膠后切片，按免疫組化試劑盒說明書操作進行免疫組化染色。一抗用Ki-67、p63、p16單克隆抗體孵育過夜，PBS洗后用二抗孵育;最后用二氨基聯苯胺(DAB)顯色液顯色;蘇木素復染，中性樹脂封片，光學顯微鏡下觀察細胞染色情況。結果判定: Ki-67表達定位于胞核，陽性細胞為棕黃色顆粒。p63表達于細胞質，陽性細胞呈黃色或棕黃色顆粒，彌漫性或局灶性分布。p16表達于細胞質和細胞核，陽性細胞呈彌漫性或局灶性分布。染色結果按每張切片的陽性細胞數比例及著色深淺計分，行半定量分析。光學顯微鏡下(×400)計數5個視野中的100個細胞，采用雙評分法，陽性細胞百分率評分≤10%為0分、11%～24%為1分、25%～50%為2分、51%～75%為3分、＞75%為4 分;染色強度評分:無顯色為0分、淺棕黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。將上述2項得分相加，≥2分為陽性。

1.3統計學方法采用SPSS16.0統計軟件。組間兩兩比較用χ2檢驗，Ki-67與p63、p16蛋白表達的

關系采用Spearman相關性分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1 p16、p63和Ki-67在正常胃黏膜組織和胃癌組織中的表達Ki-67、p63和p16在正常胃黏膜組織中的陽性表達率分別為25%(5 /20)、15%(3 /20)、60%(12 /20)，在胃癌組織中的陽性表達率分別為76%(44 /58)、78%(45 /58)、40%(34 /58)。胃癌組織中Ki-67和p63陽性表達率顯著高于、p16陽性表達率顯著低于正常胃黏膜組織(P均＜0.05)。

2.2 Ki-67、p63和p16表達與臨床病理特征的關系Ki-67蛋白的陽性表達率與浸潤深度、分化程度、淋巴結轉移有關(P均＜0.05)。p63陽性表達率與胃癌的浸潤深度與分化程度有關(P均＜0.05)，與淋巴結轉移無明顯相關性。p16陽性表達率與淋巴結轉移有關(P＜0.05)，與浸潤深度、分化程度無明顯關系。見表1。

表1　Ki-67、p63和p16在胃癌組織中的表達與臨床病理特征的關系

2.3 Ki-67與p63、p16蛋白表達的相關性在胃癌組織中，Ki-67表達與p63表達呈正相關(r =0.560，P = 0.044); Ki-67表達與p16表達無相關性(r = 0.472，P =0.111)。

3　討論

Ki-67抗原是一類與細胞周期相關的增殖細胞核抗原，抗原定位于第10號染色體上。細胞在G0期無表達，G1期出現，S期和G2期逐漸增加，M期達高峰［4］，在細胞分裂晚期很快消失。腫瘤組織中Ki-67異常表達是腫瘤細胞增殖表現，是反映腫瘤病變和分級的敏感指標。因此Ki-67表達情況可反映腫瘤細胞的增殖活性、增殖指數、分化程度、浸潤轉移等，與預后密切相關，常作為評判腫瘤預后參考指標之一［5］。Ki-67表達陽性表示細胞處于細胞分裂期，可能對化療藥物治療更有效，其原因是細胞毒性化療藥物只對進入細胞分裂周期(G1、S、G和M期)的腫瘤細胞有效［6］。本研究結果顯示，在正常胃黏膜組織中僅有少量細胞Ki-67蛋白表達陽性，隨著胃癌病變的發展，其陽性細胞數量增多，腫瘤組織中Ki-67表達率高，提示腫瘤細胞增殖活性與癌變的浸潤進展、分化程度、淋巴結轉移有明顯相關性。

p63是抑癌基因P53家族一員［7］。P53基因分為野生型和突變型兩種:野生型P53基因為抑癌基因，能引起細胞周期阻滯、誘導細胞凋亡和促進分化;突變型P53則抑制野生型P53活性，引起細胞轉化、促進細胞癌變。p63轉錄產物主要為TAp63和△Np63，TAp63具有抑癌作用，△Np63可能與細胞周期調節、細胞凋亡、增殖及細胞遷移有關［8］。目前對p63蛋白研究較少，有研究表明p63在有增殖活性的鱗狀上皮組織中表達，細胞分化程度低組織中表達上調［9，10］。本研究結果顯示，p63蛋白在正常胃黏膜組織中表達較少，在腫瘤組織中表達上調，可解釋為p63蛋白功能的多樣性，與腫瘤分化程度相關，與浸潤深度、淋巴結轉移無明顯關系。相關性分析發現p63與Ki-67表達呈正相關。

p16蛋白是重要的細胞周期抑制因子。p16屬于抑癌基因CDKN2A家族，阻斷細胞由G期進入S期從而抑制細胞的增殖［11］。在多數腫瘤中存在p16失活(如基因缺失或高甲基化)或基因變異，失去對細胞周期的調控作用，使細胞無控制性增殖［11］。本研究中p16蛋白在胃癌組織中表達降低與p16基因失活有關，提示p16可作為胃癌病變診斷的輔助指標之一。

p16、P2l等基因是一類抑制細胞增殖的重要抑癌基因，在腫瘤的發生中起重要作用。目前胃癌發生是諸多基因異常表達的結果，包括基因序列改變和基因表達改變，基因表達改變可通過DNA甲基化來實現［12，13］。目前對這些腫瘤相關基因高甲基化的研究還很少，腫瘤相關基因高甲基化的研究可能成為今后胃癌發病研究的新熱點。

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收稿日期:( 2015-05-10)

通信作者:李敏才

基金項目:湖北省科技廳基金項目(2014CFB211);湖北科技學院科研項目(ZX13065，20130927027)。

文章編號:1002-266X(2015)33-0044-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R735.2

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.33.016