RP—HPLC法測定人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的溶出度

秦松　張蓓

【摘要】目的建立RP-HPLC法對人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑溶出度的測定方法。方法采用C₁₈色譜柱，甲醇-水（20：80）為流動相，流速：1.0mL/min，檢測波長320nm，柱溫35℃。結果甲硝唑進樣量在0.4～4.0μg范圍內呈良好線性關系，r=0.9999，平均回收率為99.45%，RSD為0.46%（n=6）；3批次樣品溶出度檢查結果良好。結論本法簡單、準確、重現性高、專屬性強，符合溶出度方法的建立原則，可用于人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑溶出度的測定。

【關鍵詞】人工牛黃甲硝唑膠囊；RP-HPLC法；甲硝唑；溶出度

【中圖分類號】R927 【文獻標識碼】B 【文章編號】2095-0616（2015）21-48-04

人工牛黃甲硝唑膠囊為復方制劑，曾用名是牙痛安膠囊，主要成分是甲硝唑和人工牛黃，外加淀粉和膠囊殼等輔料組成，其中甲硝唑是對大多數厭氧菌有明顯抗炎作用，而人工牛黃起解熱抗炎作用，其制劑是臨床常用的一種抗厭氧菌藥物，用于治療急性智齒冠周炎、局部牙槽膿腫、牙髓炎、根尖周炎等有顯著療效。甲硝唑在此復方制劑的抗炎作用中起主要作用，同時溶出度作為藥品質量的重要參考指標，而目前我國國家藥品標準中未收載其溶出度的檢查項目。所以，為了有效控制藥品質量，本研究采用RP-HPLC法對人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的溶出度測定方法進行考核。

1儀器與材料

1.1儀器

安捷倫1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫）；CPA225D型電子天平（德國賽多利斯）；RCZ-8M型溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）

1.2試藥

人工牛黃甲硝唑膠囊（市售品，規格：甲硝唑0.2g、人工牛黃5mg，ABC三個生產企業與批號分別為：靖宇天池制藥有限公司，20131106、新鄉恒久遠藥業有限公司，20130705），重慶迪康長江制藥有限公司，140226）；甲醇為一級色譜純（美國天地，1410106）；鹽酸為分析純（洛陽市化學試劑廠，140606）；水為高純水（自制）。

1.3對照品

甲硝唑對照品批號為100191-201507，來源為中國食品藥品檢定研究院，其含量為100%。

2方法與結果

2.1色譜條件

色譜柱：Agela Promosil C₁₈柱（4.6 mm×250mm，5μm）；流動相：甲醇-水（20：80）；檢測波長：320nm；流速：1.0mL/min；柱溫：35℃；進樣量：10μL；在此色譜條件下，理論板數按甲硝唑峰計算不低于2000。

2.2溶液制備

取人工牛黃甲硝唑膠囊各1粒，用鹽酸溶液（9→1000）溶解后，稀釋至900mL，搖勻，經0.45μm濾膜過濾，即得供試品溶液。精密稱取甲硝唑對照品20.00mg置100mL容量瓶中，用鹽酸溶液（9→1000）溶解后，稀釋至刻度，即得對照品溶液（0.2000mg/mL）。取空白膠囊殼1粒，加入按處方比例稱取的1粒膠囊量的淀粉輔料和人工牛黃約5mg，然后按供試品溶液的制備方法配制成陰性對照溶液。

2.3系統適用性試驗

在上述色譜條件下，分別取上述制備的對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液注入色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。甲硝唑峰保留時間為8.51min，在此時間對照品溶液和供試品溶液均出現甲硝唑色譜峰，而陰性對照溶液則在此時間段未出現干擾吸收峰，表明在本實驗條件下處方中其他成分對測定無影響。

2.4方法學考察

標準曲線繪制：在上述色譜條件下，精密吸取上述對照品溶液2、5、10、15、20μL，注入液相色譜儀，測得峰面積。以對照品峰面積Y為縱坐標，以折算后按20¨L進樣量的對照品溶液濃度X（μg/mL）為橫坐標（分別為20、50、100、150、200μg/mL），進行線性回歸，得回歸方程為Y=29.680X+1.226，r=0.9999。結果表明，甲硝唑進樣量在0.4～4.0μg范圍內與峰面積有良好線性關系。

精密度試驗：取對照品溶液按上述色譜條件連續進樣6次，測定甲硝唑的峰面積，結果甲硝唑峰面積的RSD為0.32%（n=6），表明該方法的精密度良好。

穩定性試驗：取供試品溶液分別在配制完成后室溫放置0、4、8、12和16h時進樣，測得峰面積RSD為0.45%（n=5），表明供試品溶液在16h內穩定。

加樣回收試驗：精密稱取甲硝唑對照品20.00mg置50mL容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）適量溶解后稀釋至刻度，搖勻后作為對照品貯備溶液（0.4000mg/mL）。精密量取6份已知質量濃度的供試品溶液（0.1947 mg/mL）各5mL，分別置6個10mL容量瓶，再精密量取對照品貯備溶液（0.4000mg/mL）1mL、2mL和3mL各2份分別置上述6個10mL容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000）稀釋至刻度并搖勻，分別進樣測定含量，計算回收率，結果見表1。

2.5溶出度測定和溶出曲線的繪制

按《中國藥典2010年版（二部）》的附錄XC第二法（槳法）操作。量取經脫氣處理的鹽酸溶液（9→1000）900mL，倒入溶出杯，待恒溫至（37℃±0.5℃），以轉速50r/min啟動溶出儀，取人工牛黃甲硝唑膠囊1粒裝入沉降籃，投入溶出杯中并開始計時，分別在第5、10、20、30、40、50分鐘時間點取溶液5mL，用0.45μm濾膜過濾后進樣測定，并在每次取樣后立即補充相同溫度相同體積的鹽酸溶液（9→1000）。經本文的RP-HPLC法測定后計算各時間點的累計溶出百分率，結果見表2。將表2的數據以時間為橫坐標、累積溶出百分率為縱坐標，繪制成溶出曲線。結果見圖2。由溶出曲線可見，樣品在30min時甲硝唑的溶出量達到了90%以上，按照口服制劑溶出度的要求，參考甲硝唑片已有的國家標準的溶出度要求，考慮甲硝唑的體外一體內相關性及不同企業工藝的影響，可確定取樣時間為30min，限度為標示量的80%較為合適。

2.6批次樣品的溶出度檢查

分別取3批次樣品，照上述2.5的方法操作，在30min時取樣5mL，經0.45μm濾膜過濾后進樣測定其溶出度。結果見表3。從3批次樣品的檢查結果可見，此方法測得的結果穩定可靠，溶出度結果良好。

3討論

3.1溶出條件的選擇

在溶出方式的選擇上，一般常用轉籃法和槳法，因試驗藥品為膠囊劑，在使用轉籃法時轉籃易被膠囊碎片堵塞，影響藥物溶出，因此選擇槳法；但因溶出過程膠囊會浮于液面而影響溶出，所以還需要使用沉降籃；槳法常用的轉速為50～75r/min，但考慮到為保證藥品質量，以便對胃動力減弱的患者也能有較好的治療效果，故選用轉速50f/min。在溶出介質的選擇上，因人工牛黃甲硝唑膠囊是一種胃溶型制劑，所以選擇鹽酸溶液（9→1000）作為溶出介質，這與其現行標準的含量測定項溶劑一致。

3.2檢測條件的選擇

據有關研究的文獻報道甲硝唑所用檢測波長有277nm、318nm、320nm、390nm，經比較后選擇320nm波長較為理想，與甲硝唑各制劑的現行國家檢測標準一致。在流動相的選擇上，篩選了不同比例的甲醇-水，并與文獻報道的流動相進行比較，結果顯示甲醇-水（20：80）的流動相成本低，易配制，所得的色譜圖峰形及系統適用性也很好。

3.3本研究方法的優點

上述試驗及一些文獻資料表明，不同廠家生產的人工牛黃甲硝唑膠囊溶出速率存在一定差別，可見在制劑生產工藝上有較大差異。溶出度作為制劑質量控制的一種方式，其目的就是使不同企業生產的同一品種能達到一定程度的生物等效。經本文的試驗驗證，RP-HPLC法測定人工牛黃甲硝唑膠囊中甲硝唑的溶出度，方法簡單、準確、重現性高、專屬性強，可作為人工牛黃甲硝唑膠囊質量評價與控制的有效手段。endprint